血细胞计数板的使用

血球计数板后期整理：豆儿培养液中酵母菌种群数的动态化是新课标教材必修3稳态境中的学生组实验，该实验通过探究培养液中酵母菌种群数的化，尝试建构种群增长的数学模型并用数学模型解释种群数的化，说明约种群个体数化的种群外部境因素和种群内部因素在该实验中，需要定酵母菌细胞数定细胞数目的方法有显微镜直接计数法板菌落计数法电法等，教材采用的是较简便快直的显微镜直接计数法因，学会使用血球计数板进行准确计数，是该实验否的关键虽然同本的教材推荐使用的血球计数板的规格同，人教建议使用2mm×2mm×0.1mm方格，教推荐使用1mm×1mm×0.1mm方格，但是血球计数板的使用原理和方法是相同的笔者通过近来对该实验的摸索，对血球计数板的使用和命题方面在的一些问题进行了析总结一血球计数板的使用原理显微镜直接计数法是将小待样品的悬浮液置于一种特别的有确定面和容的载玻又计菌器，于显微镜直接计数，然后推算含菌数的一种方法血球计数板是常用的计菌器之一血球计数板是一种专门用于计算较大单细胞微生物的一种仪器，由一块普通载玻厚的特玻的玻中有四条的槽，构个中间的较宽，中间又被一短横槽隔两半，半边面刻有一个方格网方格网刻有9个大方格，中只有中间的一个大方格计数室一大方格的长和宽各1mm，深度0.1mm，容0.1mm3，即1mm×1mm×0.1mm方格的计数板大方格的长和宽各2mm，深度0.1mm，容0.4mm3，即2mm×2mm×0.1mm方格的计数板在血球计数板，刻有一些符号和数(图一)，含义是XB-K-25计数板的型号和规格，表示计数板25个中格0.1mm盖盖玻后计数室的高1/400mm2表示计数室面是1mm2，400个小格，小格面是1/400mm2计数室通常有两种规格一种是16×25型，即大方格内16中格，一中格又25小格另一种是25×16型，即大方格内25中格，一中格又16小格但是管计数室是哪一种构，它们都有一个共同的特点，即一大方格都是由16×25=25×16=400个小方格组116×25型的计数板将计数室放大，它含16中格，一般四角141316四个中方格100个小方格计数图将一中格放大，25个小格计数重复3次，均值计数完后，依列公式计算酵母细胞个数1mL=100个小方格细胞总数/100×400×10000×稀释倍数225×16型的计数板中央大方格以双线等25个中方格，个中方格又16个小方格，供细胞计数用图一般计数四个角和中央的五个中方格80个小方格的细胞数计数重复3次，均值计数完后，依列公式计算酵母细胞个数1mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数cd血球计数板的构25×16a顶面b侧面c放大后的网格d放大后的计数室血球计数板的使用方法骤使用血球计数板计数时，按照如的实验骤进行1镜检计数室在样前，对计数板的计数室进行镜检若有污物，则需清洗，后才能进行计数2样品将清洁燥的血球计数板的计数室盖专用的盖玻，用管稀释后的酵母菌悬液，滴于盖玻边缘，让培养液自行缓缓渗入，一次性充满计数室，防产生气泡，充入细胞悬液的以超过计数室面盖玻之间的矩形边缘宜多余培养液用滤纸去3计数稍待刻约5min，待酵母菌细胞全部沉降到计数室部后，将计数板放在载物的中央，在倍镜找到计数室所在置后，再转换高倍镜察计数并记录血球计数板的使用注意项培养液中酵母菌种群数的动态化实验是一个历时较长7天左右的实验，前一定要做好周密的计划，定程序定时间定人员天采用抽样检法使用血球计数板对酵母菌进行计数，在计数时从以几方面注意1天同一时间，各组本组的试管，用血球计数板计数酵母菌个数，并作记录，连续察7天2从试管中培养液进行计数之前，要将试管轻轻震荡几，样使酵母菌布均匀，防酵母凝聚沉淀，提高计数的代表性和准确性，求得的培养液中的酵母菌数误差小3如果一个小方格内酵母菌过多，难以数清，当对培养液进行稀释以便于酵母菌的计数体方法是摇匀试管，1mL酵母菌培养液，入倍的无菌水稀释，稀释n倍后，再用血球计数板计数，所得数值以稀释倍数以小方格内含有4—5个酵母细胞宜特别是在培养后期的样液需要稀释后计数4活酵母有芽殖象，若芽体达到母细胞大小的一半时，即作两个菌体计数，若芽体小于母细胞一半时1个酵母细胞5对于压在方格界线的酵母菌当计数同侧相邻两边的菌体数，一般采“数线数线，数左线数右线”的原则处理，另两边计数计数时，如果使用16格×25格规格的计数室，要按对角线，左右左右4个中格(即100个小格)的酵母菌数如果规格25格×16格的计数板，除了4个对角方外，需再数中央的一个中格(即80个小方格)的酵母菌数6计数一个样品要从两个计数室中计得的均数值来计算，对个样品计数次，再均值计数时时调节焦距，才能察到同深度的菌体按公式计算1ml或10mL菌液中所含的酵母菌个数7血球计数板的清洁血球计数板使用后，用自来水冲洗，勿用硬物洗，洗后自行晾或用风机，或用95%的醇无水醇丙酮等有机溶剂脱水使燥通过镜检察小格内是否残留菌体或他沉淀物若净，则必须重复清洗直到净四关于血球计数板的命题由于实验培养液中酵母菌种群数的动态化是新教材新增的实验，在各地各类命题中都关注了一实验，并对血球计数板的使用进行了命题设计从近来的各类试题来看，试题考查的角度同，大多数是关于细胞数的计算，有关于使用原理和方法的考查，但有的试题明显血球计数板的实际使用相符合例1在用血球计数板2mm×2mm方格对某一稀释50倍样品进行计数时，发现在一个方格内盖玻片的培养液厚度为0.1mm酵母菌平均数为16，据估算10mL培养液中有酵母菌▲个参考答案2×107解析一例1将整个计数室2mm×2mm方格作实验计数的空间，并按照公式a/4×105×稀释倍数来计算10mL培养液中的酵母菌的数a所计数酵母菌的均数血球计数板的实际操作相符，在有科学性错误例2通常用血球计数板对培养液中酵母菌进行计数，若计数室为1mm×1mm×0.1mm方格，由400个小方格组成，如果一个小方格内酵母菌过多，难以计数，应先▲后再计数若多次重复计数后，算得每个小方格中平均有5个酵母菌，则10mL该培养液中酵母菌总数有▲个参考答案稀释2×108解析例2设计了血球计数板的规格，考查了血球计数板的使用方法，较例1更科学合理根据公式5×400×10000×10＝2×108例3检测员将1mL水样稀释10倍后，用抽样检测的方法检测每毫升蓝藻的数量将盖玻片放在计数室，用吸管吸取少许培养液使其自行渗入计数室，并用滤纸吸去多余液体已知每个计数室由25×16＝400个小格组成，容纳液体的总体积为01mm3现观察到图中该计数室所示abcde5个中格80个小格内共有蓝藻n个，则述水样中约有蓝藻▲个mL参考答案5n×105解析从例3来看，是按照血球计数板的原理进行设计试题的，添了相的图示，题意一目了然按照前面所述的公式，难得确答案酵母细胞个数1mL＝80个小方格细胞总数/80×400×10000×稀释倍数＝n/80×400×10000×10＝5n×105例42008江苏高考314在整个实验过程中，直接从静置的培养瓶中取培养原液计数的做法是错误的，确的方法是▲和▲5实验结束后，用试管刷蘸洗涤剂擦洗血球计数板的做法是错误的，确的方法是▲参考答案4摇匀培养液后再取样培养后期的样液稀释后再计数5浸泡和冲洗解析四例42008江省高考试题第31题的第45两小问试题的设计从血球计数板的实验方法入手，需要对实验操作的误进行判断，起以前关于数的计算的试题，更增强了操作性实际，对血球计数板的使用，少学校并没有真做，而是教师讲解，学生死记硬背，学生只知一，知，是导致学生答题失的要原因综所述，通过对血球计数板的使用和复答题，真体会到，要认真对待新课程中的一个实验课程标准倡导探究性学，力图促进学生学方式的革，引导学生动参探究过程勤于动手和动脑，着重培养创新精神和实践能力要发展学生的科学探究能力，对生物学实验的操作就显得尤必要所以们要转念，让学生真做实验，而是背实验让学生在做中领悟实验的原理，在做中体验实验的方法，在做中感实验的得失，在做中发展探究的能力，样才能真提高学生的科学素养2016.2.1