IC50曲线测试实验流程

IC50曲线的测定IC50即半抑制率，标准曲线是一个S型曲线。IC50为50%抑制浓度即细胞存活量为对照样本一半时所对应的浓度，半数抑制越低，说明药物对细胞的毒性越高。实验操作步骤如下：1.细胞准备：A．细胞状态检测：从培养箱中取出细胞，显微镜下观察。状态描述：观察结果，细胞汇合度：B．细胞处理：将细胞培养基吸出后，加入2mlPBS缓冲液洗一次，加入1ml0.25%Trypsin-EDTA，放入培养箱中静置数分钟，直至细胞完全离壁悬浮，加入5ml含10%FBS的培养基(无抗生素)终止酶活，混匀后液体转移至15ml离心管，1000rpm离心3min，弃去液体。C．细胞计数：于15ml离心管中加入1ml含10%FBS的培养基(无抗生素)，充分混匀。取40ul计数，公式如下：细胞浓度（数/ml）=（4大方格细胞数之和/4）×104×稀释倍数最终得到的细胞密度填入下表，根据最终需要细胞浓度及体积进行稀释。细胞数/孔起始浓度(/ml)所需体积(ml)需20%FBSDMEM(ml)总体积终浓度(/ml)细胞株名D．稀释细胞2.将稀释好的细胞用排枪加至96/384孔板：置于培养箱37℃5%CO2条件下培养24小时，待细胞贴壁后加药。3.药物稀释：将药物进行3倍倍比稀释。4.将稀释好的药物加入前一天铺好细胞的细胞板上，37℃5%CO2培养箱培养72h。5.荧光素酶检测：将Celltiter-Glo与ddH20以1:1混合，加入细胞板（96板：20ul/well;384板：10ul/well），静置10min后，TECANinfiniteF200酶标仪读值。6.分析数据，绘制IC50曲线，寻找IC30,IC50等值。7.验证IC50:根据IC50曲线找出IC50理论值，分别取1/2倍、1倍及2倍的理论值进行药物浓度验证。附录：MaterialsforExperimentNameCorporation96-wellplateCorning384-wellplateGreinerCentrifugeTube(15ml)BDFalconPipets(10ml)GreinerT-25FlaskCorningTips,EPTubeAxygen,MatrixReagentsforExperimentNameCorporationFBSExcellDPBSHyclone0.25%Trypsin-EDTAGIBCOMediumHycloneCell-TiterGlo™PromegaInstrumentsforExperimentNameModelCorporationInvertedMicroscopeTS100NikonCO2IncubatorBB16UVHeraeusBechtopZHJH-1109ZHCHENGCentrifuge5200KUBOTAMicroplateReaderinfiniteF200TECANDispenserμFillBio-Tek