牧草营养价值评定分析方法

牧草营养价值评定安排周六上午：学生进行托盘清洗，放入烘箱，进行初水分的测定讲解，学生完成采样、称重后将样品放入烘箱，讲解粗水分测定，负责人中午管理好烘箱。周六下午：称重烘干的样品，并分别粉碎装袋、标号CP测定：讲解；三角瓶洗净、入烘箱，其他仪器设备的准备。讲解样品的采集与制备。CP测定：称样并用滤纸包装好入凯氏烧瓶底部，加催化剂、浓硫酸混匀，静置过夜。周六实验一样品的采集与制备饲草的收获、采集讲解试验二初水分的测定1．将瓷盘洗净，放入60~65℃烘箱中烘干，取出冷却至室温称重后，再次烘1小时，冷却称重恒重。备用。2．用剪刀剪碎新鲜样品，混匀后，在普通天平上用上面准备好的瓷盘称取此样品500g左右(使实验室条件下制成风干样品不少于100g)，放入120℃烘箱中灭酶15分钟，然后将瓷盘移入60~65℃的烘箱中，烘5~6小时取出，在实验室条件下冷却2~4小时后称重。3．再将瓷盘放入60~65℃烘箱内，2小时后取出，按上法冷却称重，直至前后两次重量相差不超过0.1g为止，并取其最低值进行计算。计算公式：%100）初水分（式中：W--瓷盘重加新鲜样重，W1--瓷盘重，W2--瓷盘重加风干样重4．将测过初水分的样品在粉碎机上进行粉碎，并通过40-60目筛，制成风干样品。装入磨口广口瓶中备用。实验粗水分的测定（只讲解，不做）一、原理：100-105℃烘箱除去风干样品中吸附水二、仪器设备：称量瓶（2个），分析天平（感量0.0001g），恒温干燥箱（1台），干燥器（1台（用变色硅酸干燥剂））三、步骤：1、称量瓶恒重：将称量瓶洗净后置于100-105℃恒温干燥箱烘干1小时，取出移入干燥箱内冷却30分钟，称重m，然后再烘干30分钟，再冷却30分钟，直至两次称重之差小于0.0005g，为恒重。（按照经验烘一次即可）2、称样：向已恒重的称量瓶中加入1.5g左右被测饲料样品，迅速称重m1。3、称后放入100-105℃愠温干燥箱内，将称量瓶盖打开，烘干约6小时，取出移入干燥器中，冷却30分钟(盖好盖)迅速称重m2。4、恒重：称完后，按前面的操作方法继续将称量瓶放入100-105℃恒温干燥箱内，烘1小时，冷却、称重直到恒重（两次称重共不超过0.0005g）。（为节省时间，本步骤省略）三、计算%100）%粗水分（121mmmm四、注意事项1．含脂肪高的样品，烘干时间反而会增重，乃脂肪氧化所致，应以增重前一次重量计算。2．含糖分离的易分解或易焦化样品，可使用减压干燥法(7℃以下，600毫米汞柱以下烘干5小时)。3．精密度：含水量在10%以上，允许相对偏差为1%；5~10%，允许相对偏差为3%；5%以下，允许相对偏差为5%。周六下午饲草测定结果的评述与判定（讲解）周日上午：CP测定：消化、定容；周日下午：CP测定：蒸馏、滴定；讲解粗纤维的测定，学生洗净500ml烧杯，入烘箱。讲解酸洗石棉（负责人提前2天蒸馏水浸泡好）铺古式坩埚的方法（孔不漏而薄），学生铺好古式坩埚，负责人按号（三氯化铁溶液标号）放入马福炉550℃烘1h关闭第二天取出给学生备用。周日实验三粗蛋白的测定(凯氏定氮法)一、原理：饲料中的粗蛋白指真蛋白和其他含氮化合物。凯氏定氮法是在催化剂的作用下，用浓硫酸消化样品，使样品中的含氮物都转变为氨气，氨气被浓硫酸吸收变为硫酸铵。加碱后用水蒸汽蒸馏使用氨逸出，用硼酸吸收，氨与酸结合成为四硼酸铵，后者用盐酸标准溶液滴定，即可测定含氮量。根据含氮量，乘以6.25可得到CP的含量。二、仪器设备：凯氏烧瓶、量筒、100ml容量瓶、150ml三角瓶2个、蒸馏装置、酸式滴定管、电炉、分析天平、洗瓶、通风橱。三、试剂：98%浓硫酸、混合催化剂、混合指示剂、40%NaOH、4%硼酸、HCl标准溶液四、步骤：(吸收氨气化和逸出再吸收酸滴定)1、消化：1）称取1g左右被测样品用滤纸包好装入凯氏烧瓶底部。加入2.5g混合催化剂和10ml98%浓硫酸，静置过夜。2）将凯氏烧瓶放在电炉上加热，开始加热时，先用小火，以免瓶内产生大量泡沫，溢出瓶口，当泡沫停止产生，再加强火力，使之维持微沸状态，温度保护在330℃左右，不可剧烈沸腾，以免（NH4）2SO4分解而损失。加热消化时应随时转动凯氏瓶、使硫酸能冲洗附着于瓶壁上的样品，直至瓶内溶液呈蓝绿色澄清液，即消化完毕，一般饲料需消化3-6小时。2、定容待凯氏烧瓶冷却后加少量蒸馏水摇动，然后将凯氏瓶中的消化液无损失地转移100ml容量瓶中，用蒸馏水冲洗凯氏烧瓶数次注入容量瓶内，蒸馏水定容，混匀。3、蒸馏1）用滴定管准确放10ml2%硼酸溶液于150ml的三角瓶中，并加入甲基红-溴甲酚绿混合指示剂2滴，置于蒸馏装置冷凝管下，使管口浸入硼酸溶液中。2）用移液管移取10ml消化液，于凯氏定氮仪上的小玻璃杯注入反应室内，再用少量蒸馏水冲洗。3）取10mlNaOH溶液注入小玻璃杯内，小心地轻轻提起棒状玻璃塞，使NaOH溶液流入反应室立刻将玻璃棒塞紧，并加少量水于玻璃杯内，使少量水流入反应室，以洗涤碱液，小玻璃杯内加入部分蒸馏水，以防漏气。4）接通电源煮沸蒸汽发生瓶中的蒸馏水开始蒸馏，并夹紧外层套管出口的橡皮管。5）至接收液变蓝后继续蒸馏3分钟后，撤去三角瓶。在小玻璃杯内加满水，将玻璃棒提起，使水流入反应室，并夹断气源，于是反应室的残液自动流入反应室外层中，如此反复冲洗几次后，将外层下端出口橡皮管打开，使反应室外层的废液排出，待废液排完后，夹紧橡皮管，每个消化液重复蒸馏两次作为平行。4、滴定：用0.02mol/L标准HCl溶液滴定，待溶液刚出现微灰红色，即达终点。同时做空白滴定。五、计算：%1001025.6014.0)-(%10025.6014.0)-(%0HCl0HClmCVVVmVCVVCPHClHCl取总）（五、注意事项1.各种饲料的粗蛋白实际含氮量差异很大，荞麦、玉米用系数6.00，大豆、小麦等用系数5.70，牛奶用系数6.38。2.在实际操作中要结合饲料中实际含氮量，避免消耗大量HCl标准溶液3.精密度：CP25%,相对偏差1%CP：10%~25%，相对偏差2%CP10%，相对偏差3%周一上午：CF测定：学生称样，酸、碱、醇处理、放入烘箱，中午负责人管理烘箱周一下午：NDF\ADF测定的滤袋、洗涤剂准备周一实验四NDF/ADF的测定周一上午：NDF测定：学生称样，酸、碱、醇处理、放入烘箱，中午负责人管理烘箱(1)尼龙袋洗净、烘干、编号、称重（规格为300目，制成8cm×12cm小袋；事先经65℃、48h烘至恒重）m1(2)称取1g左右样品放入尼龙袋m(3)放入大烧杯(4)加入中性洗涤剂(5)在烧杯上口置凹面板(6)在凹面板中倒入冷水起冷凝作用（防沸）(7)将烧杯置于可调电炉上加热，在5—10min内煮沸，保持微沸状态1h。(8)消煮完毕后，离火冷却10min，(9)将尼龙袋和样品用2倍热水洗涤残渣。(10)然后再用丙酮冲洗残渣两次至流出的丙酮为无色透明(11)尼龙袋和样品于105℃烘箱内烘，直至恒重称重。m2(m2-m1)/m*100%(1)尼龙袋和样品放入大烧杯(2)加入酸性洗涤剂(3)在烧杯上口置凹面板(4)在凹面板中倒入冷水起冷凝作用（防沸）(5)将烧杯置于可调电炉上加热，在5—10min内煮沸，保持微沸状态1h。(6)消煮完毕后，离火冷却10min，(7)将尼龙袋和样品取出，用2倍热水洗涤残渣。(8)然后再用丙酮冲洗残渣两次至流出的丙酮为无色透明(9)尼龙袋和样品于105℃烘箱内烘，直至恒重称重。M3周二试验五ADL(木质素)含量的测定试验原理木质素在醋酸的作用下,易溶于乙醇和乙醚的混合液,在硫酸介质中用重铬酸钾氧化为二氧化碳和水,反应方程式如下：C6H10O5+4K2Cr2O7+16H2SO4=4Cr2(SO4)3+4K2SO4+6CO2+21H2O，过量的重铬酸钾用硫代硫酸钠回滴,淀粉KI溶液为指示剂。其中加氯化钡溶液的作用是让溶出的木质素和硫酸钡一起沉淀。对照：滴定加入了5ml质量分数25%硫酸和0.05mol/L的重铬酸钾溶液作为空白样木质素含量按下式计算:X=K(a-b)/(n×48)式中,“48”为1molC11H12O4相当于硫代硫酸钠的当量数;K为硫代硫酸钠浓度,mol/L;a为空白滴定所耗硫代硫酸钠体积,ml；b为滴定溶液所耗硫代硫酸钠体积,ml；n为干样质量,g。①质量分数1%醋酸：②质量分数10%氯化钡：③质量分数25%的硫酸：④0.05mol/L重铬酸钾溶液：14.7g重铬酸钾定容至1000ml⑤质量分数30%KI溶液⑥质量分数0.5%淀粉液用0.05mol/L重铬酸钾和0.2mol/L硫代硫酸钠滴定周三试验六粗灰分的测定饲料中的粗灰分系指饲料中的不燃烧部分，包括矿物质、无机盐等，约占饲料干物质的5%左右，主要为钾、钠、钙、镁、硫、硅、磷、铁及其他微量元素。灰分在饲料中的含量虽然不多，但在动、植物体的新陈代谢活动中都是有很重要的。测定灰分的总量，可了解不同生长期中、不同器官组织中灰分的变动情况；也可在此基础上测定灰分中组成元素的含量，作为合理配合全价日粮的参考。一、测定原理将试样放入茂福炉中，在一定温度下灼烧，使有机质燃烧，生a成二氧化碳和水而除去，剩余的不可燃部分(主要是一些矿物质氧化物)总称为粗灰分，包括样品中原先粘上的少量泥土、砂石等杂质。二、仪器设备等药品(一)仪器设备序号仪器名称数量序号仪器名称数量1234分析天平瓷坩埚，25毫升电炉量筒11~2115678茂福炉(高温电阻炉)坩埚钳长柄、短柄干燥器滴管1各1个1数个(二)试剂药品1．3%H2O2：取1份30%H2O2，加水9份混匀而成。2．1∶4HCl：取1份浓盐酸，加水4份。3．干燥剂：无水氯化钙或变色硅胶。4．凡士林。三、测定方法1．用1∶4HCl将瓷坩埚煮沸并洗净，烘干，在茂福炉内于600℃下灼烧半小时，待炉温降至200℃以下，将坩埚移入干燥器内，冷却30分钟，称重，再灼烧，称至两次重量之差小于0.5毫克为恒重。(m0)2．在此坩埚中准确称取风干样品1~2克(称准至0.0002克,m1)置电炉上，半开盖子，先低温小心碳化至无烟(勿着火)。3．稍冷，将坩埚移入茂福炉中，慢慢升高温度至550~600℃灼烧1~2小时，等炉温降到200℃以下，取出坩埚置于干燥器内，冷却30分钟后称重，再灼烧半小时，同样冷却称重，直至前后两次称重之差小于1毫克为恒重。(为了节省时间，本次实验采用一次连续灼烧6小时，冷却称重(m2)后即不再灼烧)4．计算粗灰分(%)=四、注意事项1．取样品数量(1~2克)，主要看样品灰分含量的高低。一般对谷类、油料、豆类等作灰分测定时，取样量可取高限或更高一点；植物的叶和饲草中因灰分含量比籽实高得多，故取样量可取下限。测草1000102mmmm本材料时，粉碎中易产生大小不一的颗粒，应注意研磨和过筛。2．一般情况下，饲料样品灼烧两小时，已足以充分灰化。难以灰化和样品量较多时，应酌情增加灼烧时间1~2小时。3．灼烧后是否需要加水或3%H2O2处理，需看第一次灼烧是否完全(灼烧后的灰分应当是灰的颜色，蓬松状态，故当出现黑灰色或溶融则另作处理)。在取样较多，灰分含量高，灼烧器皿较小的情况下，单纯延长灼烧时间，有时难以将样品全部灰化，故需加少许水或3%H2O2进行处理，以使中间未灰化的物质露出表面(促进氧化)，以使灰化完全。4．灼烧温度不得超过600℃，否则会使磷酸盐熔融，凝结为固形物将炭粒包埋，使其中所包含之炭粒不易氧化。此外温度过高时，钾、钠、氯等也能挥发，致使测得结果有误。5．炭化开始时温度不宜过高，否则可能引起试样剧烈干馏，细小的试样颗粒易被逸出的气体带走，致使分析结果偏低。7．精密度：含量范围：允许相对偏差10%以上0.5%5~10%1%5%以下3%周四实验七Ca和P元素的测定P元素TP(钼黄法)一、方法原理在硝酸溶液中，正磷酸根(PO4)与偏钒酸铵和钼酸铵混合试剂形成可溶性的磷钒性的磷钒钼黄色络合物，颜色很稳定。其组成为：P2O5·V2O5·22M