铵态氮测量方法-(1)

铵态氮测量方法（2mol•L-1KCl浸提—靛酚蓝比色法）1）方法原理2mol•L-1KCl溶液浸提土壤，把吸附在土壤胶体上的NH4+及水溶性NH4+浸提出来。土壤浸提液中的铵态氮在强碱性介质中与次氯酸盐和苯酚作用，生成水溶性染料靛酚蓝，溶液的颜色很稳定。在含氮0.05～0.5mol•L-1的范围内，吸光度与铵态氮含量成正比，可用比色法测定。2）试剂（1）2mol•L-1KCl溶液称取149.1g氯化钾（KCl，化学纯）溶于水中，稀释至1L。（2）苯酚溶液称取苯酚（C6H5OH，化学纯）10g和硝基铁氰化钠[Na2Fe(CN)5NO2H2O]100mg稀释至1L。此试剂不稳定，须贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。（3）次氯酸钠碱性溶液称取氢氧化钠（化学纯）10g、磷酸氢二钠（Na2HPO4•7H2O,化学纯）7.06g、磷酸钠（Na3PO4•12H2O,化学纯）31.8g和52.5g•L-1次氯酸钠(NaOCl，化学纯，即含10%有效氯的漂白粉溶液)5mL溶于水中，稀释至1L，贮于棕色瓶中，在4℃冰箱中保存。（4）掩蔽剂将400g•L-1的酒石酸钾钠（KNaC4H4O6•4H2O,化学纯）与100g•L-1的EDTA二钠盐溶液等体积混合。每100mL混合液中加入10mol•L-1氢氧化钠0.5mL。（5）2.5µg•mL–1铵态氮（NH4+—N）标准溶液称取干燥的硫酸铵[(NH4)2SO4，分析纯]0.4717g溶于水中，洗入容量瓶后定容至1L，制备成含铵态氮（N）100µg•mL–1的贮存溶液；使用前将其加水稀释40倍，即配制成含铵态氮（N）2.5µg•mL–1的标准溶液备用。3）仪器与设备：往复式振荡机、分光光度计。4）分析步骤（1）浸提称取相当于10.00g干土的新鲜土样（若是风干土，过10号筛）准确到0.01g，置于150mL三角瓶中，加入氯化钾溶液100mL，塞紧塞子，在振荡机上振荡1h。取出静置，待土壤—氯化钾悬浊液澄清后，吸取一定量上层清液进行分析。如果不能在24h内进行，用滤纸过滤悬浊液，将滤液储存在冰箱中备用。（2）比色吸取土壤浸出液5mL(含NH4+—N2µg～25µg)放入50mL容量瓶中，用氯化钾溶液补充至10mL，然后加入苯酚溶液5mL和次氯酸钠碱性溶液5mL，摇匀。在20℃左右的室温下放置1h后（注1），加掩蔽剂1mL以溶解可能产生的沉淀物，然后用水定容至刻度。用1cm比色槽在625nm波长处（或红色滤光片）进行比色，读取吸光度。（3）工作曲线分别吸取0.00、2.00、4.00、6.00、8.00、10.00mLNH4+—N标准液于50mL容量瓶中，各加10mL氯化钠溶液，同（2）步骤进行比色测定。5）结果计算土壤中NH4+—（N）含量（mg•kg-1）=式中：ρ——显色液铵态氮的质量浓度(µg•mL–1)；V——显色液的体积(mL)；ts——分取倍数；m——样品质量（g）。6）注释注1.显色后在20℃左右放置1h,再加入掩蔽剂.过早加入会使显色反应很慢,蓝色偏弱;加入过晚,则生成的氢氧化物沉淀可能老化而不易溶解.硝态氮测定方法（双波长紫外分光光度法）实验原理：利用硝酸根离子在220nm处有较强的紫外吸收这一特性,定量分析了土壤浸提液中的NO3-.溶解的有机物在210nm和275nm处均有吸收,而NO3-在275nm处没有吸收,因此在275nm波长处做另一测量,以校正硝酸盐值.最低检出浓度0.004mg/kg,测定上限为4.000mg/kg,适合高浓度土样浸提液的高倍稀释.试剂：CaSO4(分析纯),量浓度为1mol/L的盐酸(优级纯)溶液,质量浓度为100μg/mL的硝酸盐氮标准贮备液,质量浓度为25μg/mL的硝酸盐氮标准使用液.实验方法标准曲线的绘制：分别取硝酸盐氮标准使用液0.0,0.5,1.0,2.0,3.0,4.0μg/mL置于50mL比色管中,各管中加入1.0mL1mol的盐酸溶液,摇匀,用紫外分光光度计在210nm和275nm处,用1cm石英比色皿测定吸光度.以ΔA=A210-kA275的计算方法求得校正吸光度.（系数k的确定方法分别准确移取10μg/mL硝酸盐氮使用液2.00mL、土壤浸提液2.00mL置于各自的50mL比色管中,用二次蒸馏水定容,摇匀,用1cm的石英比色皿,以二次蒸馏水作参比,在紫外-可见分光光度计上测定吸光值。土壤样品、硝酸盐氮在210nm处有最大吸收,在275nm处吸收较弱,选取210nm、275nm为测量波长和参比波长测定土壤中硝态氮,根据A210-KA275=0的公式进行计算,求得K的平均值。土壤样品测定：称取10.00g新鲜土样,分别置于150mL具塞三角瓶,在三角瓶内加0.2gCaSO4,加100mL二次蒸馏水,于振荡器上振荡15min,放置30min后,倾出上清液,用中速或慢速无氮定量滤纸过滤.吸取滤液50.00mL(视NO3-N的浓度而定)置于50mL比色管中,用水准确稀释至刻度,加1.0mL1mol的盐酸溶液,测量吸光度.结果计算:c=c0*V总*D*1000/M*103式中:c为NO3-N浓度(mg/kg);c0为由曲线查得测定液质量浓度(μg/mL);v总为比色测定液总体积(mL)此处为50ml;D为浸提液分取倍数，若不稀释D=1;M为试样质量(g).1000与103为单位换算数量级。