过敏原特异性IgE检测的临床意义

过敏原特异性IgE检测的临床意义姚煦中国医学科学院皮肤病研究所过敏(变态反应)：由免疫机制介导的高敏反应，是免疫系统对通常情况下无害的物质发生的免疫应答。Johanssonetal.JACI,2004发病率成倍增长，约25-35%，尤其儿童严重患者迅速增多预防和治疗困难IgG介导形成免疫复合物导致很多慢性疾病IgE介导以组胺的释放为基础迅速发病(1h)大量过敏疾病T细胞介导IgG或IgM介导直接针对靶细胞的免疫反应Ⅰ型过敏AllergyⅡ型Ⅲ型Ⅳ型耐受TregIgG/IgA变态反应Th2IgE耐受TregIgG/IgA变态反应Th2IgE肺皮肤系统呼吸器官荨麻疹接触性皮炎特应性皮炎药疹过敏性鼻炎过敏性哮喘过敏性休克……4ALLERGYTheallergymarchRespiratoryproblemsPersistentatopicdermatitisAsthmaGastrointestinaldisordersAtopicdermatitisNasalpolypsOtitismediaIgEIgEIgEIgEIgEWheezeEczema变态反应进程?透皮免疫是致敏的重要途径花生过敏的相关因素：LackG,etal.NEnglJMed.2003;348:977-85.•半岁前的湿疹•含花生油的护肤品•过敏家族史•食用豆奶及相关食品明确过敏原的重要意义明确诊断合理解释有效回避特异性免疫治疗吸入过敏原食物过敏原接触过敏原空气中的吸入过敏原(例如.植物花粉,动物毛发,室内灰尘或虫螨等)过敏原通过胃肠道吸收(例如.鱼、肉、蛋、坚果和蔬菜等)吸入过敏原食物过敏原接触过敏原过敏原皮肤接触（例如：金属饰品、化妆品和生活日用品等）吸入过敏原食物过敏原接触过敏原过敏原I型变态反应的发病机制——IgEBurksAW.Lancet2008;371,9623:1538-1546肥大细胞及其释放的介质BurksA.NEnglJMed2008;358:79-81•特异性IgE皮内注射试验或点刺试验体外特异性IgE变态反应科的过敏原检测点刺试验的优点及局限性•快捷方便•结果直观•新鲜食物优点•应用抗组胺药物限制•激发严重过敏风险•皮肤划痕征•严重皮炎局限点刺液的标准化问题Betv1含量(A-F六个厂家)Derp1和Derp2含量(A-G七个厂家)VanReeR.JACI2007;119:270-277(birch&mite)FockeMetal.ClinExpAllergy2008;38:1400-8(grass)Brunettoetal.Allergy2010;65:184-90(mite)–无标准化SPT检测试剂；–不同厂家，甚至同一厂家不同批次间变异均较大；点刺试验的诊断价值•对于不同的变应原，其诊断价值也有不同：–吸入性变应原：主要的和高效的诊断方法；–食物：可靠性较低,大量不相关的敏感性；–药物：预测价值很低体外过敏原sIgE检测方法放免吸附试验(RAST)酶联免疫试验(EAST)荧光酶免分析(FEIA)免疫捕获分析(REAST)IgGIgAIgMIgDIgE分子量道尔顿150,000160,000900,000185,000200,000血清浓度8-16mg/ml1.4-4mg/ml0.5-2mg/ml0-0.4mg/ml17-450ng/ml%Ig801360.10.002CHO细胞表达百分比38121312免疫球蛋白—CAP，就是一个很小的类似“帽状”的新型固相载体，其内置有多孔性、弹性和亲水性的纤维素粒。由于此粒多孔，增加了与过敏原接触的表面积，可吸附更多的过敏原。—根据固相载体亦可将RASTFEIA分为三类，即试管法、纸片法和CAP法。变应原结合的量：CAP法是纸片法的3倍，试管法的150倍。变应原结合的量越高，检测灵敏度越高。ImmunoCAP法免疫捕获法免疫捕获法原理免疫捕获e.g.ALLERG-O-LIQAnti-IgEHRPStreptavidinAllergenBiotinNon-specificIgEsIgEsIgGAnti-IgEenzyme酶免吸附(荧光酶免)e.g.ImmunoCAP®AllergenSubstrateSubstrateNon-specificIgEsIgGsIgEsIgE福克全自动过敏原定量分析系统ALLERG-O-LIQ-SYSTEM•ALLERG-O-LIQ免疫捕获法是一种由免疫捕获法(REAST)发展而来的检测系统。其原理是将抗人IgE抗体包被在微孔板上捕获样品中的IgE，再用过敏原-生物素试剂与特异性IgE结合，最后通过与显色底物反应将特异性IgE检测出来。只查不问方法不对不会判读该查不查什么都查目前过敏原检测存在的问题MagicLiteAllergenMenuSalesFrequencies(sIgEAllergenproductswithoutmixes)0%10%20%30%40%50%60%70%80%90%100%050100150200250300350No.ofAllergens(Menu)CumulatedTotalTestsStatistics:14allergenscomprises50%oftotaltestssold53allergenscomprises80%oftotaltestssold127allergenscomprises95%oftotaltestssold207allergenscomprises99%oftotaltestssold92allergenscomprises1%oftotaltestssoldi.e.299allergenscomprises100%oftotaltestssoldSource:MagicLiteSalessep1999throughaug20022.0Milltestsold要测试多少过敏原才够?99%的过敏症疾病只是由207种过敏原所组成有关Cutoff值的问题•敏感性=真阳性/（真阳性+假阴性）•特异性=真阴性/（假阳性+真阴性）•PPV（阳性预期值）=真阳性/（真阳性+假阳性）—诊断•NPV（阴性预期值）=真阴性/（假阴性+真阴性）—随访•Cutoff值应根据过敏原种类、研究人群和研究目的（诊断，随访）进行调整。判定结果流程sIgE定量测定值低于NPV95%的cutoff值非致敏物质可再食用致敏食物测定值高于PPV95%的cutoff值明确致敏物质，无需激发试验测定值介于两者之间不能明确，考虑激发试验特应性皮炎的特征T细胞及其释放的细胞因子是AD发病的核心环节什么叫特应性斑贴？•Atopypatchtest(APT)isdefinedasapatchtestproceduretoassessdelayedtypehypersensitivityreactionsagainstthoseproteinallergensknowntoelicitIgE-mediatedtypeIreactionsinatopicpatients•是指用于分析蛋白过敏原引起的迟发型超敏反应的一种斑贴试验，这些蛋白过敏原在特应性体质患者通常引起IgE介导的I型变态反应CurrAllergyAsthmaRep(2013)13:539–544特应性皮炎的发病机制特应性皮炎患者黏膜和皮肤内LCs表面IgE受体水平显著高于正常人GouldHJ,etal.NatRevImmunol.2008特应性皮炎的发病机制NEngJMed(2008)358:1483–94特异性IgE的作用特应性斑贴与普通斑贴和点刺试验种类特应性斑贴普通斑贴点刺反应类型IV型IV型I型适应症特应性皮炎，过敏性鼻炎，哮喘，嗜酸性肠病接触性皮炎，湿疹特应性皮炎，过敏性鼻炎，哮喘，嗜酸性肠病试剂蛋白(吸入和食入抗原)半抗原(接触性)蛋白(吸入和食入抗原)基质凡士林凡士林或水凝胶溶液器材12mm直径斑试器6mm直径斑试器点刺针部位上背部上背部前臂时间48小时和72小时48小时和72小时15分钟判读红斑、丘疹、水疱红斑、丘疹、水疱红斑、风团禁忌激素及免疫移植剂激素及免疫移植剂激素及免疫移植剂特应性斑贴的病理生理•组织活检显示：APT后24小时皮损表现为Th2细胞因子模式，48小时表现为Th1模式，与AD的生理病理特征一致•外周血T细胞发生抗原特异性活化的患者的APT的阳性率高•APT应用后引起皮肤内炎症性树突状表皮细胞的迅速增多•APT应用后导致局部透皮水份尚失显著增多•免疫组化显示对螨抗原APT阳性患者的表皮LCs结合IgE增多JAllergyClinImmunol.1992;90:184–193ClinExpAllergy.1999;29:513–521JAllergyClinImmunol.2003;111:869–874.BrJDermatol.1996;135:560–565JAllergyClinImmunol.2000;105:1008–1016特应性斑贴的应用•特异性IgE阴性的内源性(intrinsic)AD患者具有一定的APT阳性率：7%-66.6%•APT在特异性IgE阳性的过敏性鼻炎和哮喘患者的阳性率较高，提示呼吸道I型反应也合并IV型反应，APT也可以作为呼吸道过敏原的激发试验。JAllergyClinImmunol.2003;111:195–197Allergy.2003;58:426–429Allergy.2004;59:1318–1323Allergy.2003;58:828PediatrAllergyImmunol.2005;17:346–350特应性斑贴的应用•APT与临床的相关性优于SPT•IgE水平高，则APT阳性率高•特应性体质患者APT阳性率高于非特应性体质•皮损在暴露部位的患者的APT阳性率高与非暴露部位皮损患者(69%vs39%)与临床特征的相关性CurrAllergyAsthmaRep(2013)13:539–544•点刺试验•体外特异性IgEI型变态反应特异性IgE根据临床特征合理选择检测方法检测结果进行正确的判读谢谢！