唾液淀粉酶最适pH值

唾液淀粉酶最适pH值的测定陆绍龙广西医科大学七年制临床医学10级4班摘要：目的：1）掌握测定唾液淀粉酶最适pH值的测定方法以及原理；2）熟悉不同pH值缓冲溶液的配制和分光光度计的使用；方法：通过唾液淀粉酶在不同pH环境中水解淀粉，测出未被水解的淀粉与碘液结合成的蓝色复合物的分光光度值，根据实验数据判断酶的最适pH；结果:当pH=6.6时，唾液淀粉酶的活性最高。关键词:唾液淀粉酶pH分光光度计前言：酶学与医学的关系密切。人体的许多疾病和酶都密切相关。酶分子中的许多极性基团，在不同的pH条件下解离状态不同，其所带电荷的种类和数量也各不相同，酶活性中心的某些必需基团往往仅在某一解离状态时才容易同底物结合或具有最大的催化活性。此外，pH的改变还可以引起酶活性中心的构象改变,因此pH的改变对酶的催化作用影响很大。人的唾液中99%是水，有机物主要是唾液淀粉酶、粘多糖、粘蛋白及溶菌酶等，无机物有钠、钾、钙、氯和硫氰离子等。唾液中含有的一种有催化活性的蛋白质，可以催化淀粉水分解为麦芽糖。唾液淀粉酶发挥作用的最适pH值在中性范围内，唾液中的氯和硫氰酸盐对此酶有激活作用。食物进入胃后，唾液淀粉酶还可继续使用一段时间，直至胃内容物变为pH值约为4.3~4.8的酸性反应为止。正文：1.材料与方法：仪器：吸量管（5mL，1mL），试管若干，试管架，小烧杯，洗耳球，721G-722G分光光度计，恒温箱（含温度计），一次性纸杯，pH试纸。试剂：2.5g/L淀粉，0.2mol/LNa2HPO4溶液，0.2mol/LNaH2PO4溶液,蒸馏水，唾液，碘液。2.操作步骤1）1.不同pH缓冲液配制按下表加样，最后加蒸馏水稀释至10ml。pH6.06.26.46.66.87.07.20.2mol/LNa2HPO4溶液(mL)0.6150.9251.3251.8752.4503.0503.6000.2mol/LNaH2PO4溶液(mL)4.3854.0753.6753.1252.5501.9501.400注：应用pH值试纸来确定所配溶液pH。2）唾液的获取先漱口1~2次，然后含一大口水约1min，期间做咀嚼运动，然后收集至杯子中。3）淀粉用量的确定123空白7.0pH缓冲液0.90.90.90.92.5g/L淀粉0.10.20.3——唾液（稀释10倍）0.10.10.10.1混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O5.95.85.76混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其用量4）酶稀释液的倍数确定稀释倍数51015202530酶液（mL）10.50.40.250.20.2H2O（mL）44.55.64.754.85.8稀释倍数51015202530空白7.0pH缓冲液（mL）0.90.90.90.90.90.90.92.5g/L淀粉由第3步操作确定唾液0.10.10.10.10.10.1——混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O6666666混匀，观察现象，并选择适中一支，记录其稀释倍数5）最适pH值的确定pH6.06.26.46.66.87.07.2pH缓冲液0.90.90.90.90.90.90.9某倍数唾液（由第四步确定）由第3步操作确定混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液H2O6666666混匀，37℃水浴7.5min，然后向每管加2滴碘液A6600.1320.1640.0790.0650.1110.1250.100以蒸馏水调零，用分光光度计测出各试管中溶液的A值，记录好数据。6）实验数据据处理以A660为纵坐标，pH为横坐标作图。3.结论：根据实验数据做出的平滑曲线图可知，最低点对应的pH值即为唾液淀粉酶的最适pH值，所以由本次实验得出唾液淀粉酶的最适pH值为6.6。4讨论：（1）此次实验是根据唾液淀粉酶催化底物水解量来测最适pH值，因此在唾液淀粉酶活性最高时要保证底物过量，淀粉分解的越多，A值就小；（2）由实验可知：过酸过碱都会抑制酶的活性，使之淀粉的分解减少，A值增大；（3）本次实验要选取合适的底物浓度，如浓度过高火过低，可导致颜色过浓或过浅，难以判断；5.参考文献[1]吴耀生.医学生物化学与分子生物学实验指南【M】：人民卫生出版社，2007，74-75[2]查锡良、周春燕.生物化学【M】.第七版北京：人民卫生出版社.[3]关爱萍.“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”的探究性实验教学设计[J].生物学教学,2004,(09)[4]尚渤程、黎一苇.人体常见的pH值【J】.生物学教学.2009；12[5]吴举宏．关于“ｐＨ对酶活性的影响”３种实验方案的比较分析．生物学通报，2008，43—４4[6]王雯斌，解金辉．“不同ｐＨ对酶活性的影响”实验方法的讨论及改进【J】．中学生物教学，2008.[7]许冰、原媛、赵文献.pH值对酶活性影响的实验观察【J】.临床合理用药杂志.2010;3(10):35[8]刘培生,叶宝珍.唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的改进[J].实验教学与仪器,1999,(10)[9]林焕棠.对唾液淀粉酶对淀粉的消化作用实验的探索[J].生物学教学,1994,(07)[10]周照县.对一些参考书修改“唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”实验步骤的一点看法[J].生物学通报,1991,(11)[11]徐丙容.“探究唾液淀粉酶对淀粉的消化作用”分组实验实录.唾液淀粉酶最适pH值的测定陆绍龙广西医科大学七年制临床医学10级4班4组