第三章动物实验基本技术-(NXPowerLite)

实验动物的抓取实验动物的给药方法动物体液及样品的采集各种实验动物的抓取各种给药途径的动作要领各种实验动物体液的采集实验动物的抓取、固定1.小鼠抓取和固定方法步骤：1、用右手拇指和食指捏住小鼠尾巴中部将小鼠提起，放在饲养盒的面罩上。2、用左手拇指和食指迅速、准确地捏住小鼠的两耳后及颈背部的皮肤，将小鼠提起。3、翻转左手掌，以左手掌心和中指夹小鼠背部的皮肤，使小鼠整个呈一条直线。4、用左手无名指压住小鼠背部的皮肤，小指压住小鼠的尾巴根部。5、松开捏住小鼠尾巴的右手拇指和食指。固定时注意，过分用力会使小鼠颈椎脱臼，若用力过轻其头部能反转过来咬伤实验者的手。这种固定方法是灌胃给药和腹腔注射给药常用的方法。2.大鼠抓取固定方法抓取动作如图：固定方法方法步骤：4-5周内的大鼠，方法同小鼠。周龄较大的，则：1、首先戴好防护手套。2、用右手拇指和食指抓住大鼠尾巴中部将大鼠提起，放在大鼠饲养盒的面罩上。3、左手顺势按、卡在大鼠躯干背部，稍加压力向头颈部滑行。4、以左手拇指和食指捏住大鼠两耳后部的头颈皮肤，其余三指和手掌握住大鼠背部皮肤，完成抓取保定。豚鼠的抓取和固定方法步骤：1、先用左手轻轻扣、按住豚鼠背部。2、顺势抓紧其肩胛上方皮肤，拇指和食指环箍其颈部。3、用右手轻轻托住其臀部，即可将豚鼠抓取保定。抓豚鼠时，一般不要抓腰腹部位，否则易造成肝破裂而引起死亡。家兔的抓取和固定(一)方法1：步骤：1、用右手抓住兔颈部的被毛和皮肤，轻轻把兔提起。2、用左手托住兔的臀部。方法2步骤：1、打开保定架的上盖，抓取并将兔放进架内，迅速关上保定架的上盖。2、右手抓住兔耳朵将头部拉过保定架的卡栓，将兔的脖子保定。3、如果兔挣扎，可用手在它的背上轻轻抚摸，使其安静。外生殖器与肛门间隔短的是♀外生殖器与肛门间隔长的是♂成年动物可直接肉眼辨认1、短期标记法：主要用于浅色动物3.5-5％苦味酸溶液（黄色）0.5%中性红或碱性品红溶液（红色）2％硝酸银溶液（咖啡色，涂后光照10分钟）煤焦油酒精溶液（黑色）龙胆紫溶液（紫色）2、永久标记法（打耳孔法）：小型动物3、剪趾法：小型动物4、剪尾法：大、小鼠，仅限与两组间区分5、烙印法：刺号钳，中、大型动物6、针刺法：中、大型动物7、号牌法：耳标签、项圈、腿圈，中、大型动物8、剪毛法：大动物9、笼子标号1、剪毛：弯头剪毛剪2、拔毛：大小鼠尾静脉、家兔耳缘静脉注射3、剃毛：将剃毛部位先用剪刀粗剪一遍，蘸温肥皂水润湿，用剃刀顺着被毛方向剃毛，用电动剃毛推剪，则逆被毛向剃毛。4、化学脱毛：常用脱毛剂①8%硫化钠水溶液②硫化钠3份，洗衣粉1份、淀粉7份，加水调成糊状③硫化钡50克，氧化锌25克，淀粉25克，加水100毫升调成糊状④硫化钠10克，生石灰15克，加水到100毫升，适合犬和其他大动物。1、皮肤给药:优点：简单易操作缺点：方法粗糙，对动物产生的药效不佳。2、胃肠给药：灌胃3、胃肠外给药：注射给药用左手固定鼠，右手持灌胃器(安好灌胃针并已吸好药物)，将灌胃针从鼠的嘴角插入口腔，压迫鼠的头部，使口腔和食管成一直线，轻轻转动针头刺激鼠的吞咽，将灌胃针沿咽后壁慢慢插入食管，如动物挣扎厉害，退出灌胃针，待动物安静下来，重新插入，灌胃针前端达到膈肌水平，即可慢慢推灌药液，如很通畅，则说明已进入胃内。如不通畅，且动物挣扎厉害，须拔出重新操作。常用灌胃量：小鼠：0.2～1ml,大鼠1～4ml，豚鼠1～5ml。犬、兔和猫的灌胃法先将动物固定，再将开口器固定于动物口中，压住舌头，然后将灌胃管(常用导尿管代替)从开口器的小孔插入动物口中，再沿上腭壁顺食管方向送入胃内，插入动作要轻、慢，边插边密切注意动物的反应。事先将灌胃管在水或生理盐水中泡一下，这样容易插入而不损伤食管。将灌胃管的外端浸入水中，如有气泡逸出，则说明灌胃管误入气管，需拔出重新插入，插好后将注射器连于灌胃管慢慢将药液推入。在正式推药之前，亦可先用温水试灌一次，如果水不从嘴角流出，灌注很通畅，动物不挣扎，则说明进入胃内，为避免灌胃管内残留药液，需再注入5mL生理盐水，然后拔出胃管，取下开口器。常用灌胃量：豚鼠1～5mL，兔80～150mL，犬200～500mI。三、胃肠外给药：注射给药（一）皮内注射局部去除被毛，消毒后，用皮试针头紧贴皮肤皮层刺入皮内，然后再向上挑起再稍刺入，即可注射药物，注射时会感到有很大阻力。注射后可见皮肤表面鼓起一白色小丘，停留片刻再拔出针头，以免药液漏出。(二)皮下注射注射时，用左手拇指和食指轻轻提起动物皮肤，右手持注射器，将注射针刺入皮下，若针头容易摆动则证明针头已在皮下，推送药液，缓慢拔出注射针，稍微用手指压片刻针刺部位，以防药物外漏。皮下注射部位：小鼠选颈背部皮肤；大鼠选背部或侧下腹部；豚鼠选大腿内侧、背部或肩部皮下脂肪少的部位；兔选背部或耳根部；猫、犬选大腿外侧。（三）肌肉注射肌肉注射比皮下和腹腔注射用得较少，但当给动物注射不溶于水而混悬于油或其他溶剂中的药物时，常采用肌肉注射。动物肌肉注射时，应选用肌肉发达，无大血管经过的部位，如兔、猫、犬、猴的两侧臀部或股部。（四）腹腔注射大鼠、小鼠腹腔注射时，左手抓取并固定好动物，将腹部朝上。右手持注射器将针头在下腹部腹白线稍左或偏右的位置，从下腹部朝头方向几乎平行地刺入皮下，进针3~5mm，再使针头与皮肤呈45°角斜穿过腹肌，当针尖穿过腹肌进入腹腔时，有落空感，然后固定针头，保持针尖不动，回抽，无回血，无肠液、尿液，便可缓缓推入药液。小鼠的一次注射量为0.1~0.2ml/10g体重。大鼠一次注射量为：1~2ml/100g体重。兔的注射部位在腹部近腹白线lcm处，犬在脐后腹白线侧边1~2cm处。(五)静脉注射⒈大、小鼠静脉注射常用尾静脉注射。大、小鼠尾静脉共有3根(左、中、右)，一般常选用两侧的静脉。注射前，先把动物固定在暴露尾部的鼠尾固定器内(可用烧杯、铁丝罩或粗试管等物代替)，拔去尾部静脉走向的毛，置鼠尾于45~50℃的温水中浸泡几分钟或用75％酒精棉球反复擦拭，以达到消毒、血管扩张及软化表皮角质的目的。开始注药时宜少量且缓慢，仔细观察，如无阻力，表示针头已进入静脉，同时可见静脉血液被注射进去的药液向前推进。如出现白色皮丘说明未刺人血管，应拔出针头重新穿刺。注射完，取一棉球或纱布用力按住注射部位并轻轻揉动。如需反复注射，应尽量从尾的末端开始，另外，左右两根血管可交换选择使用。⒉兔的静脉注射一般采用外耳缘静脉。给兔注射前，先将兔放入固定盒内固定好，拔去注射部位的毛，用75%的酒精消毒，手指轻弹兔耳，使静脉充盈。左手食指和中指夹住静脉的近心端，拇指绷紧静脉的远心端，无名指及小指垫在下面，右手持注射器，尽量从静脉的远心端刺入血管，回一下血，放松对耳根处血管的压迫，移动拇指于针头上以固定，放松食、中指，将药液注入。注射完毕，用棉球压住针眼，拔去针头，继续压迫数分钟。如需反复注射，应尽量从耳的末端开始。⒊豚鼠的静脉注射一般采用前肢皮下头静脉或后肢小隐静脉或者浅背侧足中静脉注射，此外豚鼠的耳缘静脉也可注射。豚鼠的静脉管壁较脆，注射时应特别小心。其他给药途径：脑内给药：常用于微生物动物实验，将病原体等接种于被检动物脑内。脊椎给药：用于局部性损伤的治疗等家兔椎管内注射一、血液采集选择什么采血部位与使用何种采血方法，需视动物种类、检测目的、试验方法及所需血量而定。采血量采血部位动物种类中量心脏大鼠、小鼠、豚鼠断头大鼠、小鼠翼下静脉鸡、鸭、鸽、鹅颈动脉鸡、鸭、鸽、鹅大量股动脉犬、猴、猫、兔心脏犬、猴、猫、兔颈动脉、颈静脉马、牛、山羊、绵羊摘眼球眶动脉和静脉大鼠、小鼠1.小鼠、大鼠采血法（1）尾静脉采血法：用血量不多时，可采用本法。A.剪尾或切开尾静脉动物固定后，露出尾巴，使尾部血管扩张，擦干，剪去尾尖（小鼠约1-2mm，大鼠5-10mm），血自尾尖流出，让血液滴入盛器或直接用吸管吸取。也可切开尾静脉一段，用试管等接住血液。该法可反复多次使用。（2）.心脏采血将动物仰卧固定在鼠板上，剪去胸前区部位的被毛，消毒。在左侧第3-4肋间，用左手食指摸到心搏处，右手持注射器选择心搏最强处穿刺。当针穿刺入心脏时，血液由于心脏搏动的力量自动进入注射器。如不需保留动物存活时，也可麻醉后切开动物胸膛，直接用注射器刺入心脏内采血，也可剪破心脏直接用注射器或吸管吸血。（3）.摘眼球采血此法常用于鼠类大量采血。所采的血液微眶动脉和眶静脉的混合血。采血时，用左手抓住动物颈部皮肤，并将动物轻压在实验台上，稍微侧卧，左手拇指尽量将动物眼周围皮肤往眼后压，使动物眼球突出并充血，用弯头镊子迅速摘除眼球，眼眶内很快流出血液。该法可避免断头取血时因组织液混入所导致的溶血现象，且由于取血过程中动物未死，心脏还在跳动，因此取血量多于断头法。一般可取约为小鼠体重4-5%的血液量。但该方法易导致动物死亡，只能一次采血。（4）眶静脉丛（窦）采血小鼠为眶静脉窦，大鼠、地鼠、沙鼠等位眶静脉丛。将动物麻醉，采用侧眼向上固定体位，用左手拇指和食指从背部较紧地握住大（小）鼠颈部。取血时，左手拇指及食指轻轻压迫动物的颈部两侧，使头部静脉血液回流困难，眼球充分外突，眶静脉丛充血。2.兔的采血方法（1）.耳缘静脉采血将兔固定后选耳静脉清晰的耳朵，将耳静脉部位的毛拔去，用75%酒精局部消毒，待干。用手指轻轻摩擦兔耳，使静脉扩张，用注射器在耳缘静脉末端刺破血管待血液漏出取血或将针头逆血流方向刺入耳缘静脉取血，取血完毕用棉球压迫止血。此种采血法一次最多可采血5-10ml。（2).耳中央动脉采血经兔耳中央的一条较粗、颜色鲜红的动脉采血，可采到约10-15ml/次血。操作方法基本与静脉采血同。由动脉末端，朝向心方向进针，取血完毕后注意止血。（3）心脏采血方法同小鼠心脏采血。注意事项：不要在耳近根部进针，因其耳根部组织较厚，血管游离，位置较深，不清晰，易刺透血管造成皮下处血。兔胆小易惊，其外周血液循环对外界环境刺激极为敏感，耳中央动脉易发生痉挛性收缩，因此，抽血前必须让兔耳充血，并赶在动脉扩张而未发生痉挛性收缩前立即抽血。二、粪便和尿液采集：⑴代谢笼法:此法较常用于大、小鼠，成熟小鼠尿量1-3ml/24h，大鼠为55-75ml/24h⑵导尿法：常用于雄兔、犬等动物，要轻度麻醉，可以采到无污染的尿液。⑶压迫膀胱法：此法适用于兔、猫、犬等大动物。⑷输尿管插管法1、胸水、腹水采集：穿刺2、消化液采集：唾液，胃液，胰液，胆汁3、精液采集：中、大动物用假阴道，小动物穿刺附睾来采集精液。4、脑脊液采集：手术或小脑延髓池抽取5、骨髓采集：大动物活体穿刺，小动物处死后取股骨或胸骨骨髓各种实验动物的抓取各种给药途径的动作要领各种实验动物体液的采集重点难点麻醉的准备工作各种麻醉药的基本特性实行安乐死的基本方法麻醉前准备：禁食8~12h，防止呕吐，可饮水根据实验部位和种类，给动物脱毛。犬、猪、猴等大动物可在麻醉前给予一些药物以减少动物紧张，减少支气管分泌（一）常用的麻醉剂动物实验中常用的麻醉剂分为挥发性麻醉剂和非挥发性麻醉剂。1、挥发性麻醉剂，包括乙醚、氯仿、氟烷等，常适用于各种动物的全身麻醉。乙醚无色透明，挥发性很强的液体，有特殊气味，易燃易爆。麻醉机制主要是抑制中枢神经系统。优点：其麻醉量和致死量差距大，所以安全度亦大，动物麻醉深度容易掌握，而且麻后苏醒较快。缺点：对局部刺激作用大，可引起上呼吸道粘膜液体分泌增多，再通过神经反射可影响呼吸、血压和心跳活动，并且容易引起窒息，故在乙醚吸入麻醉时必需有人照看，以防麻醉过深而出现以上情况。2非挥发性麻醉剂（1）全身麻醉剂A、巴比妥类：包括巴比妥酸衍生物的钠盐组成，如巴比妥钠、戊巴比妥钠、流喷妥钠等，是有效地镇静及催眠剂。根据作用的时限可分为长、中、短、超短时作用四大类。其中长、中时作用的巴比妥类药物多用于动物临床和抗痉药物或催眠剂，作为实验麻醉所使用的则属于短、超短时作用的巴比妥类药物。巴比妥类药物主要作用是阻碍冲动传入大脑皮质，从而对中枢神经系统起到抑制作用。应用催眠剂量，对呼吸抑制影响很小，但应用过量却影响呼吸，因为过量可导致呼吸肌麻痹甚至死亡，同时也抑