虎杖蒽醌的提取分离方法

1虎杖蒽醌的提取分离方法曾里1,袁佩2(1.重庆医科大学应用技术学院4000502.重庆医科大学药学院400016)摘要虎杖具有清热解毒去风利湿活血通经之功效临床上用于治疗肝炎高血脂症烧伤烫伤等多种疾病人们利用现代药理实验技术进一步发现虎杖还有抗血小板凝聚抗白细胞减少调节Ca2+通道等作用对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点为获取虎杖有效成分蒽醌类衍生物目前仅停留在水煮醇提等传统粗糙工艺上对不同提取溶剂进行选择和对不同提取方法进行优化通过比较渗漉冷浸回流索氏和超声提取方法对虎杖蒽醌提取速度效率的影响比较各种提取方法的优劣性评价不同药材粒度不同提取时间的提取率我们选择五种极性梯度溶剂极性比较石油醚乙醚氯仿乙醇水来考查对酸解前后虎杖蒽醌类的提取效率的影响可以看出随着溶剂极性增强提取率增加但溶剂极性过强提取率反而降低选用70%乙醇溶剂作为提取剂时各种提取方法都达到较高的提取率在回流和超声提取法中提取液粘度大所含鞣质树胶等杂质较多给进一步分离提纯带来困难回流提取所用时间较长且一次提取又不完全一般提取2-3次药液受热时间也长致使其中的化学成分易改变超声提取法虽然可以提高提取速率但是对药材的粒度的大小和形状有一定要求否则提取液的后处理困难冷浸法虽然避免了加热对热不稳定性药材有一定的安全性但此法提取时间长浸提48h提取仍不完全尤其对于坚硬较粗的药材溶剂难以浸入组织内部所以提取效率不高同时溶剂消耗量大渗漉法与冷浸法相比渗漉法保持了相当的浓度差所以提取效率高浸提液杂质较少但提取时间很长溶剂消耗量特别大操作麻烦使用索氏提取法由于每一次提取都为新鲜纯溶剂保持了比较大的浓度差使得提取率提高提取液杂质少是我们实验中主要采用的提取方法关键词虎杖蒽醌提取分离虎杖蒽醌的提取分离方法曾里1,袁佩2(1.重庆医科大学应用技术学院4000502.重庆医科大学药学院400016)虎杖是一味重要的中药蒽醌类衍生物是虎杖的重要活性部位如大黄素-8-葡萄糖甙大黄素甲醚-8-葡萄糖甙大黄素大黄酸大黄素甲醚等[1]虎杖具有清热解毒去风利湿活血通经之功效临床上用于治疗肝炎高血脂症烧伤烫伤等多种疾病人们利用现代药理实验技术进一步发现虎杖的许多药理作用例如抗血小板凝聚抗白细胞减少调节Ca2+通道等[2]对虎杖中有效成分的药理作用研究是目前中草药研究的热点然而如何获取虎杖的活性成分的研究却很少目前仅停留在水煮醇提等传统粗糙工艺上我们使用渗漉浸泡回流索氏和超声提取法提取虎杖蒽醌通过提取效率及提取速率对各种提取方法进行评价寻找适合虎杖蒽醌的提取方法采用极性梯度溶剂法寻找适合虎杖蒽醌的提取溶剂1实验仪器和试剂仪器:722光栅分光光度计四川仪表九厂分析天平湘仪天平仪器厂,ZF-1型三用紫外分析仪上海顾村电光仪器厂,KQ-100性超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司试剂:石油醚(AR)乙醚(AR)氯仿(AR)95%乙醇(CP)甲醇AR乙酸乙酯(AR)醋酸镁(AR)虎杖购自中药店1,2,5,8-四羟基蒽醌(R.D.H进口分装AR)[e-mail]22实验部分2.1虎杖的提取分离方法2.1.1冷浸提取称取适当切碎的虎杖20g于500mL烧瓶中加入10倍量乙醇溶剂浸提24h共提取两次合并提取液抽滤测定体积和蒽醌含量2.1.2渗漉提取称取适当切碎的虎杖20g装入玻璃柱中用乙醇溶剂浸泡24h后开始渗漉控制流速使其用20倍量的溶剂渗漉48h为止将提取液抽滤测定体积和蒽醌含量2.1.3回流提取称取适当切碎的虎杖20g于250mL烧瓶中加入6倍量乙醇溶剂加热回流回流时间分别为0.5h1h1.5h2h将提取液抽滤分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽醌含量2.1.4索氏提取称取适当切碎的虎杖20g于索氏提取器中加入6倍量乙醇溶剂水浴加热提取回流时间分别为0.5h1h1.5h2h将提取液抽滤分别测定不同提取时间提取液的体积和蒽醌含量2.1.5超声提取在上述回流提取过程中施加超声波提取2.2蒽醌类含量测定根据蒽醌类化合物在不同介质中吸收光谱的不同采用差示分光光度法测定虎杖中蒽醌含量精确称取1258-四羟基蒽醌5.39mg置于50mL容量瓶中用甲醇溶解并稀释至刻度摇匀精密吸取0.400.600.801.001.201.60mL各两份于10mL容量瓶中一份加0.5%的醋酸镁甲醇溶液至刻度另一份用甲醇稀释至刻度摇匀分别用甲醇及0.5%的醋酸镁甲醇溶液为参比液于400-550nm区间作二者的吸收光谱图确定在两种介质中的最大吸收波长甲醇溶液最大吸收波长为430nm加入醋酸镁后的最大吸收波长为505nm因虎杖中非蒽醌类成分不与醋酸镁甲醇溶液显色因此对于配制的标准系列分别以后者为参比在505nm波长处测定各溶液的吸光度A值3结果与讨论3.1虎杖中蒽醌类物质含量测定根据醋酸镁的甲醇液与蒽醌类成分反应可得到稳定的红色而虎杖非蒽醌类成分不与醋酸镁甲醇液显色[3]实验表明醋酸镁法显色在1.5h内吸光度几乎不发生变化加入醋酸镁后蒽醌成分的最大吸收波长从430nm移动到505nm505nm处没有加入醋酸镁显色时蒽醌吸光度很低并且与加入醋酸镁显色后的吸光度差异很大因此以未显色的样品溶液作参比显色后的样品具有较大的吸光度其吸光度与蒽醌的浓度成正比从而测出样品浓度此测定方法相关系数可达到0.9990浓度在0.005-0.020mg/mL范围有良好的线性关系回归直线方程为y=0.0377x-0.0013.2溶剂药材粒度对提取率的影响根据虎杖中各种成分的溶解性我们选择五种极性梯度溶剂极性比较石油醚乙醚氯仿乙醇水来考查蒽醌类的提取效率可以看出随着溶剂极性增强提取率增加但溶剂极性过强提取率反而降低这是因为虎杖中的蒽醌大多与糖类结合成甙类具有较强的亲水性若先对虎杖进行水解后再提取这时结合态的蒽醌游离出来游离蒽醌为亲脂性物质在极性小的石油醚乙醚和氯仿中容易提取在强极性的水中提取率非常小在五种溶剂中乙醇对蒽醌的提取率最高同时乙醇毒性低价格便宜易于回收用乙醇为溶剂可以把不同类型性质的蒽醌提取出来[4~6]采用回流提取方法分别用20%40%60%70%80%90%不同浓度乙醇提取虎杖中蒽醌成分当乙醇浓度为70%时的提取率最高活性物质的提取不仅与溶剂的溶解能力相关而且与溶剂对药材植物细胞的溶涨穿透能力相关70%乙醇的溶解能力和溶涨穿透能力均达到最佳3药材粉碎度对提取率也有影响药材粉碎得越细药材粉末的表面积越大提取速度和效率就越高但药材粉末过细100目表面吸附增强反而降低提取率同时用乙醇和水作溶剂时粉末过细大量糖类鞣质蛋白质树胶等被提取出来使提取液变得粘稠而给后处理带来困难综上可知在进行提取溶剂选择时对未水解的虎杖直接提取时选用70%的乙醇提取效果最佳而对于水解之后的提取则选用氯仿为溶剂3.3提取方法提取时间对提取量的影响根据实验结果在回流索氏和超声提取法中选择四个提取时间分别为0.5h1.0h1.5h2.0h通过对不同提取时间内蒽醌类提取量的比较从而得到最佳的提取时间达到既能获得最大提取量又节约时间和能源并且减少杂质的提出当用70%的乙醇为溶剂时在提取开始阶段提取率增加很快随着时间延长提取率逐渐降低在索氏提取中每一次提取都是纯溶剂保证较大的浓度差它的提取率比回流高且速率快由于超声波的强烈空话加速振动等作用有利于溶剂渗入药材中可使药材组织内部温度升高加速药材有效成分进入溶剂促进物质的传质作用使得提取速度加快提取效率提高但是当提取液中蒽醌浓度与药材组织中的蒽醌浓度达到平衡时提取液的蒽醌浓度不再增加提取过程达到动态平衡而索氏提取法没有这种动态平衡因此在本实验中索氏提取2.0h效率最高3.4几种提取方法比较选用70%乙醇溶剂作为提取剂时各种提取方法都达到较高的提取率对于回流提取索氏提取和超声提取提取率大体相当且都高于冷浸和渗漉在回流和超声提取法中提取液粘度大所含鞣质树胶等杂质较多给进一步分离提纯带来困难回流提取所用时间较长且一次提取又不完全一般提取2-3次药液受热时间也长致使其中的化学成分易改变超声提取法虽然可以提高提取速率但是对药材的粒度的大小和形状有一定要求否则提取液的后处理困难冷浸法虽然避免了加热对热不稳定性药材有一定的安全性但此法提取时间长浸提48h提取仍不完全尤其对于坚硬较粗的药材溶剂难以浸入组织内部所以提取效率不高同时溶剂消耗量大渗漉法与冷浸法相比渗漉法保持了相当的浓度差所以提取效率高浸提液杂质较少但提取时间很长溶剂消耗量特别大操作麻烦使用索氏提取法由于每一次提取都为新鲜纯溶剂保持了比较大的浓度差使得提取率提高提取液杂质少是我们实验中主要采用的提取方法参考文献[1]姚桂根李莉孙小萍,等.由制首乌制成首乌片的生产过程中蒽醌类成分的测定[J].中成药研究19826(12)9—12[2]张喜云虎杖的化学成分药理作用与提取分离[J]天津药学199911(3)13[3]张继天.天然药物化学[M].北京:人民卫生出版社198642~46[4]王素贤华会民吴立军,等.茜草中蒽醌类成分研究[J].药学学报199227(10)743—747[5]蔡雄潘得济陈御石,等.伸筋草和玉柏石松中的蒽醌成分的分离和鉴定[J].上海医科大学学报199118(5)383—385[6]杨燕军舒惠一闵知大.巴戟天和恩施巴戟的蒽醌化合物[J].药学学报199227(5)358—364