早中期妊娠EB病毒感染的前瞻性研究

早中期妊娠EB病毒感染的前瞻性研究淄博市妇幼保健院郑淑芳Page2附录3课题研究技术报告2课题研究工作报告1Page3课题研究的现状3课题研究的目的2课题研究的理由1课题研究过程5课题研究工作报告1课题研究的意义4课题研究工作报告1Page4有关妊娠妇女病毒感染的研究一直被国内外学者所关注，巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等能引起异常妊娠结局已被公认。随着社会的进步，科学的发展，满足人们日益增长的生殖健康需求，促进优生优育，降低出生缺陷，减少不良妊娠结局的发生，是我们医务工作者的重任。我院为淄博市唯一一家三甲妇幼保健院，有充足的病员保障，优秀的人才梯队，先进的仪器设备，协调的合作科室和医院的各项扶持政策保证课题的顺利进行。课题研究的理由1Page5本课题旨在研究早中期妊娠妇女EB病毒感染率，并用免疫学、分子生物学方法探讨早中期妊娠妇女EB病毒感染对妊娠结局的影响，包括引起早产、死胎、流产、胎儿畸形等,并初步探讨EB病毒对妊娠结局影响的可能机制，这将有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对妊娠结局的影响，为我们进一步研究不良妊娠结局的病因学提供依据，有望作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广。课题研究的目的2EB病毒在人群中普遍易感，但在优生优育方面的研究尚不足。国外已有研究针对妊娠期EB病毒感染的研究，并对引起不良后果的机制进行了初步研究，由于人种不同，基因易感性不同，对此我国尚未进行详尽研究。国内的王玲、白玉青等分析了13例EB病毒感染孕妇的临床表现，以探讨妊娠合并ＥＢ病毒感染的特点。所述资料包含晚期妊娠。杨艳环、薛承岩等研究了腺病毒、人类微小病毒、巨细胞病毒、EB病毒等多种微生物感染与不良妊娠之间的关系，其结果显示多种微生物与不良妊娠之间关系密切，并未针对EB病毒单独进行研究。课题研究的现状3挪威公共健康研究所Eskild教授等报告，EB病毒在妊娠早期的复活会导致妊娠时间缩短和死产。宾夕法尼亚大学医学院的Gary、Ronald等研究了妊娠期妇女持续性EBV感染对胎儿的影响，结果显示妊娠期妇女EBV的复发感染并不能造成对胚胎的影响。Icart、Didier等的研究显示妊娠期EBV原发感染容易导致死胎、出生缺陷等不良后果。建议妊娠期间应进行EB病毒检测。以色列的Avqil,Ornoy等研究了妊娠期间EB病毒感染对胚胎造成影响可能机制，其结果显示原发感染的EB病毒可以通过胎盘，通过胎盘感染引起胚胎损伤。通过对EB病毒的活动性感染妊娠妇女的随访，同时与既往感染妊娠妇女（IgM阴性）的对比，发现EB病毒感染对不良妊娠的影响，为优生优育提供更多依据和保障，为我国的优生工作作出贡献。通过早中期妊娠妇女EB病毒感染及其妊娠结局的调查，来研究EB病毒感染对妊娠结局的影响。有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对优生优育的影响。对不良妊娠结局的病因学研究，治疗和预后有重要参考价值，亦可作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广应用。在进行ELISA检测的同时进行了EB病毒DNA的定量PCR检测，比较两种检测方法的利弊及应用价值，为临床优生优育检测方法的选择提供依据。课题研究的意义4准备阶段：自2010年八月开始申报课题，课题组即在EB病毒与优生优育的关系领域进行了大量的文献查阅，搜集资料，进行了预试验，进行了大量的前期准备工作，形成了课题研究的初步思路，科技局进行了查新，进行了课题立项申请。具体实施阶段：在课题立项后，在查阅了大量文献资料的基础上，确定了课题研究的具体思路、实施办法、研究对象和标本收集。以来我院门诊就诊的早中期孕妇为研究对象，收集临床资料，在检验科收集就诊者血液标本。并根据实验需要购买了相应的试剂。以检验科设备及人员为技术力量，进行相关数据的检测。2011年8月份后进行了检测对象的产后随访工作，并进行了数据、资料的整理，运用统计学软件进行了处理。课题总结阶段：根据实验的数据及资料，进行了实验总结，并进行了论文撰写，课题组人员在《山东医药》发表文章一篇，题目《不明原因早中孕期妊娠丢失妇女EBV抗体检测及分析》并进行了结题报告等的撰写。课题研究过程5Page10材料与方法3前言2摘要1课题研究创新点5课题研究技术报告2课题研究成果及讨论4摘要1目的：探讨早中期妊娠妇女EB病毒感染情况及其对妊娠结局的影响。方法：选取2009年8月至2010年10月在我院进行产前检查的孕妇520例，其中早期妊娠302例，中期妊娠218例，留取血液标本，用ELISA法进行EB病毒抗体的检测，用PCR方法进行病毒DNA含量检测。根据ELISA结果将孕妇分为三组：未感染组、原发感染组、激活感染组，随访并比较三组妊娠结局。结果：早中期妊娠EB病毒抗体阳性率为89%，原发感染者占3.6%，激活感染者占10%，提示EB病毒活动性感染主要为复发感染。在ELISA法与荧光定量PCR检测DNA的比较中发现IgM阳性者中DNA检测阳性者15例；IgM阴性者DNA检测阳性21例。随访妊娠结局发现原发感染组异常妊娠结局的发生率显著高于其他组（P0.1），自然流产的相对危险度RRMH为3.35，早产、畸形和死胎组间无差异性（P0.5）。抗体检出时间与异常妊娠发生的时间显示自然流产的发生率与早期妊娠感染EB病毒有关。结论：早中期妊娠EB病毒近期感染与异常妊娠结局有关，早期妊娠EB病毒的感染危险性较大。EB病毒DNA检测法并不能代替ELISA抗体检测法对EB病毒感染的监控。关键词：前瞻性研究妊娠EB病毒感染妊娠结局AbstractObjectiveOurobjectivewastoevaluatedthepositiverateofEBVseropositivityinearlyandmid-termpregnantwomenandeffectonpregnantwomenandfetus.MethodsELISAwasusedtodetecttheantibodyofEBVandPCRwasusedtodetectthepathogensin520casesofearlyandmid-termpregnantwomen.Allthepregnantwemenweredevidedinto3groupsByELISAoutcomes:noninfectiongroup,primaryinfectiongroupandre-activeinfectiongroup.following-upsurveyofthepregnancyoutcomesofthethreegroupswerecompared.ResultsTheresultsshowedthatthepositiveratesofEBVinfectionwaseighty-nine.Thepositiverateofprimaryinfectionwas3.6%andre-activeinfectionwas10%.IntheELISAmethodwithfluorescencequantitativePCRfordetectionofDNAcomparabletothatfoundinIgMpositiveDNAtestwaspositivein15patients;IgMnegativeDNAtestwaspositivein21cases.Follow-upofpregnancyoutcomefindingsofprimaryinfectiongroupwithabnormalpregnancyoutcomeincidencewassignificantlyhigherthanothergroups(P0.1),spontaneousabortionintherelativeriskofRRmh3.35.pretermbirth,stillbirth,deformityandnodifferencebetweenthegroups(P0.5).ConclusionThisstudyrevealedasignificantrelationbetweenSpontaneousabortionandactiveinfectionofEBVintheearlypregnancy.AndsuggeststhatEBVinfectionduringpregnancyshouldbeconsideredasariskindicatorintheanagementofpregnancy.DetectionofEBvirusDNAandisnotasubstitutefortheELISAantibodydetectionmethodforEBvirusinfectionsurveillance.Keywords:Prospectivestudy；Earlyandmid-termpregnancy；EBVinfection；Pregnancyoutcome前言2EB病毒（Epstein-Barrvirus)是1964年Epstein和Barr在研究非洲儿童的恶性淋巴瘤病因时，从瘤细胞培养中发现的一种新病毒。为双股线性DNA病毒，属γ疱疹病毒亚科，又称为人疱疹病毒4型，在人群中广泛存在，成人抗体的阳性率达90%以上。大多数人在幼儿期感染，多无明显症状。人类是其唯一天然宿主，感染的靶细胞主要是B淋巴细胞。亦可感染腮腺管、咽部、宫颈等处的上皮细胞,。在发展中国家，大部分人群在初次感染EB病毒后没有相关的临床表现，而且感染人群极其普遍，当这些携带病毒的人群与未感染者之间经传播途径(唾液传播)，如接吻、共同进餐时则造成感染的发生。EB病毒感染细胞有两种形式，即潜伏性感染和增殖性感染。增殖性感染感染病毒大量增殖，细胞破坏，出现临床症状。潜伏感染病毒不增殖，也不破坏细胞，病毒与宿主细胞处于暂时平衡状态，病毒基因组的表达受到抑制，不引起病毒血症，传统上认为不会造成宫内感染。病毒基因组的一部分可整合于宿主细胞的DNA中，导致细胞转化、永生化。在一定条件或某些诱导因子（发热、机械损伤、免疫力低下等）作用下，潜伏基因组被激活转为增殖性感染。妇女妊娠期各种不良因素都可能对胚胎和胎儿发育造成影响，尤其是妊娠期的感染性疾病以及用药都可能使胚胎发育异常，使胚胎出现损伤或死亡。已有大量研究针对感染引起的异常妊娠结局，尤其是妊娠合并病毒感染与异常妊娠结局的相关性。病毒感染与异常妊娠结局及出生缺陷密切相关已成定论。有关妊娠妇女病毒感染的研究一直被国内外学者所关注。巨细胞病毒、单纯疱疹病毒等能引起异常妊娠结局已被公认。已有文献显示EB病毒能够通过生殖道进行传染；有研究称EB病毒与不孕症有高度相关性，通过免疫抑制等作用导致精卵结合失败及阻止受精卵着床。国外已有文献报道EB病毒对妊娠的影响，挪威公共健康研究所Eskild等报告，EB病毒在妊娠早期的复活会导致妊娠时间缩短和死产，其他相关文献较少。本课题试图通过早中期妊娠妇女EB病毒感染及其妊娠结局的调查，来研究EB病毒感染对妊娠结局的影响。本研究将有助于我们进一步认识妊娠期间病毒感染对优生优育的影响。是对不良妊娠结局的病因学研究，对于治疗和预后有重要参考价值。可作为预防不良妊娠结局的一项实验室检查，在临床推广应用，为优生优育提供更多依据和保障，为我国的优生工作作出贡献。材料与方法3研究方法：本研究为前瞻性研究,结合文献调研,临床流行病学调查及数理统计等方法对淄博市保健院就诊的早中期妊娠妇女的EB病毒感染情况及妊娠结局进行研究,对比分析各组数据研究EB病毒对早中期妊娠的影响。研究对象的选择：2009年8月至2010年10月在淄博市妇幼保健院进行产前检查并计划在本院分娩的孕妇520例。其中早期妊娠302例，中期妊娠218例。年龄最小23岁，最大36岁，平均28.5岁，均为单胎妊娠，所有研究对象按要求填写流行病学调查表。研究对象确立的诊断标准:(1)早期妊娠:妊娠12周末以前。(2)中期妊娠:第13至27周末称为中期妊娠。标本收集及检测：均抽取静脉血，分离血清，ELISA法检测EB病毒IgG、IgM；同