生物检测二十七生物技术实践课前诊断卷

检测（二十七）“生物技术实践”课前诊断卷考点一微生物的利用1.为解决塑料袋(化学成分为聚乙烯)造成的“白色污染”这一问题，某同学试图从土壤中寻找一种能加速塑料袋自然降解过程的目的菌，以下是该同学从土壤中寻找并筛选目的菌的流程，请回答下列问题：(1)对培养基灭菌常用的方法是____________________。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，方法是____________________________________________________________________________________________________________________________________________________。(2)Ⅰ号培养基属于________________(按功能分)培养基，其作用是使目的菌能“脱颖而出”。如图采用的接种方法为________________。Ⅱ号培养基从物理性质来看，________(填“能”或“不能”)添加琼脂。(3)该同学在稀释倍数为104的培养基中测得平板上菌落数的平均值为20.4，则每毫升样品中的菌落数是________个。(涂布平板时所用稀释液的体积为0.2mL)(4)假设该同学发现培养基上细菌数目过多而连成一片，说出一种可能的原因并提出合理的处理措施。原因：__________________；措施：_______________________________。解析：(1)培养基常采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。在接种前需要检测使用的培养基是否被污染，可以将未接种的培养基在37℃(或适宜温度)恒温箱中倒置培养一段时间，观察是否有菌落生成，若有菌落生成，则说明培养基已经被污染，否则没有被污染。(2)要筛选能降解聚乙烯塑料的微生物，应选择以聚乙烯塑料为唯一碳源的选择培养基。在Ⅰ号培养基上采用的接种方法为稀释涂布平板法。Ⅱ号培养基应为液体培养基，因此不需要加凝固剂——琼脂。(3)根据题意可知，每毫升样品中的菌落数为20.4÷0.2×104＝1.02×106(个)。(4)如果培养基上细菌数目过多而连成一片，可能的原因是菌液浓度过高或操作过程杂菌污染，还可能是接种时没有把细菌分散开，采取的措施有：增大稀释倍数或严格无菌操作程序或涂布均匀。答案：(1)高压蒸汽灭菌法将未接种的培养基在37℃(或适宜温度)恒温箱中倒置培养一段时间(或1～2d)，观察是否有菌落生成(2)选择稀释涂布平板法不能(3)1.02×106(4)菌液浓度过高(或稀释倍数不够)可以通过增大稀释倍数解决(或原因：培养过程中被杂菌污染严格无菌操作程序)2．(2017·安阳市一模)如图表示研究者从土壤中筛选分解尿素的细菌并计数的相关实验，请据图回答下列问题：(1)进行过程①和②的目的分别是__________________和____________________；图中弧线箭头上“？”的具体操作是____________。(2)进行培养基配制和灭菌时，灭菌与调节pH的先后顺序是__________________。倒平板时，待平板冷却凝固后，应将平板倒过来放置，并用记号笔在皿底上标明培养微生物名称、平板上培养样品的稀释度、制作者姓名、培养日期及________________等信息。纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是__________________和__________________。(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入____________________。培养后，若出现______色就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。(4)研究者可以通过观察培养形成的菌落的__________________、隆起程度等特征，来判断培养基上是否感染了其他细菌。在实验中，研究者每隔24h统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止__________________________。解析：(1)结合实验目的分析图解可知，①过程是从土壤中筛选分解尿素的细菌，目的是选择培养，②过程是扩大培养，目的是增加分解尿素的细菌的数量；图中弧线箭头上“？”的具体操作是挑出菌落。(2)灭菌与调节pH的顺序是先调节pH，后灭菌。倒平板时，待平板冷却凝固后，应将平板倒过来放置，并用记号笔在皿底上标明培养微生物名称、平板上培养样品的稀释度、制作者姓名、培养日期及培养基种类等信息。纯化菌种时为了得到单一菌落，常采用的接种方法是平板划线法和稀释涂布平板法。(3)在以尿素为唯一氮源的培养基中加入酚红指示剂。培养后，若出现红色就可以鉴定其中含有能够分解尿素的细菌。(4)研究者可以通过观察培养形成的菌落的形状、大小、颜色、隆起程度等特征，来判断培养基上是否感染了其他细菌。在实验中，研究者每隔24h统计一次菌落数目，并选取菌落数目稳定时的记录作为结果，这样可以防止因培养时间不足导致遗漏细菌数目。答案：(1)选择培养增加分解尿素的细菌的数量挑出菌落(2)先调节pH，后灭菌培养基种类平板划线法稀释涂布平板法(3)酚红指示剂红(4)形状、大小、颜色因培养时间不足导致遗漏细菌数目3．如图是分离、纯化及保存枯草芽孢杆菌菌株的过程示意图：将土壤表层土稀释液煮沸5min(枯草芽孢杆菌的芽孢不会失去活性)静置5min后获得样品，进行如下操作：请回答下列问题：(1)由题意可知，除用选择培养基外，还有________操作起到筛选作用。(2)上图的划线操作中，培养基从物理状态分类上属于______________，接种环用__________________法进行灭菌，划线过程中第一区和最后一区的划线________(填“能”或“不能”)相连。(3)用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13,160,532,175和187。每毫升样品中的细菌数量为____________个。(4)用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目______，原因是________________________________________________________________________________________________________________________________________________。解析：(1)根据题干信息“将土壤表层土稀释液煮沸5min(枯草芽孢杆菌的芽孢不会失去活性)”可知，除用选择培养基外，还有煮沸操作起到筛选作用。(2)上图的划线操作中，培养基从物理状态分类上属于固体培养基；接种环用灼烧灭菌(灼烧)法进行灭菌；划线过程中第一区和最后一区的划线不能相连。(3)用稀释涂布平板法在5个培养基平板上，均接种稀释倍数为104的样品液0.1mL，培养一段时间后，平板长出来的菌落数分别为13,160,532,175和187。为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，因此每毫升样品中的细菌数量为(160＋175＋187)÷3÷0.1×104＝1.74×107(个)。(4)由于两个或者多个活菌连在一起时，平板上形成的只是一个菌落，因此用上述方法统计出的菌落数往往比样品中活菌的实际数目少。答案：(1)煮沸(2)固体培养基灼烧灭菌(灼烧)不能(3)1.74×107(4)少两个或者多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落4.醚苯磺隆是常见的除草剂，在环境中难以降解。某实验小组从某农药厂的污泥中富集、筛选出了一株醚苯磺隆降解菌株MB­1，并研究了其降解效率。请回答下列问题：(1)该实验小组将取自生产醚苯磺隆农药厂废水处理池中的废水按5%的体积分数接入醚苯磺隆含量为200mg/L的MSM液体培养基中，每3d以5%的接种量接入新鲜的醚苯磺隆MSM液体培养基中，这一培养过程称为______________，其目的是____________________________________。(2)该实验小组将培养液进行梯度稀释后，将稀释倍数为103、104和105的培养液分别取0.1mL接种到醚苯磺隆MSM固体培养基上，每个稀释倍数涂布三个培养基，最终形成的菌落数分别为627、622、658；58、62、63；3、6、7个，则原菌液每升含有的细菌数为__________个。若要检测水体中全部细菌(无论是否为活菌)的数目，应采用的方法是________。(3)研究发现当培养基中含有葡萄糖和醚苯磺隆时，MB­1菌株只利用易于摄取的葡萄糖作为能源和碳源，同时诱导产生一种能分解醚苯磺隆的关键酶，该实验小组研究了不同的葡萄糖浓度对MB­1降解醚苯磺隆能力的影响，实验结果如图所示。①同时含有葡萄糖和醚苯磺隆的培养基比只含醚苯磺隆的培养基更有利于MB­1菌株的生长繁殖，其原因可能是____________________________________________________________________________。②当葡萄糖浓度较低时，醚苯磺隆降解能力较弱的原因是______________________，最有利于醚苯磺隆降解的葡萄糖浓度为_____________。解析：(1)取自生产醚苯磺隆农药厂废水处理池中的废水含有醚苯磺隆降解菌，按5%的体积分数接入醚苯磺隆含量为200mg/L的MSM液体培养基中，每3d以5%的接种量接入新鲜的醚苯磺隆MSM液体培养基中，这一培养过程称为选择培养，其目的是初步筛选醚苯磺隆降解菌，并增大醚苯磺隆降解菌的浓度。(2)菌落数统计应选择菌落数在30～300的培养皿计数，统计稀释倍数为104的培养液涂布的三个培养基，平均菌落数为(58＋62＋63)÷3＝61(个)，则原菌液每升含有的细菌数为61÷0.1×104×1000＝6.1×109(个)。若要检测水体中全部细菌(无论是否为活菌)的数目，应采用的方法是抽样检测法。(3)①MB­1菌株更容易吸收葡萄糖作为碳源和能源，并且醚苯磺隆具有一定的毒害作用，因此同时含有葡萄糖和醚苯磺隆的培养基比只含醚苯磺隆的培养基更有利于MB­1菌株的生长繁殖。②当葡萄糖浓度较低时，MB­1菌株的碳源和能源供应不足，导致其产生能分解醚苯磺隆的关键酶不足，对醚苯磺隆降解能力较弱，据图可知，醚苯磺隆降解率在葡萄糖质量浓度为200mg/L时最高，此时有利于醚苯磺隆降解。答案：(1)选择培养初步筛选醚苯磺隆降解菌，并增大醚苯磺隆降解菌的浓度(2)6.1×109抽样检测法(3)①MB­1菌株更容易吸收葡萄糖作为碳源和能源，并且醚苯磺隆具有一定的毒害作用②MB­1菌株的碳源和能源供应不足，导致其产生能分解醚苯磺隆的关键酶不足200mg/L5．(2017·湖南省长郡中学模拟)水污染是全球性的环境问题，微生物降解是水污染治理的有效手段之一。聚乙烯醇(PVA)是存在于化工污水中的一种难以降解的大分子有机物，PVA分解菌能产生PVA酶分解PVA，PVA与碘作用时能产生蓝绿色复合物，当PVA被分解时蓝绿色复合物消失，形成白色透明斑，请回答下列问题：(1)下表是筛选出能高效分解PVA的细菌的培养基配方，表中X物质最可能为_______________。实验中还应设置完全培养液对照组，将菌液稀释相同的倍数，对照组培养基上生长的菌落数目应明显__________(填“多于”或“少于”)选择培养基上的数目，从而说明选择培养基具有筛选作用。成分MgSO4蛋白质X物质水琼脂用量5g10g7g1000mL20g(2)要测定土壤稀释液中微生物的数目，可在显微镜下用___________计数板直接计数。若将100mL含有PVA分解菌的土壤样品溶液稀释104倍后，取0.1mL稀释液均匀涂布在选择培养基表面，测得菌落数的平均值为160个，空白对照组平板上未出现菌落，则100mL原菌液中有PVA分解菌____________个，该方法的测量值与实际值相比一般会___________(填“偏大”“偏小”或“相等”)。(3)要鉴定分离出的细菌是否为PVA分解菌，培养PV