药品QC微生物实验室管理

药品QC微生物实验室管理2/168目录微生物实验室质量管理与保障USP微生物检测技术精要培养基的质量控制和规范化操作菌种管理（保藏、传代、分离和鉴定等）药品微生物检测分析方法的验证3/168第一部分微生物实验室质量管理与保障4/168目录431概述及法规要求WHO微生物实验室管理要求实例质量管理与保障管理2微生物实验室的风险分析5/168无菌检查和微生物限度检查的性质和特点药品微生物的检验结果受很多因素的影响，如样品中微生物可能分布不均匀、微生物检验方法的误差较大等。因此，在药品微生物检验中，为保证检验结果的可靠性，必须使用经验证的检测方法并严格按照药品微生物实验室规范要求进行。药品微生物实验室管理用于指导药品微生物检验实验室的质量控制及质量保证。6/168无菌检查和微生物限度检查的性质和特点这决定了微生物检验质量保证的高要求。药品的无菌和微生物限度检测是指按照一定的检测程序和质量控制措施，确定要求无菌的样品中是否存有活的或者不允许存在的微生物（定性试验——一次检出不得复试），或者确定单位（g/ml）样品中存在微生物的数量（定量试验）7/168相关法规和指南相关法规2010年版《中国药典》一部附录XVIIIG2010年版《中国药典》二部附录XIXQUSP36版1117《MICROBIOLOGICALBESTLABORATORYPRACTICES》WHOTechnicalReportSeries,No.961,2011Annex2《WHOgoodpracticesforpharmaceuticalmicrobiologylaboratories》FDA《药品质量控制微生物实验室检查指南》8/168微生物实验室的风险分析人员风险人员配置不足，不能准确及时完成岗位工作。培训不足，工作人员不能按照SOP要求完成岗位工作。9/168微生物实验室的风险分析环境风险环境洁净度：环境未达标，检验室环境污染导致测试结果阳性。实验室功能区设计不合理，污染无菌室。未对进入微生物实验室的人员进行限制，造成实验室污染。所用消毒剂管理不规范，未进行消毒效果验证，不能有效保证洁净区的微生物控制。10/168微生物实验室的风险分析检测方法风险检测方法的制定不符合法规要求。检测方法未进行确认或验证。11/168微生物实验室的风险分析设备风险用于实验室的设备、仪器和其它装置未按要求进行验证和校准。用于实验室的设备、仪器和其它装置维护不足。实验室的设备、仪器和其它装置的监控未按要求进行。12/168微生物实验室的风险分析试液及培养基风险未对供应商进行审核，不能保证试液及培养基质量。未按照要求储存条件进行储存，对试液及培养基质量产生不良影响。试液及培养基的配制未进行监控或验证，对试液及培养基质量产生不良影响。未对试液及培养基进行质量检查，不能保证试液及培养基质量。试液及培养基有效期管理不规范。13/168微生物实验室的风险分析菌种风险未对供应商进行审核，菌种质量不能保证。未按照要求储存条件进行储存，降低菌种活力。菌种操作（复苏、传代、保存）不规范，造成菌种污染和活力降低。未对保藏菌种进行质量检查，不能保证菌种的纯度及菌种特性。菌种使用有效期管理不规范。14/168微生物实验室的风险分析样品管理风险取样操作管理不规范，污染样品。样品传递、保存、分发不规范，对样品中微生物产生不利影响或直接导致检验结果错误（如需阴凉存放的样品，放在普通环境，导致样品变质或被污染；分发错误，理化检测的样品用于微生物检测）。物品：消毒、灭菌措施未经验证，如灭菌釜温度过高，培养基被破坏，微生物没办法真实表达出来，造成假阴性结果。消毒、灭菌后存放条件不合适或放置时间过长造成污染。15/168微生物实验室的风险分析污物处理管理风险污染物质的处理过程不适当，造成环境和人员的污染。未按操作规程处理剩余样品，特别是剧毒样品、生物样品，导致严重的环境污染，甚至对人员健康造成不良影响。（检验样品、有毒的溶液、用过的培养基、动物实验动物及其排泄物）16/168微生物实验室的风险分析质量保证和质量控制风险实验室未制定内部质量保证和质量控制体系（如偏差的处理、加标样品的使用、重复性检测和操作的熟练度），不能保证每天的检测结果与标准规定的一致性。17/168质量管理和保障管理5.废弃物的处理6.检测报告7.样品8.检测步骤1.人员2.环境3.检验方法的验证4.结果质量保证和操作质量控制9.样品操作和鉴别10.标准物质和标准培养基11.试剂和培养基12.设备微生物实验室管理18/168WHO微生物实验室管理要求实例区域安装级别推荐要求样品接收无级别无级别培养基制备无级别无级别灭菌前室无级别无级别灭菌后室（无菌区域内）GradeBISO5and10cfu/m3无菌测试（操作区）GradeAISO5and1cfu/m3无菌测试（背景区）GradeBISO5and10cfu/m3操作区域布局-119/168WHO微生物实验室管理要求实例区域安装级别推荐要求无菌测试（隔离器）GradeAISO5and1cfu/m3无菌测试（隔离器背景）无级别无级别培养箱无级别无级别计数区域无级别（关键步骤应在层流区域操作）无级别（关键步骤应在层流区域操作）清洁区域无级别无级别操作区域布局-220/168WHO微生物实验室管理要求实例设备类型要求频率培养箱冰箱冷库、烘箱清洁和消毒内部外部每月需要时（3个月）需要时（每年）水浴清洁、消毒、更换用水每月每6月灭菌剂消毒离心机维护清洁和消毒每年每次使用高压蒸汽灭菌器外观检查维护压力容器安全检查按照供应商要求每年（按照供应商要求）每年设备维护-121/168WHO微生物实验室管理要求实例设备类型要求频率安全柜层流柜维护及机械检查每年（按照供应商要求）显微镜维护每年厌氧罐清洁和消毒每次使用培养基分配装置清洁及适当消毒每次使用螺旋震荡器清洁及消毒每次使用实验室清洁和消毒工作区域、地面清洁和消毒其它表面每次使用每3月设备维护-222/168WHO微生物实验室管理要求实例设备类型要求频率标准液体温度计全量程校准单点校准（通常为0点）每3年每年标准热电偶全量程校准标准温度计核对每3年每年工作温度计和工作热电偶标准温度计冰点和/或全量程核对每年湿度计校准每次使用设备校准及频率23/168WHO微生物实验室管理要求实例设备类型要求频率温控设备确认温度的稳定性和均一性温度监控每2年及维修改造后每次使用干热灭菌柜确认温度的稳定性和均一性温度监控每2年及维修改造后每次使用高压蒸汽灭菌器确认温度的稳定性和均一性温度监控每2年及维修改造后每次使用无菌测试A级区——安全柜——隔离器——性能确认——微生物监控——空气流型监控——高效过滤器完整性监控——每年及维修改造后——每次使用——每6月——每6月设备确认及监控-124/168WHO微生物实验室管理要求实例设备类型要求频率单向层流柜——性能确认——微生物监控——空气流型监控——高效过滤器完整性监控——每年及维修改造后——每周——每6月——每6月培养基分配器体积分配检查每次调节及复位移液管体积分配精确性检查定期（依据使用频率确定）厌氧罐/培养箱厌氧指示剂检查每次使用实验室环境空气及表面微生物污染检查（通常使用空气采样器、沉降碟、接触碟、拭子）依据风险评估，建立合适的监测计划。设备确认及监控-225/168WHO微生物实验室管理要求实例标准菌株的使用标准菌株（来源于有资质的供应商）标准储存菌株1代（冻干、液氮、超低温保存）工作菌株日常使用标准储存菌株2代（冻干、液氮、超低温保存）工作菌株日常使用标准储存菌株3代（冻干、液氮、超低温保存）工作菌株日常使用标准储存菌株4代（冻干、液氮、超低温保存）工作菌株日常使用工作菌株日常使用26/168第二部分USP微生物检测技术精要27/168目录1.药典微生物章节概要2.非无菌制剂的微生物检查3.无菌测试4.微生物特性确定，鉴定及菌株分型28/168微生物专家委员会的责任范围负责不负责微生物测试微生物监控水个论（除了设立微生物限度、无菌和细菌内毒素标准）29/168微生物学是开发、生产及成品测试的一部分无菌控制也适用于非无菌产品控制贯穿于一个药物或生物制剂从研发到市场到成品控制的整个过程整个过程中的各种微生物控制的整合将提高最终产品微生物的质量保证USP提供了每个阶段微生物控制程序和指导30/168作为重要组成的微生物控制原料和组分的微生物控制环境的微生物控制生产过程的微生物控制成品的微生物控制人员的微生物控制所有微生物控制的组合微生物控制31/168原料和组分的微生物控制的USP观点及文件61非无菌制剂的微生物检查：微生物计数测试62非无菌制剂的微生物检查：特定微生物的检验1111非无菌药品的微生物属性原料和组分的微生物控制的USP观点及文件32/168环境微生物控制的USP观点及文件1116洁净室和其他受控环境的微生物评估1072消毒剂与杀菌剂1208无菌产品包装-完整性评估环境微生物控制的USP观点及文件33/168过程微生物控制的USP观点及文件1211灭菌与无菌保证1035生物指示剂1209灭菌-化学和物理指示剂，及综合指示剂55生物指示剂-耐受力测试过程微生物控制的USP观点及文件34/168成品微生物控制的USP观点及文件71无菌测试85细菌内毒素测试151热源测试51抗菌有效性测试1222最终灭菌物品-参数放行1207无菌产品包装-完整性评估成品微生物控制的USP观点及文件35/168微生物章节51防腐剂-有效性55生物指示剂–耐受力测试61非无菌产品的微生物检查：微生物测试62控制菌的微生物检查71无菌测试85细菌内毒素测试1035灭菌生物指示剂36/168微生物章节1072消毒剂与杀菌剂1111非无菌产品的微生物属性1112水分活性应用1116洁净室和其他受控环境的微生物评估1117微生物实验室规范1207无菌产品包装-完整性评估37/168微生物章节1208无菌测试-隔离系统验证1209无菌-化学和物理化学指示剂，及综合指示剂1211灭菌和无菌保证1222最终灭菌药品-参数放行1223微生物替代方法验证1227药物的微生物回收率验证1229药典物质灭菌38/168微生物章节1231制药用水2021微生物计数测试-营养和食品补充剂2022控制菌的微生物检查-营养和食品补充剂2023非无菌营养和食品补充剂的微生物评估39/168非无菌制剂的微生物检查-计数方法介绍在此描述的测试允许对在需氧条件下生长的嗜温细菌和真菌进行定量计数这些测试设计用于确定原料药或制剂是否符合已建立的微生物质量标准。当用于这样的目的时，按下列指导进行，包括取样数量，结果诠释。该方法不适用于将微生物作为活性成分的产品。其它可替代的微生物程序，包括自动化方法，如果已证明了其同药典方法的等效性，也可以使用。40/168常规过程避免产品以外的微生物污染（最大的污染源是什么？）去除细菌抑制/真菌抑制性（为什么？）41/168计数方法薄膜过滤法孔径0.45um的滤膜，选择不受样品液干扰的材质，不对微生物的截留产生影响，建议每片薄膜上的样品量为1g，过滤后适当冲洗薄膜平皿计数：平皿浇注法9cm的平皿，加入1ml样品液，15-20ml培养基，浇制温度≤45℃，每种培养基每个稀释度至少2个平皿，可使用更大规格的平皿平皿计数：表面涂布法9cm的平皿，加入45℃左右15-20ml培养基，待凝固，每种培养基每个稀释度至少2个平皿，样品涂布不少于0.1ml，可使用更大规格的平皿最大可能计数法（MPN）用于检测极少数量的微生物，精密度、准确度差，不适用于霉菌42/168生长能力测试和方法适用性生长能力