临床分子生物学技术绪论

1医学检验系李子博临床分子生物学检验技术23绪论4第一节临床分子生物学检验技术的发展5一、什么是临床分子生物学技术临床分子生物学=分子生物学+临床医学检验6什么是分子生物学？分子生物学是以核酸和蛋白质等生物大分子的结构、功能及其在信号传递中的作用为研究对象，在分子水平研究生命现象及其规律的一门学科。CellNucleusChromosomeProteinGene(DNA)Gene(mRNA),singlestrand7“第一代诊断技术”——早期的细胞学检查“第二代诊断技术”——生化指标分析（20世纪50年代）“第三代诊断技术”——免疫学诊断（20世纪60年代）“第四代诊断技术”——临床分子生物学诊断（20世纪70年代末）临床诊断技术的发展临床分子生物学检验技术的发展8前三代技术·以疾病的表型改变为依据·非特异性、滞后·难以早期诊断分子诊断·以疾病基因及表型为探测对象·特异、敏感·早期诊断、预测9窗口期：HBV56天（缩短6-15天）HCV70天（缩短41-60天）HIV22天（缩短10-15天）101、寻找分子生物学检验标志物。2、建立实用、可靠的检测技术方法。进行方法学评价和临床意义评价3、建立分子生物学检验技术的质量控制和质量管理。临床分子生物学检验技术的主要任务111978年，KanYuet-Wai首次应用液相DNA分子杂交技术成功的进行镰状细胞贫血的产前基因诊断，标志着检验诊断进入基因诊断时代。二、临床分子生物学检验技术的发展第一阶段：以DNA分子杂交技术为基础的诊断方法。-开展遗传病的基因诊断12简悦威（美国科学院院士）：1936年生于香港，1958年毕业于香港大学医学院，并于1980年取得香港大学理学博士学位。他于1972年前往加州大学旧金山分校工作，現为该校罗氏达蒙教授。KanYuet-WaiYuetWaiKanandAndreeM.Dozy.PolymorphismofDNASequenceAdjacenttoHumanß-globinStructuralGene:RelationshiptoSickleMutation.Proc.Natl.Acad.Sci.USA1978,75：5631-5635.13第三阶段：以生物芯片技术为代表的高通量密集型检测技术。-开展多基因多因素疾病的基因诊断第二阶段：以PCR技术为基础的诊断方法。-开展获得性基因病（病原微生物）的基因诊断第四阶段：以DNA测序技术和生物质谱技术为代表的检测技术。14第二节临床分子生物学检验技术应用15基因组DNA是目前最常用的分子靶标DHPLC技术16一、病原生物基因组1.菌种鉴定：测序和探针杂交鉴定结核杆菌。2.确定病毒感染和病毒载量：3.病毒分析：4.细菌耐药性检测和分子流行病学调查：二、基因变异1.致病基因的分子缺陷：单基因致病基因检测2.线粒体基因突变：3.肿瘤相关基因：4.DNA重排形成融合基因：17三、基因多态性1.基因定位和遗传病相关性分析2.药物代谢酶与血药浓度3.疾病诊断和遗传咨询4.多基因病的研究5.器官移植配型和个体识别四、循环游离核酸肿瘤、产前诊断18第三节临床分子生物学检验发展与应用19感染性疾病的分子诊断：病原微生物（病毒、病原菌、衣原体、螺旋体等）遗传性疾病的分子诊断：血友病、血红蛋白病、产前婴儿检查肿瘤的分子诊断：个体化医学：1、临床应用80年代以来，基因检测在许多国家已成为常规检验项目，主要用于感染性和遗传性疾病等的诊断。20分子诊断技术在我国•针对感染性疾病的病原体的分子诊断，有严格的管理-项目报批：卫生部批准-实验室：通过验收，定期校验仪器与器材-试剂：国家药监局批准-工作人员：经过培训，持证上岗-质量控制：室内质量控制，室间质量评价•针对遗传性疾病的分子诊断？！•针对多基因（多因素）疾病的分子诊断？！212、存在的问题①假阳性和假阴性问题②重复性问题③检测结果可比性差，难于质控，使分子诊断的标准化和监管体系问题已迫在眉睫④仪器设备要求苛刻、操作复杂、费用高22分子诊断广泛应用于临床的前提——分子诊断技术方法的标准化•建立分子诊断的标准化操作程序•建立分子诊断的标准化实验室•测定方法的标准化•建立分子诊断项目室内质控和室间评价系统23①从单一病因诊断发展到综合检验诊断。3、发展趋势②从利用分子杂交、PCR等单一技术的诊断发展到有机组合多项技术的联合诊断。③方法从定性诊断发展到半定量和定量，从低通量到高通量。④范围从单基因疾病的诊断发展到多基因病的诊断，常见病、多发病以及复杂性疾病。⑥实现无创性检测⑤实现早期诊断。24谢谢各位