高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮注射液的有关物质研究

高效液相色谱法测定盐酸纳洛酮注射液的有关物质研究摘要：目的探讨应用高效液相色谱法（HPLC）测定盐酸纳洛酮注射液的有关物质。方法采用自身对照法。色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm，5μm），流动相为1-辛烷磺酸钠溶液与甲醇梯度洗脱；流速1.0ml?min-1；检测波长为229nm；柱温为30℃。结果盐酸纳洛酮降解产物与中间体能够与主峰较好的分离。结论在该色谱条件下，检测结果灵敏、准确、简便，专属性强。关键词：高效液相色谱法；盐酸纳洛酮注射液；有关物质测定盐酸纳洛酮是阿片受体拮抗药，临床临床用于解救麻醉性镇痛药急性中毒，拮抗麻醉性镇痛药的残余作用，解救急性乙醇中毒等[1]。由于本品不稳定，在放置过程中有关物质增加速度快，产品不稳定，因此有必要建立能稳定、准确检测盐酸纳洛酮注射液有关物质变化情况的检测方法。2010版中国药典中对于盐酸纳洛酮注射液，有关物质项下只有检查2，2’-双纳洛酮，为了进一步提升药品质量，参照中国药典、美国药典及英国药典对盐酸纳洛酮注射液有关物质方法进行改进，使其可以很好的检查盐酸纳洛酮注射液的2，2’-双纳洛酮，单个未知杂质及总杂质。该HPLC方法操作简便，结果准确，重复性高。1仪器和试药1.1仪器waters2695四元低压梯度高效液相色谱仪；ODS色谱柱（4.6mm×150mm，5μm），KQ-250DB型超声波清洗器。1.2试药盐酸纳洛酮对照品（批号171239-201106）由购于中国药品生物制品检定所；盐酸纳洛酮注射液（批号：市售品20130801；规格1ml：0.4mg）由江苏恩华药业股份有限公司提供；分析纯试剂包括辛烷磺酸钠、甲醇、氯化钠。2测定方法2.1色谱分析条件色谱柱为ODS色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；流动相：辛烷磺酸钠溶液（取1-辛烷磺酸钠2.0g与氯化钠2.0g，加水1000ml使溶解，摇匀）为流动相A；甲醇为流动相B；按表1进行梯度洗脱；检测波长为229nm；流速1.0ml；柱温30℃；进样量10μl。供试品溶液的色谱图中如有与系统适用性试验溶液色谱图中杂质II（2，2’-双纳洛酮）保留时间一致的峰，其峰面积乘以校正因子0.53，不得大于对照溶液主峰面积1/2（0.5%），其他单个杂质不得大于对照溶液主峰面积的1/5（0.2%），各杂质峰面积之和不得大于对照溶液主峰面积（1.0%）。2.2分析样品的制备供试品溶液：直接取用盐酸纳洛酮注射液作为供试品溶液；自身对照溶液精密量取供试品溶液1ml，置100ml量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。2.3系统适应性验证取盐酸纳洛酮对照品适量，加0.1mol/L盐酸纳洛酮溶液溶解并制成每1ml中含0.2mg的溶液，取10ml，置25ml量瓶中，加0.4%三氯化铁溶液1ml，置水浴中加热10min，放冷，用水稀释至刻度，摇匀，作为含2，2’-双纳洛酮的系统适用性溶液。结果见图1（注：9.251min处峰为主峰，29.185min处峰为2，2’-双纳洛酮峰）。2.4与合成中间体分离度验证分别精密称取中间体Ⅰ～Ⅶ适量，各置100ml量瓶中，加溶剂溶解稀释，制成0.1mg/ml的溶液；精密量取各溶；28.260min为液1.0ml，置100ml量瓶中，加流动相定容，摇匀，即得1μg/ml的中间体混合液，依照有关物质检测方法检测。结果见图2（注：3.102min为中间体Ⅴ；6.076min为中间体Ⅶ；7.400min为中间体Ⅵ；9.793min为纳洛酮主峰；13.895min为中间体Ⅳ；15.641min为中间体Ⅲ；23.269min为中间体Ⅱ；26.191min为中间体Ⅰ；28.260min为2，2’-双纳洛酮峰）。2.5专属性试验空白辅料溶液与供试品分别进样10μl，记录色谱图。结果见图3，4。由结果可知，空白辅料不干扰盐酸纳洛酮主峰及杂质峰的测定。2.6精密度验证取自身对照液，连续测定6次计算得主峰面积的RSD为0.93%，表明该方法重复性较好。2.7稳定性试验将供试品溶液（20130801批）25℃放置，分别于0、2、4、8、12和24h取样后测定，记录色谱图。结果24h内，市售品的主峰面积的RSD为0.12%，2，2′-双纳洛酮面积的RSD为5.0%。表明供试品溶液稳定。3讨论现行中国药典方法与美国药典方法一致，由于中国药典标准要求只检查2，2′-双纳洛酮，所以对主峰前的杂质峰分离度要求不高；供试液色谱图在主峰前有一个很大的包峰，影响杂质之间的分离，在检查盐酸纳洛酮注射液单个杂质及总杂质时，不能得到真实的结果，此外中国药典方法得到的色谱图中，杂质之间不能实现基线分离，分离效果非常差；本关物质测定方法能够很好的分离各个杂质。本有关物质检测方法是在在中国药典方法基础上降低了初始有机相比例，可以减小水峰面积，并与杂质峰分离。在供试品溶液没有杂质的位置设置梯度，使得2，2′-双纳洛酮在中国药典标准的条件下出峰，保证2，2′-双纳洛酮的检查结果可靠，同时准确检测其它杂质，准确监测产品放置过程中杂质变化情况。参考文献：[1]李文?矗?王勇.盐酸纳洛酮的临床应用[J].世界危重病医学杂志，2006（6）：1603-1606.编辑/冯焱