重组肠激酶和目的蛋白的分离纯化方案

重组肠激酶和目的蛋白分离纯化推荐方案重组肠激酶专为切割重组表达融合蛋白设计，分为两个类型：rEK-B和rEK-H，分别为不含有His-6和含有His-6重组标签。雅心生物目前生产的为rEK-B。不含His标签，相对比活高，约为20000Unit/mgpro，按照活性定义，1Unit可以切割0.5mg目的蛋白，则酶切液中的重组肠激酶相对于目的蛋白的含量为万分之一（0.01%）。所以，在进一步的实验中，可以不考虑其对下游实验的影响，建议可以不纯化。如果确实需要去除rEK，建议的去除方法如下：如果使用亲和层析，可以利用胰蛋白酶抑制剂亲和胶，由于肠激酶是一种丝氨酸蛋白酶，胰蛋白酶抑制剂可以与肠激酶结合，从而达到纯化目的。建议利用离子交换层析分离去除微量的肠激酶。PH8.0条件下，肠激酶与DEAE胶结合，并且在0.15MNaCl中可以被洗脱。可以利用目的蛋白与肠激酶电荷以及与DEAE胶的结合以及洗脱的不同条件将二者进行分离。