实验九硅胶色谱法分离甘油三酯

PARTB生物分离工程实验实验九硅胶色谱法分离甘油三酯一、实验目的通过从粗油中分离甘油三酯，学习运用凝胶色谱法分离油脂中各个成分的方法。二、实验原理吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚酰胺等有吸附活性的物质。硅胶色谱频繁使用在脂质中的单一脂质，糖脂质以及磷脂质的分离。各种脂质被硅胶吸附，随着洗脱溶液的极性增加，各种极性不同的化合物被分离出来。三、实验仪器1.层析柱(1.5×75cm)2.250mL三角容量瓶3.分析天平（0.001g）4.真空浓缩装置5.搜集瓶6.氮气四、实验材料与试剂1.正己烷200mL2.乙醚15mL3.蒸馏水1.3mL4.硅胶（100目左右）25g五、实验步骤1.活化硅胶（110度，6小时干燥）25g中加入5%蒸馏水使其部分钝化并充分混匀放置30分钟。加入正己烷至刚好淹没硅胶为止并用超声波脱气3分钟。2.层析柱底部放入脱脂棉少许（防止硅胶泄漏），将硅胶放入到层析柱中正己烷溶液要没过硅胶层表面。3.准确称取食用油1±0.001g加入到硅胶层析柱中用150mL正己烷/乙醚（87∶13，v/v）洗脱，洗脱速度为2-3滴/min。洗脱时表面不能干和。4.收集的洗脱液用真空浓缩装置浓缩至无有机溶剂气味为止。5.准确称取浓缩物质量。六、回收率计算回收率=Ws/W×100%Ws：回收的甘油三酯质量（g）W：食用油质量（g）七、思考题1.实验中加水的目的是什么？2.怎样验证洗脱液中收集的甘油三酯的纯度。