实验一血常规检查

血常规检查苏州大学附属第二医院检验科郭敏谢晓芳血常规检查血常规检查（bloodroutineexamination）指对外周血中红细胞、白细胞和血小板数量和质量的化验检查，包括RBC、Hb、WBC、PLT及白细胞分类计数（DC），同时注意观察血涂片中红细胞及白细胞形态有无异常，某些情况下应注意观察有无异常细胞或寄生虫等。方法手工法(显微镜)手工计数费事费力,精确性、准确性也较差。血细胞分析仪(三分类,五分类)准确性、精确性、效率大大提高。血细胞分析仪近年来，随着血液分析仪在国内检验科迅速普及，使血常规检验的参数逐渐增多，不仅提高了工作效率和工作质量，而且为临床医生提供了更广泛的参考数据。血液分析仪的白细胞分类计数，先后推出了两分类、三分类、四分类和五分类的仪器。应该说血液分析仪的飞速发展，使血常规检验进入了新阶段，这是医学检验的一大进步。白细胞分类原理1.电阻抗法电阻抗法白细胞计数原理是根据血细胞非传导性的性质,以对电解质溶液中悬浮颗粒在通过计数小孔时引起的电阻变化进行检测为基础,进行白细胞计数和体积测定。白细胞直方图：两个明显分离的峰：左峰：小细胞群（淋巴细胞：35-90fl）,两峰之间：中间细胞群（中间细胞：90-160fl）的分布。右峰：大细胞群（粒细胞：160-450fl）各警示标志说明R1:大血小板，血小板团，有核红细胞，疟原虫，R2：异型淋巴细胞，原幼稚细胞，单核细胞，嗜酸细胞，嗜碱细胞。R3:单核细胞，嗜酸细胞，嗜碱细胞，原幼细胞R4:中性粒细胞过多。异常直方图示例一该标本镜检结果为：中幼粒12％，杆状核34％，晚幼粒18％，中性粒25％，单核3％，淋巴细胞8％。骨髓检查证实为慢性粒细胞白血病。分析与实践异常直方图示例二分析与实践该标本镜检结果为幼稚细胞14％。血小板直方图的应用拟合曲线的概念。血小板的体积分布呈对数分布。所有在拟合区内的均为血小板，在拟合区外的均非血小板。仪器实际测定的范围为2-20FL,而拟合覆盖范围为2-70FL.所有不符合拟合规律的血小板严格意义上均应镜检即均不可靠。2容量、电导、光散射白细胞分类（VCS）体积（volume）：电阻抗原理；电导性（conductivity）：采用高频电磁探针测量细胞内部结构—细胞核、细胞质的比例、细胞内的化学成份；光散射（scantter）：特别具有对细胞颗粒的构造和颗粒质量的区别能力，细胞粗颗粒的光散射要比细颗粒强。3阻抗与射频法通过四个不同检测系统完成：（1）嗜酸性粒细胞检测系统：特殊的pH的溶血剂溶解或萎缩除嗜酸性粒细胞以外的所有细胞。（2）嗜碱性粒细胞检测系统：（3）淋巴、单核、粒细胞的检测系统：(4）幼稚细胞检测系统：四多角度偏振光散射法术四个角度测定散射光的密度：①0°：前角光散射粗略地测定细胞大小；②10°：狭角光散射测细胞结构及其复杂性；③90°：垂直光散射主要对细胞内部颗粒和细胞成份进行测量；④90°：90°消偏振光散射（70°～110°）从这四个角度同时对每个白细胞进行测量，将白细胞分为嗜酸粒细胞、中性粒细胞、嗜碱性粒细胞、淋巴细胞和单核细胞5种。血细胞计数熟悉计数室血细胞计数板系一长方形厚玻片，常用的改良牛氏(Improved-Neubauer)计数板在中央横沟的两边各有一计数室，两计数室结构完全相同。计数室较两边的盖玻片支柱低0.1毫米。因此，放上盖玻片时，计数板与其间距即计数室空间的高为0.1毫米。(见图)在低倍显微镜下可见计数室被双线划分成９个边长为１毫米的大方格。四角的大方格又各分为１６个中方格，这是用来计数白细胞的。中央大方格被划分为２５个中方格，每一中方格又划分成１６个小方格。中央大方格的四角及其中心５个中方格为红细胞或血小板计数范围。(见图)采用“由上至下，由左至右，顺序如弓”的顺序，对压边线细胞采取“数上不数下，数左不数右”的原则计数池充液时应注意的问题1.不可断续充液，2.充液量要适中，3.充液完成后不可挪动盖玻片。一、红细胞计数操作步骤1稀释液的配制：NaCL1.0g、Na2SO4·10H2O5.0g、HgCL20.5g以蒸馏水稀释到200ml。溶解后加伊红水溶液1滴，过滤后用。2取小试管1支，加红细胞稀释液2.0ml。3用清洁干净微量吸管吸取末稍血10ul。4擦去管尖外部余血，轻轻吹入红细胞稀释液底部，再轻吸上层清液喇洗吸管2-3次，然后立即混匀。5充池后待2-3min，用高倍镜依次计数中央大方格四角和正中共5个中方格内的红细胞，按数上不数下，数左不数右的原则进行目视计数。6计算：红细胞数/L＝5个中方格内红细胞数×5×10×201×106参考值男:(4.0～5.5)×1012/L女：（3.5～5.0）×1012/L新生儿：（6.0～7.0）×1012/L临床意义红细胞增多见于：（1）严重呕吐、腹泻、大面积烧伤及晚期消化道肿瘤患者。多为脱水血浓缩使血液中的有形成分相对地增多所致。（2）心肺疾病：先天性心脏病、慢性肺脏疾患及慢性一氧化碳中毒等。因缺氧必须借助大量红细胞来维持供氧需要。（3）干细胞疾患：真性红细胞增多症。注意事项1.釆血时不能挤压过甚，以免混入组织液2.如无上述稀释液时，也可用新鲜配制的等渗盐水代替3.正常数值范围内，两次红细胞计数相差不得超过10%4.不允许血红蛋白浓度来折算红细胞数红细胞减少见于：（1）急性或慢性失血。（2）红细胞遭受物理、化学或生物因素破坏。（3）缺乏造血因素、造血障碍和造血组织损伤。（4）各种原因的血管内或血管外溶血。二、白细胞计数操作步骤取小试管1支，加白细胞稀释液0.38ml。用清洁干净微量吸管取末稍血20ul。擦去管尖外部余血，轻轻吹入白细胞稀释液底部，再轻吸上层清液喇洗吸管2-3次，然后立即混匀。充池后待2-3min，用低倍镜依次计数四角的大方格细胞数，按数上不数下，数左不数右的原则进行目视计数。计算：白细胞数/L＝4个大方格内白细胞数/4×10×20×106参考值成人：4.0—10.0x109/L儿童：5.0-12.0Xl09／L6个月--2岁婴儿：11.0-12.0x109／L新生儿：15.0—20.0xl09／L临床意义1．生理性白细胞增多：(1)胎儿及初生儿白细胞常在10.0—20.0xl09／L。(2)孕妇妊娠5个月以上时，白细胞总数常可达10.5x109／L或更高，后期可达20.0x109／L(3)剧烈的运动和劳动可使白细胞高达12.0x109／L，甚至20.0x109／L以上。(4)暴热和严寒，白细胞总数常有一过性增高,复温后迅速恢复至正常水平。2．病理性白细胞增高：(1)某些细菌性感染所引发的疾病，特别是化脓性球菌引起的局部炎症和全身性感染，如：脓肿、化脓性脑膜炎、肺炎、阑尾炎、中耳炎、扁桃体炎、脓胸、肾盂炎、输卵管炎、胆囊炎及败血症等。(2)某些病毒性感染所导致的疾病：乙型脑炎，传染性单核细胞增多症，麻疹等。(3)严重的组织损伤或坏死：如大手术后，烧伤，急性出血严重创伤，血管栓塞等。(4)过敏反应：如输血反应，药物过敏，急性变态反应性疾病等。(5)中毒反应：如各种药物中毒，农药中毒，重金属中毒，糖尿病酸中毒，妊娠中毒症等。(6)肿瘤及血液病：慢性粒细胞白血病，急性粒细胞白血病等。(7)应用某些升白细胞的化学药物促使白细胞增高，多见于化疗和放疗治疗期间因白细胞数量急剧减少时，需要尽快提升白细胞而进行下一步疗程治疗的患者。病理性白细胞减少：(1)某些病毒性感染：如流感，病毒性肝炎，风疹等。某些细菌性感染，如伤寒和副伤寒。(2)血液系统疾病：如再生障碍性贫血，原发性粒细胞缺乏症。(3)脾功能亢进。(4)理化因素：如放射线，放射性治疗，化学治疗药物，解热镇痛药物等，抗肿瘤类细胞毒性药物等均可导致白细胞数量减少。四、血红蛋白测定一原理血红蛋白被高铁氰化钾氧化成高铁血红蛋白，后者与氰结合形成稳定的棕色氰化高铁血红蛋白(HiCN)，HiCN在规定的波长和液层厚度的条件下具有一定的吸光系数，据此可求出血红蛋白浓度。二方法氰化高铁血红蛋白法操作步骤取全血20ul,加到5mlHiCN试剂中,充分混和,静置5分钟.分光光度计波长540nm处,光径(比色杯内径)1.000cm,以HiCN试剂或蒸馏水调零,测定吸光度(A).计算血红蛋白(g/L)=A*64458/44000*251=A*367.7三参考值男：120-160g/L(12-16g/dL)女：110-150g/L(11-15g/dL)儿童：120-140g/L(12-14g/dL)四临床意义1.血红蛋白减少多见于各种贫血，如急性、慢性再生障碍性贫血、缺铁性贫血等。2.血红蛋白增多常见于身体缺氧、血液浓缩、真性红细胞增多症、肺气肿等。白细胞分类计数一分类细胞名称百分比中性杆状核粒细胞1－５％中性分叶核粒细胞５0－70％嗜酸粒细胞0.5－5％嗜碱粒细胞０－1％淋巴细胞２0－40％单核细胞３－８％方法瑞氏染色法：1.制作血片：将一滴血置玻片一端，用推片以30~45度角匀速推片，制成血片，一张好的血片应具有头体尾三部分。2.将瑞氏染液3~4滴滴在已干的血膜上，10秒钟后再滴上等量缓冲液，用洗耳球轻轻吹匀，染色5分钟。用清水冲洗干净。3.待血片干后，用油镜观察100个白细胞的形态，并计数分类各种白细胞的百分比。分类图谱：中性分叶核粒细胞中性杆状核粒细胞嗜酸性粒细胞嗜碱性粒细胞二临床意义中性粒细胞增高见于各种化脓菌所致的炎症，如大叶性肺炎、流行性脑脊髓膜炎等、减少见于伤寒等疾病，病毒感染如肝炎、流感、疟疾等，再生障碍性贫血，急性粒细胞缺乏症等、嗜酸性粒细胞增高见于支气管哮喘等变态反应性疾病，钩虫病等寄生虫病等、淋巴细胞增高见于结核病等、单核细胞增高见于单核细胞性白血病，疟疾等，某些急性传染病的恢复期。实验操作内容：1.白细胞与血小板计数。2.白细胞分类。病例分析病例1患者女性，28岁，从事导游职业，以头昏、乏力一年余之主诉入院。平时饮食以素食为主，月经不规律，持续时间较长，量较多体检：T36.6℃，P96次/分，R20次/分，Bp14/9.3kPa。贫血貌、皮肤粘膜无出血点，巩膜无黄染，浅表淋巴结不大。胸骨无压痛，心肺无异常。肝脾肋下未触及。实验室检查：1血液一般检查：RBC2.8×1012/L，Hgb78g/L，HCT0.27，MCV73fL，MCH23pg，MCHC270g/L，RDW17.5%；PLT148×109/L，MPV0.10fL，PDW16%；网织红细胞计数2%。WBC8.0×109/L，L20%，E3%，B1%，M6%,Sg65%,St5%;2尿液和粪便检查:未见异常。思考题：1．提出本病例的初步诊断。2．根据实验室检查，提出贫血的形态学分类。3．提出进一步的检查计划。参考答案：1．初步诊断：缺铁性贫血，诊断依据有：患者为年轻女性，有头昏乏力症状和面色苍白体征；平时以素食为主，进食含铁丰富的肉食较少；病史中有慢性失血史，即月经量多，持续时间长；血红蛋白及红细胞减少（Hgb78g/L，RBC2.8×1012/L），红细胞比容减低（HCT0.30）符合贫血诊断；MCV（73fl）、MCH（23pg）及MCHC（270g/L）均减少，RDW，均提示为小细胞低色素性贫血，符合缺铁性贫血。2.为明确诊断，进一步应做的检查：血清铁、转铁蛋白饱和度，总铁结合力；血清铁蛋白；骨髓细胞学检查和骨髓细胞铁染色（查细胞内铁和细胞外铁）。病例2王某某，男，24岁。因皮肤瘀点、淤斑15天，伴发热、咽痛5天，于2000年2月5日入院。15天前无明显诱因出现头面部、躯干、四肢皮肤出血点，未引起注意。5天前渐出现鼻衄、牙龈出血；同时发热，体温达39℃，伴咽痛、咳嗽，少许白痰，无胸痛、尿频、尿急、尿痛。实验室检查：血常规白细胞（WBC）1.2×109/L、分类淋巴细胞89%，中性6%，血红蛋白（Hb）86g/L，红细胞（RBC）3.08×1012/L，MC