中药及其制剂的含量测定方法

第十四章中药及其制剂分析概论第一节概述一、中药及其制剂分析的特点中药和中药制剂应具备如下特征：•药性，即四气（寒、热、温、凉）、五味（酸、甘、苦、辛、咸），以及脏腑、经络、三焦、营卫气血等归经和升降沉浮等。•按中医药学术语表达的功效，如解表、凉血、清热解毒、活血化瘀等。按君、臣、佐、使关系考虑药物之间的七情、十八反、十九畏、药对、禁忌、有毒无毒等配伍组方。我国最早中医学著作《黄帝内经》及中药学著作《神农本草经》为代表。以阴、阳、表、里、寒、热、虚、实八纲表示机体的功能状态；以望、闻、问、切四诊作为了解机体表观状态的手段。•ChP从1963年版开始，分为两版，其中第一版收载中药材和中药制剂。•2000版一部收载中药品种992种，其中中药材532种，中药制剂460种，增修订品种比1995年版ChP有了发展。•2000年版ChP中：现代分析技术有：显微鉴定技术、化学鉴别方法、色谱法等对制剂所含的药材进行鉴别；检查杂质方面：杂物、砷盐、重金属、农药残留量等，并对药物中明确有效成分的品种建立了含量测定方法等方面。中药制剂质量的影响因素：容易吸潮、染菌、有效成分也可能由于不稳定而损失。原药材的质量受多种因素的影响：生长环境、采收时间、贮藏条件的不同，有效成分的含量可能有很大的差异，可直接影响制剂的质量。总结：应按照GMP的要求，从药品生产的各个环节以及销售、使用等加以全面控制，才能确保药品的质量。中药制剂分析的样品一般需要经过提取、纯化等预处理过程，以排除干扰组分的干扰。GAP中药材生产质量管理规范，由国家药品监督管理局发布，2002年6月1日起执行。二、中药及其制剂的分类与质量分析要点。•传统剂型有：丸、散、膏、丹、酒、汤、茶、锭等；•现在剂型有：口服液、颗粒剂、片剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、气雾剂、注射剂等。•按制剂物态进行分类：中药材及其炮制品、液体制剂、固体制剂、半固体制剂。（一）中药材及其炮制品（二）液体制剂1．合剂与口服液：煎煮法、渗漉法、蒸馏法等；2．酒剂和酊剂：酒剂用浸渍法、渗漉法或其他制备方法，酊剂可用溶解法、稀释法、浸渍法或渗漉法。检查项目：乙醇量测定法，采用气相色谱法。进行甲醇限量、微生物限度和最低装量检查。3．注射剂：中药注射剂系指从药材中提取的有效物质制成的可供注入体内的灭菌溶液或乳状液，以及供临用前配制成溶液的无菌粉末或浓溶液。•中药指纹图谱包括：色谱指纹图谱（HPLC、GC、TLC等），光谱指纹图谱和脱氧核糖核酸指纹图谱等。（三）半固体制剂1．煎膏剂：是指药材煎煮、去渣浓缩后，加炼蜜或糖制成的半流体制剂，有的煎膏剂还可加入药材细粉，搅拌混匀后制的，又称膏滋。2．浸膏剂和流浸膏剂：流浸膏剂是指用适宜的溶剂剂出药材中的有效成分，蒸去部分溶剂，调整浓度至规定标准而制成的制剂，一般加20%~50%浓度的乙醇作为防腐剂。浸膏剂：是指用适宜的溶剂浸出药材中的有效成分后，蒸去全部溶剂，浓缩成稠膏状或块、粉状，每1g浸膏一般相当于原药材2g~5g•（四）固体制剂1．丸剂：是指药材细粉或药材提取物加适意的粘合剂或辅料制成的球形或类球形的制剂。分蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、浓缩丸、微丸等。检查项目：水分、重（装）量差异、溶散时限、无菌检查等。水分检查：甲苯法、烘干法、减压干燥法检查。2．散剂：是指一种或多种药材混合制成的粉末状制剂，分为内服散剂和外用散剂两种。检查项目：均匀度、水分和装量差异等。3．颗粒剂：是指适宜的辅料与药材提取物或与药材细粉制成的颗粒状制剂。分为可溶性、混悬性和泡腾性颗粒剂。检查项目：粒度、水分、溶化性、装量差异等。4．片剂：是指药材细粉或浸膏加辅料压制而成的片状制剂。检查项目：重量差异和崩解时限。5．胶囊剂：分硬胶囊剂、软胶囊剂和肠溶胶囊剂。检查项目：水分、装量差异、崩解时限，水分含量限度。三、中药及其制剂分析中待测成分的提取分离与纯化方法（一）提取方法：1．萃取法；2．冷浸法；3．回流提取法；用于固体制剂的提取。4．连续回流提取法：；5．水蒸汽蒸馏；6．超声提取法；7．超临界流体萃取（SFE）。见图14-1（二）纯化方法纯化是指组分被提出后，还需进一步的处理，以除去干扰组分的干扰。测定方法：容量法、紫外分光光度法等。萃取二次可分别除去中性、酸性脂溶性杂质及水溶性杂质，达到纯化的目的。柱色谱法也是常用的纯化方法，常用的纯化方法，常用的固定相有硅胶、氧化铝、大孔吸附树脂等。第二节中药及其制剂分析的一般程序基本程序：供试品的抽取、检验依据和分析方法准备、样品的真伪鉴别试验、样品质量检查、样品中主药的含量测定和检验记录等。一、取样与样品保存注意事项：（1）供试品要具有一定的代表性、科学性、真实性和代表性；（2）必须严格按照规定的取样方法进行取样：均匀、合理。（一）中药材取样法：1．取样前应注意品名、产地、规格等，检查包装的完整性，有无水迹、霉变等异常现象；2．从同批药材包件中抽取样品的原则；3．对破碎、粉末状或大小在1cm以下的药材，可采用样器取样；4．将取得的样品混合均匀，即为总样品，可采用四等分法（又称“四分法”）反复数次直至最后到余量足够供检验用。（二）中药制剂取样法1．粉状中药制剂（散或颗粒剂）；2．液体中药制剂（口服液、酊剂、酒剂、糖浆）；3．固体种成药（丸剂、片剂）；4．注射剂；5．其他剂型中的中药制剂。二、鉴别性状鉴别、显微鉴别、理化鉴别等。三、检查一般理化检查项目、重金属检查。四、含量测定有效成分测定、有效部位含量测定。五、检验记录真实、详细、整洁。第三节中药及其制剂的定性鉴别方法一、性状鉴别；二、显微鉴别；三、理化法鉴别；（一）显微化学反应法（二）微量升华法（三）荧光分光光度法（四）颜色反应及沉淀反应法四、色谱法鉴别。第四节中药及其制剂的杂质检查与一般质量控制方法•杂质检查项目：水分、灰分、酸不溶性灰分、砷盐和重金属限量、有机磷和有机氯农药残留量。•一般质量控制项目还有浸出物、挥发油、总氮测定、辅料的质量检查与剂型有关的检查等内容。一、水分检查法检查目的：水分含量过高，可引起制剂结块、霉变或有效成分的分解；药典附录收载的水分测定法共有四种；第一法为烘干法；第二法：甲苯法；第三法为减压干燥法；第四法：气相色谱法测定水分。二、总灰分和酸不溶性成分总灰分是指药材或制剂经加热炽灼灰化遗留的无机物。测定的主要目的：控制泥土、砂土的量，同时还反映药材生理灰分的量；测定方法：炽灼使完全灰化至恒重，根据残渣的重量计算总灰分的含量百分率；检查原则：如以合格的药材为原料，原则上可以不再检查该项目；酸不溶性成分测定：灰分加入稀HCl后过滤，再炽灼至恒重，即得酸不溶性灰分的量。三、重金属：以铅、汞、镉、铜等对人体均有严重的毒害的物质。目前现行标准控制在百万分之二十以下。世界卫生组织对铅应控制在百万分之十以下，镉应控制在百万分之0.3以下。有机破坏方法：干法和湿法两类。例如：制剂中的铅测定可选用二硫腙比色法和原子分光光度法。四、砷盐来源：中药原药材受除草剂、杀虫剂和化学肥料等影响。ChP（2000年版一部）中收载的砷盐有：（1）古蔡氏法（2）二乙基二硫代氨基甲酸银法。破坏方法：采用碱融法。JP中还收载了加硝酸镁乙醇溶液破坏的方法，适用于中药制剂。五、残留农药种类：有机氯类如艾氏剂、六六六、氯丹等；有机磷类如三硫磷、氯硫磷、蝇毒磷等；氨基甲酯类如西维因；二硫代氨基酸酯类如福美铁、代森锰等；无机农药如磷化铝、砷酸钙等；苯氧羧酸类除草剂如2，4-D、2，4，5-T等。检查内容的确定：接触农药不明的样品一般可测定总有机氯量和总有机磷量；注：ChP（200年版一部）新增加有机氯农药残留量“检查”项目。1．总氯量的测定：照氧瓶燃烧法破坏；2．总磷量的测定：供试品萃取后，过硅土柱，洗脱液浓缩后，用氧瓶燃烧法处理，磷钼酸比色法测定；3．气相色谱法：分离效能高，具有高灵敏度的专属的检测器，是对残留农药进行定性和定量分析的最常用的方法；固定液：硅氧烷类，如OV-17，OV-21，SE-30等；载气：N2；测定有机氯检测器；电子捕获检测器（ECD）；测定有机磷或硫使用火焰光度检测器（FPD）。•示例：中药中有机磷农药敌敌畏、乐果、马拉硫磷和对硫磷等测定方法：气相色谱条件：柱长2m，内径3mm，担体为ChromosorbW/AW-DWCS，涂布2.5%SE-30和3%QF-1混合固定液，火焰光度检测器检测，进样口温度220℃，柱温180℃，载气为N2。对照品溶液：加苯或氯仿定量稀释成1mg/ml，用前加二氯甲烷稀释成1μg/ml。供试品溶液：中药细粉10g，加中性Al2O30.5g，精密加入CH2Cl220ml，振摇30min，滤过，取续滤液。本方法快速、简便、准确、具有良好通用性。第五节中药及其制剂的含量测定方法常用含量测定方法：化学分析法、分光光度法、薄层扫描法、高效液相色谱法。一、化学分析法：包括容量法和重量法。示例：昆明山海棠片的含量测定方法采用提取后称定生物碱重量法。容量法的应用还有酸碱滴定法测定制剂中总生物碱的含量等。二、分光光度法：简便，灵敏。ChP中UV法主要用于几个最大吸收波长较高，吸收较强的组分的含量测定，如小檗碱、芦丁、黄芩苷、丹皮酚等。示例：左金丸中小檗碱的含量测定：黄连为君药，小檗碱为其主要有效成分，故测定其含量。用吸收系数法测定。比色法在中药制剂分析中的应用：一般用于一类成分含量的含量测定，如总黄酮、人参总皂苷的含量测定。三、薄层扫描法：是用一定波长的光照射在薄层板上，对薄层色谱有吸收紫外光和可见光的斑点或激发后能发射除荧光的斑点进行扫描，将扫描得到的图谱及积分数据用于药品的鉴别、检查和含量测定的方法。优点：具有分离效能高、快速、简便等。1．试验条件的选择：A、薄层色谱条件：组分应能完全分离，斑点对称，均匀，不拖尾，是先决条件；B、检测方法：吸收测定法和荧光测定法；C、测定方法：有反射法和透射法两种；D、扫描方式：单波长和双波长（见图14-3）；线性扫描和锯齿扫描。E、散射参数SX：见图14-42．测定方法的选择：（1）外标法；（2）内标法；3、注意事项：A、薄层的厚度应均匀，表面平整，最好使用预制板；B、点样准确，原点大小应一致；C、喷洒显色剂应均匀，量应适中；D、某些斑点颜色易挥发或对空气不稳定，可用一洁净的玻璃板盖在薄层板上，并用胶布加以固定；E、本法的线性范围较窄，应在其线性范围内测定。•示例：ChP（2000年版）一部中脑得生丸中人参皂苷的含量测定：供试品除去脂溶性杂质，取出人参皂苷，作为供试品溶液；另取对照品人参皂苷。•固定相：硅胶G薄层板；展开剂：氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）。•显色剂：10%硫酸乙醇液，110℃加热至斑点显色清晰，取出。•扫描波长：λS=525nmλR=700nm，测定供试品和对照品的吸收度积分值，计算，即得。•本法使用两点校正法，标准曲线可作线性回归处理。四、HPLC法优点：分离效能高，分析速度快，应用范围光，其重现性和准确度均优于薄层扫描法，是中药制剂含量测定首选的方法。1．色谱条件的选择：多使用反相高效液相色谱法（RP-HPLC），即使用非极性的固定相，其中ODS应用最多；使用甲醇-水或乙腈-水的混合溶剂作为流动相；一般使用紫外检测器检测，紫外检测器灵敏、稳定。2．含量测定法：（1）外标法；（2）内标法。3．供试品溶液的制备：一般经提取制得，不再需要纯化处理。但组成复杂的制剂，仍需采用萃取、柱色谱等预处理方法进行纯化处理。注：中药制剂中多含有糖，制备时宜使用高浓度的醇或其他有机溶剂提取测定组分，最好不使用水为溶剂，以免提取的糖污染色谱柱，提取的方法视制剂的情况而定，可采用萃取（用于液体制剂）、回流或超声振荡提取（用于固体制剂）。•示例：桂枝茯苓丸中桂皮酸的含量测定（其中桂枝为君药），采用HPLC法