青菜叶中叶绿素含量的测定

青菜叶中叶绿素含量的测定食品学院S100111029王婷同组人：王莹、王芳一、实验目的1.学习并且使用分液漏斗分离水与不溶于水的有机溶剂。2.熟悉掌握用有机溶剂萃取青菜叶中叶绿素的方法。二、实验原理将青菜叶中的叶绿素萃取到丙酮中，然后将溶于丙酮的叶绿素转移到乙醚中，在指定的波长下，测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度，然后根据公式计算青菜叶中的叶绿素a、叶绿素b和总叶绿素的含量。三、实验器材1.实验仪器：天平、组织捣碎机、水、循环真空泵、抽滤瓶、滤纸、布氏漏斗、容量瓶（100ml、500ml各一个）、分液漏斗（2个）、尖嘴管、铁架台、铁圈（2个）、分光光度计。2.实验试剂：碳酸钙、丙酮（85﹪）、乙醚、无水硫酸钠。3.实验原料：青菜叶。四、实验步骤1.称取30g新鲜青菜叶置于组织捣碎机中，然后加0.05gCaCO3和85ml丙酮（85﹪），在高速组织捣碎机中，在转速20000r/min下捣碎，2min，捣碎青菜叶组织。2.抽滤所得的匀浆，用少量85﹪丙酮多次洗涤残渣，直到残渣不带绿色为止，将溶液合并后用丙酮定容至500ml。3.吸取25ml叶绿素-丙酮溶液，加入到含有25ml乙醚的分液漏斗中，然后加入50ml水，观察到所有的叶绿素都转入到上层乙醚相时，放出下层水相。4.在另一只分液漏斗中加入50ml水，插入一只末端拉成小孔的玻璃管，将叶绿素-乙醚溶液注入玻璃管，溶液通过通过玻璃环末端小孔进入水相后再上升聚集在水相表面，放出下层水相，重复上述操作步骤五次，让溶于叶绿素-乙醚溶液中的丙酮转移到水相中，将乙醚层转移至容量瓶中。5.将以上放出的下层水合并，加入25ml乙醚，同上操作，将乙醚层也转移至容量瓶中。6.用乙醚将叶绿素-乙醚溶液定容到100ml。7.用少量无水硫酸钠吸收叶绿素-乙醚溶液中的水分。8.在波长660nm和642.5nm下，分别测定叶绿素-乙醚溶液的吸光度。五、实验记录与结果叶绿素-乙醚溶液在波长660nm和642.5nm下的吸光度分别为：A660.0=1.091A642.5=0.315（1）：总叶绿素=7.12A660.0+16.8A642.5=13.0599mg；（2）叶绿素a=9.93A660.0-0.777A642.5=10.5889mg；（3）叶绿素b=17.6A642.5-2.81A660.0=2.4783mg。六、思考题1.在破碎青菜叶组织时，为什么要加入碳酸钙或碳酸钠？答：青菜叶组织在组织捣碎机中破碎时，叶绿素结构中的镁原子容易脱去，形成脱镁叶绿素，破坏叶绿素的结构，加入碳酸钙或碳酸钠能防止在捣碎的过程中叶绿素的脱镁。2.为什么叶绿素测定时应尽量可能在低温和避光的条件下进行？答：青菜叶在组织捣碎机中到随后，细胞死亡后叶绿素游离出来，游离叶绿素很不稳定，对光或热较敏感，如果高温和光都会破坏叶绿素。3.叶绿素a和叶绿素b的结构有何不同？答：叶绿素b在位置3-为甲酰基，而叶绿素a在位置3-为甲基，其余的都相同。4.叶绿素在酶、热、酸的作用下会发生什么变化。答：酶能催化叶绿素脱植醇，生成脱植基叶绿素；叶绿素在热处理的过程中形成两类衍生物，即四吡咯环中心有无镁原子存在，含镁的叶绿素衍生物显绿色，不含镁的叶绿素衍生物显橄榄褐色；在酸性条件下叶绿素分子的中心镁原子被氢取代，生成暗橄榄褐色的脱镁叶绿素。