大肠菌群计数含MPN表

大肠菌群计数是一种估计悬浮在水溶液中活菌数的方法。一般分几组进行，每一组各有数重复，分别以渐次的方式加入不同量的待测水溶液于培养液中进行培养，随后观察每一组中的试管是否有菌生长，然后再利用统计表估计菌数。例如水中coliform数的测定，将待测水溶液以10ml,1ml及0.1ml的量分别加入各组，每组三重复，经培养后观察coliform是否有生长，统计有菌生长的管数，以统计表统计菌数。活菌的浓度可利用MPN的方式来估计，方式简单，可分为下列两步骤：在培养基中作数个重复稀释；记录有菌生长的试管。若试管中无生长，则可能代表连一支菌都没有生长。从统计观点，MPN这个方法是一种非常没效率的方式，因为每一试管与培养皿表面生长的菌数只有很小部分符合。然而MPN的好处有以下：若菌无法长在固态培养基时，便可使用；若菌的生长的动力学具有很大变化，便可使用：假设某些菌会会立即且迅速的生长，且会在固态培养基产生很大的菌落，且与我们要的菌落接触到或盖过时；因为较少且具高度游动性或快速生长的菌，可能形成小菌落，因而其数量是很多而导致无法计数；假如非我们所要菌存在，或无筛选的方法存在时，便可使用。虽然有污染的细菌可以大量生长，但仍可藉由我们所要看的菌产生特定的产物来估计；假如琼脂或其他固化材料有某些因素会干扰我们计数时，便可使用大肠菌群MPN表正反应试管数MPN/ml（g）95%信赖界线0.1ml0.01ml0.001ml下限上限00030013590103513020---10045201017121110712311111336120113362009136201143372101534421120789220214472212810150230---30023412030139713030264153803104372103117514230312120303803209315380321153044032221035470330240361,300331460712,4003321,1001504,8003331,1001504,800说明：若稀释倍数为10，100，1000倍（即每mlLST中0.1，0.01，0.001ml（g）之检体），且LST均产气（正反应试管数3-3-3），经接种至EC，而其产气试管数为3-1-0，对照MPN为43，即为该检体大肠杆菌MPN数为43/ml（g）。若稀释倍数为原液，10，100倍(即每mlLST中含1，0.1，0.01ml之检体而EC接种之正反应试管数亦为3-1-0，则该检体大肠杆菌MPN数为43÷10=4.3/ml。若稀释倍数为100，1000，10000倍时，结果同上，则该检体大肠杆菌MPN数为43×10=430/ml，其余类推。计算公式：×中间试管之稀释倍数＝MPN／g（ml）平板计数法：采用常规涂布平板法，37℃24h后计数。培养基为营养琼指和伊红美兰琼脂。多管发酵法：采用五管法，培养剂为液体EC培养基。细菌总数：采用AODC法，具体操作按徐怀恕方法进行。活菌直接计数：采用Kogure等方法：向水样加入0.002%萘啶酮酸和0.025%酵母膏，在37℃下培养6-24h，加入甲醛（最终浓度为2%）固定，再按AODC法镜检计数。