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真核生物DNA复制过程EukaryoticDNAreplicationprocess第四节真核生物与原核生物DNA复制的差异:真核生物复制子多、冈崎片段短、复制叉前进速度慢等DNA复制从引发进入延伸阶段发生DNA聚合酶转换切除冈崎片段RNA引物的是核酸酶RNAseH和FEN1等哺乳动物的细胞周期DNA合成期G1G2SM细胞能否分裂,决定于进入S期及M期这两个关键点。G1→S及G2→M的调节,与蛋白激酶活性有关蛋白激酶通过磷酸化激活或抑制各种复制因子而实施调控作用真核生物每个染色体有多个起始点,是多复制子复制。复制有时序性,即复制子以分组方式激活而不是同步启动复制的起始需要DNA-polα(引物酶活性)、polδ和polε参与。还需解螺旋酶活性、拓扑酶和复制因子(replicationfactor,RF)一、真核生物复制的起始与原核基本相似酵母复制起点为自主复制序列(autonomouslyreplicatingsequences,ARS):酵母染色体含有多个复制起点。元件A(富含A/T的共有序列):结合一个特异的蛋白质复合物──复制起点识别复合物(ORC)3个序列(B1、B2和B3)可以增加复制起点的效率,其中B2的9个碱基与上述ARS共有序列相同酵母复制起始点拓扑异构酶,去除负超螺旋(使解旋酶容易解旋),去除复制叉前方产生的正超螺旋TolⅠ和TolⅡDNA双螺旋解链,参与组装引发体DNA解旋酶连接冈崎片段DNA连接酶Ⅰ核酸酶,切除RNA引物RNAseH核酸酶,切除RNA引物FEN1DNA复制,核苷酸切除修复,碱基切除修复Pol/合成RNA-DNA引物Pol/引发酶有依赖DNA的ATPase活性,结合于引物-模板链,激活DNA聚合酶,促使PCNA结合于引物-模板链RFC激活DNA聚合酶和RFC的ATPase活性PCNA单链DNA结合蛋白,激活DNA聚合酶,使解旋酶容易结合DNARPA功能蛋白质真核DNA复制叉主要蛋白质的功能现在认为polα主要催化合成引物,然后迅速被具有连续合成能力的DNApolδ和DNApolε所替换,这一过程称为聚合酶转换。DNApolδ负责合成后随链,DNApolε负责合成前导链。二、真核生物复制的延长发生DNA聚合酶转换前导链:出现在引发后期后随链:发生于每个冈崎片段合成之际发生DNA聚合酶转换的原因是Pol不具备持续合成能力DNA聚合酶转换的关键蛋白是RFCDNA聚合酶/转换真核DNA聚合酶转换和后随链合成3553前导链3535亲代DNA后随链引物核小体三、真核生物DNA合成后立即组装成核小体染色体DNA呈线状,复制在末端停止复制中冈崎片段的连接,复制子之间的连接染色体两端DNA子链上最后复制的RNA引物,去除后留下空隙四、端粒酶参与解决染色体末端复制问题切除引物的两种机制线性DNA复制一次端粒缩短53355335+5333355端粒(telomeres)由富含TG的重复序列组成人的端粒重复序列为5’-(TnGn)x-3这些重复序列多为双链,但每个染色体的3’端比5端长,形成单链ssDNA。这一特殊结构可解决染色体末端复制问题组成:端粒酶RNA(humantelomeraseRNA,hTR)端粒酶协同蛋白(humantelomeraseassociatedprotein1,hTP1)端粒酶逆转录酶(humantelomerasereversetranscriptase,hTRT)端粒酶(telomerase)端粒酶(telomerase)是一种核糖核蛋白(RNP),由RNA和蛋白质组成端粒酶以自己的RNA组分作为模板,以染色体的3’端ssDNA(后随链模板)为引物,将端粒序列添加于染色体的3端。这些新合成的DNA为单链端粒酶催化作用的爬行和端粒的延长过程真核所有染色体DNA复制仅仅出现在细胞周期的S期,而且只能复制一次五、真核生物染色体DNA在每个细胞周期中只能复制一次前复制复合物在G1期形成而在S期被激活真核细胞DNA复制的起始分两步进行,即复制基因的选择和复制起点的激活复制基因(replicator)是指DNA复制起始所必需的全部DNA序列ORC至少募集两种解旋酶加载蛋白Cdc6和Cdt1复制起点识别复合物(originrecognitioncomplex,ORC)识别并结合复制基因三种蛋白质一起募集真核细胞解旋酶Mcm2-7前复制复合物(pre-RC)的形成pre-RC的激活和组装真核DNA复制叉激活pre-RC,以起始DNA复制抑制形成新的pre-RCCDK控制pre-RC的形成和激活真核细胞通过依赖细胞周期蛋白的蛋白激酶(cyclin-dependentkinases,CDK)严格控制pre-RC的形成和激活Cdk功能:D-环复制(D-loopreplication)是线粒体DNA的复制形式六、真核生物线粒体DNA按D环方式复制dNTPDNA-polγ
本文标题:真核生物DNA复制过程
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