实验一---蛋白质的两性电离和等电点的测定

实验一蛋白质的两性电离和等电点的测定【目的】验证蛋白质的两性电离与等电点性质。【原理】蛋白质由氨基酸组成。蛋白质分子除两端游离的氨基和羧基可解离外，其侧链上的某些酸性基团或碱性基团，在一定的溶液pH条件下，都可解离成带负电荷或带正电荷的基团。因此，蛋白质具有两性解离性质。当蛋白质溶液处于某一pH时，蛋白质解离成阳离子和阴离子的趋势相等，既净电荷为零，成为兼性离子，此时溶液的pH称为蛋白质的等电点（isoelectricpoint,pI）。蛋白质在等电点状态时溶解度最低，容易沉淀析出。蛋白质在大于其等电点的pH值溶液中带负电荷；在小于其等电点的pH值溶液中则带正电荷。蛋白质在等点电以外的pH值溶液中，因分子带有同种电荷而相互排斥，不易沉淀。本实验通过观察酪蛋白在不同pH溶液中的溶解度来测定其等电点。＞pI（pH）pI（pH）=pI＜（pH）PrNH3+COO-PrNH3+COOHOH-H+OH-H+PrNH2COO-蛋白质解离成阳离子蛋白质成兼性离子蛋白质解离成阴离子【操作】1.蛋白质的两性电离取试管1支，按以下步骤加入各种试剂，观察现象变化并记录。步骤现象(1)5g/L酪蛋白醋酸钠溶液1ml，加入0.1g/L溴甲酚绿指示剂6～7滴，混匀后，观察并记录溶液的颜色。(2)用细滴管缓慢滴加0.2mol/LHCl溶液，边滴边摇，直至产生明显的大量沉淀，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。(3)继续滴入0.2mol/LHCl溶液，观察并记录沉淀与溶液颜色的变化。(4)再滴入0.2mol/LNaOH溶液进行中和，边滴边摇，使之再度产生明显的大量沉淀，继续滴加0.2mol/LNaOH溶液，沉淀又溶解，观察并记录溶液颜色变化。22.酪蛋白等电点的测定取试管5支，编号后按下表的顺序准确地加入各种试剂并混匀。静置室温20分钟后观察各管沉淀出现情况，并以－，＋，＋＋，＋＋＋，＋＋＋＋符号记录沉淀的多少。试管号加入物（ml）12345蒸馏水2.4－3.01.53.381.00mol/L醋酸溶液1.6－－－－0.10mol/L醋酸溶液－4.01.0－－0.01mol/L醋酸溶液－－－2.50.625g/L酪蛋白醋酸钠溶液1.01.01.01.01.0溶液的最终pH3.54.14.75.35.9静置室温20分钟现象【结果及分析】【思考题】1．为什么说蛋白质是两性电离电解质，何谓蛋白质的等电点？2.在等电点状态下，为什么蛋白质容易发生沉淀？3.本实验中酪蛋白处于等电点时则从溶液中沉淀析出，由此得出蛋白质在等电点时必然沉淀，此结论对吗，为什么？