公开课 动物细胞融合与单克隆抗体

2.2.2动物细胞融合与单克隆抗体植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂分化发育愈伤组织杂种植株温故知新:植物体细胞杂交过程材料1:1970年，有两位科学家做了一个人—鼠细胞融合的实验，以证明细胞膜的流动性。那么，如何实现人—鼠细胞的融合，动物细胞融合后还有什么用途呢？人-鼠(想像图)植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂分化发育愈伤组织杂种植株如何实现人—鼠细胞的融合？阅读教材52页相关内容，思考下列问题：思考：1、动物细胞融合的概念是什么？2、动植物细胞在结构上有何区别？这对它们杂交或融合过程有什么影响？3、植物体细胞杂交诱导原生质体融合常用的方法有哪些？那动物细胞融合呢？4、动物细胞融合与植物原生质体融合的基本原理是否相同？是什么原理？5、动物细胞融合有什么意义？主要应用在哪些方面？6、参照植物细胞杂交过程写出动物细胞融合过程。动物细胞A动物细胞B诱导、融合杂合的细胞有丝分裂2个完整的杂交细胞AB如何实现人—鼠细胞的融合？阅读教材52页相关内容，思考讨论下列问题：小组活动，讨论：7、植物体细胞杂交可得到杂种植株，动物细胞融合后能形成杂种动物个体吗?为什么？植物细胞A植物细胞B去掉细胞壁去掉细胞壁原生质体A原生质体B原生质体融合杂合的原生质体再生出细胞壁杂种细胞细胞分裂分化发育愈伤组织杂种植株获得杂种植株物理、化学方法（同左）灭活的病毒物理（离心、振荡、电激）化学（聚乙二醇）直接诱导细胞融合去壁—原生质体融合—诱导新壁—杂种植株细胞膜的流动性细胞膜的流动性结果诱导方法步骤融合的原理动物细胞融合植物体细胞杂交比较项目植物、动物细胞融合的比较获得杂种细胞小结1材料2：在基因工程中,采用抗原-抗体杂交法检测基因表达产物需用到纯度很高的抗体。材料3：传统获得抗体的方法：把某种抗原反复注射到动物体内，然后从动物血清中分离出所需抗体。用这种方法获得的抗体，不仅产量低，而且抗体的特异性差，纯度低，反应不够灵敏。思考：1、抗体由哪种细胞产生的？2、抗体的传统生产方法的缺陷是什么？3、能否通过相应效应B细胞体外培养的方式大量获得抗体?材料4：效应B淋巴细胞在体内只能由B淋巴细胞增殖分化而来,不再进行分裂,在体外培养的条件下，也很难分裂。提示：1.什么细胞可以产生抗体？2.什么细胞可以无限增殖？思考：用什么方法才能让B淋巴细胞在体外培养时既能产生抗体又能无限增殖?材料5：1975年,米尔斯坦和柯勒首先将抗原注射入小鼠体内，然后从小鼠脾脏中获得能够产生抗体的B淋巴细胞，与小鼠骨髓瘤细胞融合，得到多种杂交细胞。在特定的选择性培养基中可筛选出杂交瘤细胞。经过再次筛选和抗体检测,得到能产生特定抗体的杂交瘤细胞。但纯度达不到100%。对单一杂交瘤细胞进行克隆培养,获得足够数量的细胞，在体外培养或注射到小鼠体内增殖。从细胞培养液或小鼠的腹水中，可提取出大量抗体。（由于产生抗体的细胞来自一个杂交瘤细胞,故产生的抗体称为单克隆抗体.）请根据以上材料,讨论设计单克隆抗体制备过程图.讨论：B淋巴细胞注射特定抗原蛋白骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合多种杂交细胞在具有筛选作用的培养基上培养专一抗体检验阳性克隆上述杂交细胞单克隆抗体的制备过程分开不同杂交细胞，克隆专一抗体，检验阳性细胞专一抗体检验阳性单克隆抗体注射到小鼠体内体外培养单克隆抗体结合单克隆抗体的制备过程，思考以下问题：1、（只考虑两两融合）融合细胞几种类型？2、本过程中进行了两次筛选，目的分别是什么？第1次筛选要淘汰哪些细胞？3、本过程利用的那些技术？4、杂交瘤细胞有何特点？“生物导弹”＝单克隆抗体＋药物诊断试剂用于治疗疾病1、特点：特异性强，灵敏度高，产量高。2、应用：用于运载药物优点：准确，高效，快速单克隆抗体的特点和应用单克隆抗体B淋巴细胞骨髓瘤细胞诱导融合选择培养杂交瘤细胞克隆化培养抗体检测产生所需抗体的杂交瘤细胞体外培养小鼠腹腔内增殖单克隆抗体多种杂交细胞1、该过程中用到了两种技术小结2单克隆抗体的制备过程：动物细胞培养技术动物细胞融合技术2、单克隆抗体的制备过程的三个“一”：一种诱导细胞融合的新方法，产生了一种新细胞，得到了一种优势抗体。灭活病毒诱导融合杂交瘤细胞单克隆抗体优势：特异性强、灵敏度高，可大量制备1、科学家用小鼠骨髓瘤细胞与某种细胞融合，得到杂交细胞，经培养可产生大量的单克隆抗体，与骨髓瘤细胞融合的是（）A.经过免疫的B淋巴细胞B.没经过免疫的T淋巴细胞C.经过免疫的T淋巴细胞D.没经过免疫的Ｂ淋巴细胞A2.动物细胞融合与植物体细胞杂交的比较中，正确的是（）A.诱导融合的方法完全相同B.所用的技术手段基本相同C.操作步骤基本相同D.都能形成杂种细胞D3.单克隆抗体制备过程中培育的杂交细胞是（）A.由小鼠能产生抗体的B淋巴细胞与肝细胞融合B.由小鼠一个B淋巴细胞诱导融合而成C.由小鼠一个B淋巴细胞与肌瘤细胞诱导融合而成D.由小鼠一个B淋巴细胞与骨髓瘤细胞诱导融合而成D4.只能使动物细胞融合的常用诱导方法是（）A．PEGB．灭活的病毒C．电刺激D．离心B5.单克隆抗体制备过程中，骨髓瘤细胞和B淋巴细胞诱导融合后，要用特定培养基筛选出杂交瘤细胞，在这种培养基上不能存活增殖的细胞是（）①淋巴细胞②小鼠骨髓瘤细胞③B淋巴细胞自身融合细胞④小鼠骨髓瘤细胞自身融合细胞⑤杂交瘤细胞A.②④B.①③⑤C.①②③④D.②③C6.“生物导弹”是指（）A.单克隆抗体B.杂交瘤细胞C.产生特定抗体的B淋巴细胞D.在单克隆抗体上连接抗癌药物D有梦想，才会有创造！已成功的动物细胞融合实例有很多，如人—小鼠、人—兔、人—鸡、鼠—兔、鸡—鼠等上百种融合细胞。甚至已成功完成了酵母菌—鸡、人—胡萝卜等细胞的融合。想了解更多信息，可通过网络、电视、杂志等途径关注细胞融合和单克隆抗体的最新信息。生物种间杂交想像图