乙肝HBV-LP--2

乙肝病毒大蛋白（HBV-LP）--新的血清学肝病标志物北京·热景生物2HBsAgPrevalence8%-High2-7%-Intermediate2%-Low全球约有20亿人曾感染过乙肝其中3.5亿人为慢性HBV感染者每年约有100万人死于HBV感染所致得肝衰竭、肝硬化和原发性肝细胞癌。乙型肝炎流行状况我国HBV感染情况•我国是乙型肝炎高发区，约1.3亿人是HBsAg（乙肝表面抗原）携带者，肝炎患者加起来超过4000万，其中60％为慢性HBV感染患者，每年因此病死亡的人有近50万。4血清标志物检测经典乙肝“两对半”•乙肝表面抗原(HBsAg)•乙肝表面抗体（抗HBs）•乙肝e抗原（HBeAg）•乙肝e抗体（抗HBe）•乙肝核心抗体（抗HBc、抗HBcIgM）•乙肝病毒前S1、S2抗原及抗体•乙肝病毒大蛋白中国乙型肝炎流行现状HBeAg阴性活动期肝炎增多HBV变异株增加HBV的突变率较高HBeAg阴性活动期肝炎诊断现状：–(1)传统“两对半”指标不能反映此类患者HBV复制程度；–(2)缺乏指导合理治疗的指标；–(3)HBVDNA检测不易于各级医疗机构广泛开展；乙肝病毒实验室检测的缺陷抗病毒治疗效果评价何时停用抗病毒药物停药后是否会重新复制活跃乙肝病毒颗粒三种形式：Dane颗粒；管状病毒颗粒；球型颗粒。HBV-LP存在于Dane颗粒及管状颗粒，仅在病毒复制时才能在血流中检测到HBV-LP的分布。根据检测血液中大蛋白的有无，判断病毒携带者体内的HBV病毒是否在进行复制。乙肝病毒大蛋白1995年发现大蛋白具有拓扑结构1996年发现大蛋白具有反式激活病毒复制的作用1997年发现大蛋白前S区对乙肝病毒粒子的形成具有重要作用2002年发现导致肝细胞液泡化及凋亡的主要原因是大蛋白（致病性蛋白）2003年Nature发表文章总结其反式激活机理2007年Hepatology发表文章乙肝病毒感染起始于大蛋白依赖性的结合于硫酸乙酰肝素蛋白聚糖2008年Nature发表文章乙肝病毒大蛋白的酰化多肽可在体内抑制HBV感染2009年AntiviralTherapy发表文章乙型肝炎病毒大蛋白：一种新的抗病毒治疗血清学预测指标2009年乙肝病毒大蛋白首个跨膜结构域对病毒感染至关重要乙肝病毒大蛋白机理研究历程HBV大蛋白的结构域和穿膜拓扑结构：CarstenLambert,SylviaMannandReinhildPrange.Assessmentofdeterminantsaffectingthedualtopologyofhepadnavirallargeenvelopeproteins.JournalofGeneralVirology(2004),85,1221–1225乙肝病毒大蛋白和Pre-S区的研究乙肝病毒大蛋白preS特性:(1)暴露在病毒颗粒表面(2)高免疫原性(3)参与了病毒与细胞受体的相互作用(4)诱导抗感染的保护性抗体的产生1.BrunsM,MiskaS,ChassotS,WillH.EnhancementofhepatitisBVirusinfectionbynoninfectionssubviralparticles.JVirol,1998;76;1462-8.外膜大蛋白是一个病毒反式激活因子乙肝鸭模型证实由大蛋白组装成的亚病毒颗粒能够反式激活病毒继续复制这个研究具有临床意义,对于大蛋白阳性而DNA阴性患者容易停药反跳具有参考意义.亚病毒颗粒上pre-S的反式激活作用大蛋白结合细胞区大蛋白反式激活区大蛋白的反式激活作用区既不是中蛋白的preS2区，也不是preS1区，而是位于大蛋白上具有特殊拓扑结构的preS2区Integrityofc-raf-1/MEKsignaltransductioncascadeisessentialforhepatitisBvirusgeneexpression,NatureOncogene2003,22：2604-2610乙肝蛋白中的反式激活因子•乙肝病毒大蛋白•HBx蛋白•X蛋白在血液中含量非常低，无法检测•大蛋白是唯一可在血液中检测出的病毒激活因子Integrityofc-raf-1/MEKsignaltransductioncascadeisessentialforhepatitisBvirusgeneexpression,NatureOncogene2003,22：2604-2610HBV-LP乙肝病毒大蛋白的细胞毒性1、糖基化及强疏水序列对肝细胞代谢影响2、过量乙肝病毒大蛋白在肝细胞内积聚，是导致内质网应激的关键因素，血液中乙型肝炎病毒大蛋白残留与病情反复密切相关。ZhichangXuetal.ActivationofHepatitisBVirusSpromoterbytheViralLarge.JournalofVirology,1997,10:7387-7392BrunsMetal.EnhancementofHepatitisBVirusInfectionbyNoninfectiousSubviralParticles.JournalofVirology,1998,72(2):1462-1468.骆抗先。乙型肝炎基础和临床[M]。2版。北京：人民卫生出版社，2001：45乙型肝炎病毒大蛋白的临床意义一、e抗原血清转化或变异后的病毒复制指标HBV-LP与肝内病毒复制水平一致，是国家食品药品监督管理局（SFDA）唯一批准的用于e抗原检测的补充指标。魏红山等。e抗原阴性慢性乙型肝炎血清表面抗原大蛋白水平与乙型肝炎病毒DNA之间的关系。中华肝脏病杂志，2006，14（7）：543-544稍晚于血液中DNA的消退而早于HBsAg转阴乙肝大蛋白以及乙肝标志物消减曲线HBeAgHBVDNA大蛋白HBsAg乙肝病毒大蛋白—抗病毒治疗效果可靠的评价指标抗病毒治疗过程中病毒颗粒消退顺序Dane最先消失管状颗粒其次消失球形颗粒最后消失DNA阳性，大蛋白阳性DNA阴性，大蛋白阳性DNA阴性，大蛋白阴性HBV-LP可以作为一个评估抗病毒治疗效果以及判定治疗终点的辅助指标之一：大蛋白与肝内cccDNA密切相关，能反式激活病毒复制，因此，如果外周血HBVDNA转阴，大蛋白持续阳性，提示应该继续治疗；如果其完全消退提示抗病毒治疗较为彻底。HBV-LP能够合理的指导患者的用药，避免过早停药导致的病情反复二、疗效监测和预后反映•Foo等[7]证明HBV-LP是导致肝细胞损伤、死亡和纤维化病变的主要原因。因此检测HBV-LP对疗效监测和反映预后具有重要的临床意义。FooNC,AhnBY，MaX．CellularvacuolizationandapoptosisInducedbyhepatitisBviruslargesurfaceprotein[J]．Hepatology，2002，36(6)：1400-1407．应答明显组反跳组应答不明显组治疗前：患者血清中存在高滴度大蛋白预示抗病毒治疗效果不佳图B：治疗前LHBs含量低于临界值的患者治疗过程中LHBs和HBVDNA变化趋势图I：治疗前LHBs含量高于临界值的患者治疗过程中LHBs和HBVDNA变化趋势XiaoFanetal.Serumlevelsofsurfacelargeenvelopeproteins:prognosticmarkersforhepatitisBeantigen-negativepatientswithadefovirdipivoxiltreatment.AntiviralTherapy,2009,14(8):1149-1156综合：核苷类抗病毒治疗效果观察---有效组0.00.30.60.91.21.5036912150.00.30.60.91.21.5HBVDNAHBV-LP01234567HBsAg检测时患者用药时间（月）OD值HBVDNA拷贝数对数值核苷类抗病毒治疗效果观察--无效组抗病毒治疗无效：HBV-DNA和HBV-LP都始终没有出现阴转，而且HBV-LP吸光密度均在较高水平核苷类抗病毒治疗效果观察---先有效后反弹组小结乙肝大蛋白应用e抗原血清转换或变异后病毒复制指标抗病毒治疗疗效及预后监测停药终点判断乙肝大蛋白优势•1、血清中LHBs含量与DNA拷贝数具有较好的相关性，且能反式激活病毒复制，能够反映乙肝的复制情况。孙颖,辛绍杰,雷厉,侯俊,貌盼勇.乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBVDNA复制的意义.世界华人消化杂志2006;14(3):354-357乙肝大蛋白优势•2、检测效果优于Pre-S1和Pre-S2（立体拓扑构象）适于各级医疗机构开展孙颖,辛绍杰,雷厉,侯俊,貌盼勇.乙肝病毒外膜大蛋白检测对于判定HBVDNA复制的意义.世界华人消化杂志2006;14(3):354-357乙肝病毒复制与大蛋白组合模式表体检加查本指标可以判断个体是否有感染性国内临床应用•2007年，国家药典委员会批复“乙型肝炎病毒大蛋白检测试剂盒（酶联免疫法）”通用名称。•2012年，国家发改委、卫生部、中医药管理局联合发布《关于规范医疗服务价格管理及有关问题的通知》，乙肝病毒大蛋白被正式列入《全国医疗服务价格项目规范》（2012版），项目编号为CGLX1000。•2013年，乙肝病毒大蛋白检测项目正式列入卫生部下发的《医疗机构临床检验项目目录》（2013版）感谢您的聆听！