免疫荧光-石蜡切片

石蜡切片免疫荧光操作规程试剂1)二甲苯2)PBS缓冲液3)0.01mol/L柠檬酸盐缓冲液（CB，pH6.0，1000ml）：柠檬酸三钠3g，柠檬酸0.4g。4)goat血清5)一抗稀释液：3%BSAinTBS，pH7.4操作流程1.脱蜡和水化脱蜡前，应将组织切片在室温中放置60min或60℃恒温箱中烘烤20min。1）组织芯片置于二甲苯中浸泡10min，更换二甲苯后再浸泡10min；2）无水乙醇中浸泡5min；3）95%乙醇中浸泡5min；4）70%乙醇中浸泡5min；2.PBS洗两次各5min。3.抗原修复，用于福尔马林固定的石蜡包埋组织芯片。煮沸热修复电炉或者水浴锅加热0.01M枸橼酸钠缓冲溶液（pH6.0）至95℃左右，放入组织芯片加热10~15min，必须等缓冲液冷却后，方能将切片取出。4.PBS洗5min。5.滴加5%正常山羊血清，室温封闭30min，甩去多余液体。6.滴加一抗，室温1小时或者4℃过夜或者371℃小时（4℃过夜后在37℃复温45min）。7.PBS洗3次每次5min。8.滴加荧光标记的二抗，室温避光孵育1h。（注意抗体针对的种属，使用浓度：Alexa488、Alexa555为1：1000，Cy3、FITC为1：200，用锡箔纸包住培养板放在抽屉中避光。）9.PBS洗3次每次5min。10.Hoechst染色：把1000×Hoechst用PBS稀释，50ul/片，染色10min。11.PBS洗3次每次2min。12.封片：MountingMedium封片，等MountingMedium凝固后再拍照。