临床微生物检验与临床

临床微生物检验与临床临床微生物科李浩微生物检验的重要性在医学高度发展，新的抗菌药物不断涌现的今天，感染性疾病的发病率和病死率仍然居高不下。主要原因之一是当代的感染性疾病，在病原上发生了较大的变化，形成了现代感染性疾病在病原学上的新特点现代感染性疾病的新特点以条件致病菌为主：很多低致病、弱毒的细菌，在外环境、人体体表以及与外界相通的腔道中广泛存在的细菌，引起感染甚至造成严重后果的现象日益增多。病原菌的种类更为广泛：包括需氧菌、厌氧菌、苛氧菌、分枝杆菌和真菌等。细菌的耐药性不断增强：同一种细菌对抗生素的耐药性可以完全不同，甚至出现同时耐多种抗生素的“多重耐药”细菌，往往使临床医师的“经验性”治疗或所谓的常规治疗根本无效。现代感染性疾病的新特点提高感染样本送检率加强细菌耐药监测关注细菌性疾病的病原学诊断，已成为临床工作者、临床微生物与微生态工作者、药学家和从事感染控制的工作者共同关注的热门焦点。病原微生物送检是感染控制的基础成功治疗感染症的因素‧成功分离病原菌–标本收集、运送、保存–标本处理方法–检验医师专业知识‧医师判读病原菌培养结果‧选择适当治疗方法临床医生要合理用好两种数据1.本地区、本单位病原流行病学资料，指导经验用药。（微生物室、院感科、临床科室）2.药敏试验报告，纠正经验用药。重视病原学检查,尽可能在应用抗菌药物之前留取标本送检。以提高病原学诊断率,为选药和调整药物提供依据。“正确的微生物学检验始自正确的标本采取。临床医师、护师及检验技师都必须通晓其要领。”著名的临床微生物检验专著ManualofClinicalMicrobiology的主编PatrickMurray标本采集和运送是细菌培养成功的最最重要的关键但由于标本的采集和运送常由护士或医生或病人自己完成，所以也是最不容易做好的事情，而且不知道问题所在之处，造成的后果是:临床医生最不能接受的问题:阳性率低国内微生物标本的采集目前存在的问题：标本送检率低从全国来看，抗感染治疗前，送检相关标本可能只占应送标本的一半左右，与抗菌药物应用率之高形成鲜明的反差。一些医师在经验性治疗受挫后方送标本，此时已失去阳性培养的机会。标本有缺陷正确收集各种临床标本，关注特检标本采样与送检的方法和条件，是完成病原学诊断的先决条件。微生物让人类步步为营，我们应该追求：“准确的病原学诊断”“针对性病原学治疗”正确的微生物标本采集和运送，是准确的病原学诊断的前提！基本原则1.及时采集微生物标本作病原学检查2.在抗菌药物使用前采集标本3.采样时严格执行无菌操作4.采样后立即送检5.标本容器须灭菌处理，但不得使用消毒剂6.送检标本应注明来源和检验目的常见不合格标本主要有以下问题：标本采集时间错误容器错误标本量不足标本采集延误标本未及时正确运送以及暂存条件错误。。。。。。。最有价值的细菌学检测项目血液培养脑脊液培养胆汁培养胸腹水培养关节液其他无菌体液或分泌液血培养标本采集与运送目前血培养的问题：采血时机不合适采血套数不够采血量不足只做需氧培养，不同时做厌氧培养采血前或采血时正在使用抗生素治疗相似规模医院的血培养数•国内多数三甲综合医院2～10瓶/天•复旦大学中山医院20～50瓶/天•香港玛丽医院200瓶/天•台湾大学医院300瓶/天•我院约10～15瓶/天1370瓶/2011年7月26日美国，亚特兰大，埃默里大学附属一院，1100床位平均100人次/天美国，亚特兰大，埃默里大学附属二院，900床位实验室类型:美国私立大医院微生物实验室医院病床数:800beds微生物标本量:600个标本/天血培养标本量:150瓶/天血培养标准采样:3套瓶/24小时(1个需氧瓶+1个厌氧瓶=1套)阳性结果:10-30株需氧或兼性厌氧菌/天,2株厌氧菌/月BacT/ALERT3D2407台“只有在发热时，才需要进行血培养。”————关于血培养指征想采就采答案：血培养的指征当怀疑血流感染或脓毒症时，应常规行血培养怀疑患者有血流感染的症状有：不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)白细胞增多（＞10,000/ul），粒细胞减少（＜1,000ul）休克，寒颤，僵直严重的局部感染(脑膜炎，心内膜炎，肺炎，肾盂肾炎，腹部术后感染，…)心率异常加快低血压或高血压呼吸频率加快“何时采血进行血培养，无特殊时间要求。”———关于采血时机你认为对吗？为了提高病人血培养的阳性率，最好的抽血时间是：A.发热开始时B.寒战开始时C.发热最高峰时D.寒战结束时E.预计寒战发热前03060时间(分钟)体温血培养采血时机细菌浓度答案：采集血培养样本的最佳时间尽可能在患者寒战或开始发热时采血在患者接受抗生素治疗前采血如患者已经应用抗菌药物进行治疗，应在下一次用药之前采血培养“为减轻患者痛苦，只从一个穿刺部位采一份血液标本即可。”———关于采血套数及部位基本概念成人“一套”血培养应该包括需氧瓶和厌氧瓶各一个，也叫“一份”注意：一次穿刺采血，算“一套”，采集第二套应从另一个穿刺点获得。儿童一般只做需氧培养，但仍需从多个部位采集多次。特殊患者才考虑厌氧培养。采血套数Weinsteinetal.DetectionofBloodstreamInfectionsinAdults:HowManyBloodCulturesAreNeededJClinMicrobiol.2007;45:3546-3548表皮葡萄球菌的临床意义阳性套数采集套数临床意义％污染可能％无法确认％11097312295322603371301000237502533100002－3套血培养，有助于污染的判断。Tokars,JI.ClinInfectDis2004;39:333采集1套无法判断是病原菌还是污染菌。答案：关于血培养套数与采血部位每位患者每次采血最少2套，3套更好初发患者，绝不能只采1套标本多个穿刺部位采血。因多部位同时发生污染的几率较小，便于对结果进判断“两套血培养采集间隔无特殊要求。”———关于采血间隔答案：关于标本采集间隔时间对于非持续性菌血症，同时或短时间内采集2－3套血培养，因为体内巨噬细胞吞噬系统会在15～30min内清除掉进入人体内的细菌。可疑急性心内膜炎患者要立即取血作血培养，30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报告阴性，则继续采集2套血培养。“每瓶采集多少血液无特殊要求。”———关于采血量菌血症病人血中细菌浓度成年病人:链球菌心内膜炎1to30organisms/ml葡萄球菌心内膜炎1to20organisms/ml革兰氏阴性菌血症少于1to10organisms/ml革兰氏阳性菌血症1to300organisms/ml幼儿病人:革兰氏阴性菌血症5to1000organisms/ml75%幼儿菌血症病人血液有＞100organisms/ml所以采血量一定要足够！采血量(ml)与检出率的关系010203040506070809010051015202530354045505560ml%RelativeYieldOverall血培养物每增加一毫升，真性菌血症成年人微生物的检出率增加3％但并非越多越好，超过一定数量的采血量会稀释培养瓶内的肉汤，使肉汤无法有效中和血中的抑制物质（补体、抗体、抗生素）。所以血液与肉汤的最佳比例为1：4－1：10答案：关于采集血液量采血量是影响灵敏度最关键因素成人一份标本2个培养瓶（需氧＋厌氧），每瓶8－10ml，共20ml；要求至少采两份标本，即40ml。儿童一般只需采集需氧瓶，在保证采集血量＜1％总血量下，一般为1－3ml采血量不足时应优先保证需氧瓶，因临床90％以上的感染为需氧菌或兼性需氧菌感染先采生化、凝血标本，再采血培养标本。”———关于各种血液标本的采集顺序血培养对无菌操作的要求比注射、采集生化、凝血等其它标本要高。所以要最先采集血培养标本。污染率的指标是3%（100份标本里只能有不到3个标本出现污染。）答案：采各种血液标本的先后顺序“消毒的重点是足够量的消毒剂。”———关于皮肤及培养瓶消毒皮肤消毒程序：•推荐使用碘町、洗必泰或碘伏作为皮肤消毒剂。•碘町作用1min•碘伏作用1.5-2min•洗必泰作用时间与碘町一样（但不能用于少于2个月婴儿皮肤消毒）培养瓶的消毒程序：1.去掉培养瓶口的塑料瓶盖。2.75%酒精消毒血培养瓶橡皮塞子60秒。3.自然待干。4.将标本注入培养瓶内。5.颠倒混匀标本与肉汤，以避免血液凝集。“培养瓶未使用时，需要冷藏或冷冻。”———关于培养瓶的储存温度不需冷藏，更不能冷冻。保存在15－25℃的室温即可，温度过低会导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。答案：关于未用培养瓶的储存温度“加入标本后的培养瓶夜班未能及时送到检验科，可以冷藏或放入35℃的温箱。”———关于夜班血培养的送检培养瓶夜班未能及时送到检验科，存在室温即可，不能冷藏也不能放入35℃的温箱。过夜不会对检测造成影响，但仍需尽快送检。冷藏可能导致对温度敏感的耐瑟氏菌等死亡。温箱会导致细菌进入生长对数期，从而错过检测的最佳时期。答案：关于夜班血培养的送检“患者静脉中插有导管，可直接从导管采血。”———关于采血部位不可以，常规血培养不宜从静脉导管或静脉留置装置中采集，检出污染或定植菌的可能性较大。除非怀疑导管相关性血流感染，请参照导管相关性血流感染的采血方法。答案：关于从静脉留置装置直接采血有临床意义的分离株BourbeauPPetal.RoutineincubationofBacT/ALERTFAandFNbloodculturebottlesformorethan3daysmaynotbenecessary.JClinMicrobiol.2005;43:2506-2509结果表明培养的前三天，有临床意义分离株的97%被检出，培养前两天的检出率为94%。97％痰培养标本采集与运送病原体种类繁多而复杂使下呼吸道感染病原诊断成为难题细菌（包括放线菌与奴卡菌，厌氧菌与分枝杆菌）真菌（包括肺孢子菌）病毒支原体、衣原体与立克次体原虫寄生虫咳痰途经口咽部唾液中口咽部定植菌的浓度可达108-109/ml。研究显示，国内常规痰标本中约半数存在唾液严重污染现象。不可避免地受到污染我国痰细菌培养现状标本送检率低苛养菌检出率极低结果重复性差报告速度慢感染菌与污染菌不易区分药敏结果与治疗反应存在差距咳痰标本的采集标本采集方法医师或护士直视下采集标本病人先漱口，去除表面的菌群教育病人深咳，收集从下呼吸道咳出的痰液临床上约半数咳痰标本不合格！关于咳痰标本在抗生素应用前采集痰标本;标本采集后1～2h内必须立即进行实验室处理咳痰标本应用最早且广泛，但也是最受争议的标本取标本前应摘去牙托，清洁口腔如刷牙和漱口深咳，采集标本过程中要有专业的医务人员指导无痰可用3％～5％NaCl5ml雾吸约5min导痰也可用物理疗法、体位引流、鼻导管抽吸等法取痰几种下呼吸道直接采集的标本经气管穿刺吸引（transtrachealaspiration,TTA）经胸壁针刺吸引（transthoracicneedleaspiration,TNA）经支气管镜采样支气管肺泡灌洗（bronchoalveolarlavage,BAL）经支气管镜直接吸引防污染样本毛刷（protectivespecimenbrush,PSB）开胸肺活检（open-lungbiopsy，OLB）经人工气道吸引分泌物（endotrachealaspirates，ETA）痰培养的送检次数对于普通细菌性肺炎，痰标本送检每天1次，连续2～3天。不建议24h内多次采集，除非痰液外观性状出现改变；怀疑分枝杆菌感染者，应连续收集3天清晨痰液送检；标本质量脓痰粘液样痰唾液or诱导痰(?)带血痰用革兰