香菇多糖的提取及分离方案

香菇中多糖的提取分离与检测方案设计：根据所查文献，影响因素：料液比提取时间提取次数提取温度一．香菇多糖的提取称取干香菇粉2克5份→于1-5号锥形瓶中→加入（20,30,40,50,60）ml热水70℃→超声波发生器（水预热在60℃左右，功率80W左右）→提取40min（中间停顿2次，每15min一次停顿，每次5min）→抽滤，用量筒量取所得滤液体积→滤渣→向滤渣中加入与滤液体积相等的热水，热水70℃→提取30min（中间停顿2次，每10min一次停顿，每次5min）→抽滤→合并滤液→量体积标识贮藏备用二．香菇多糖的测定1.首先去掉香菇多糖溶液中的的蛋白质：采用氯化钙法：量取所得的1-5号储备液各20ml，将溶液PH调节至8---9（NaOH溶液），加热到85℃，加入氯化钙使浓度达5%(w/v)，搅拌，冷却至室温，过滤，得脱蛋白多糖液。2.制作标准曲线：准确称取葡萄糖20mg置于500ml容量瓶定容（40ug/L），分别准确量取0.2,0.6,1.0,1.4,1.8于比色管，补水至2ml（用移液管量取1.8,1.4,1.0,0.6，0.2蒸馏水），然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测吸光度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖浓度，纵坐标为吸光度，得标准曲线。3.样品的测定：取去完蛋白的样液2ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测吸光度。将吸光度控制在0.2-0.8三．仪器与试剂1.仪器：恒温水槽，超声波发生器，紫外分光光度计，分析天平，锥形瓶（100ml）5个，烧杯（100ml）5个，电热套，温度计，抽滤装置，玻璃棒，搅拌子，勺子，移液管（2ml，5ml），比色管（10ml）10个，容量瓶（50ml）6个。2.材料：干香菇粉（已脱脂、脱单糖和低聚糖）（60g），氯化钙（60g），葡萄糖标准溶液（1mg/ml）（30ml），6%苯酚（30ml），浓硫酸（100ml），NaOH溶液，高纯水。注：1.加入氯化钙使浓度达5%(w/v)：液体总体积*5%2.溶液遇水会变红色，所以应润洗几次。本实验方案由第三小组全体组员共同协作完成。