血清胆固醇含量的测定实验报告

实验二血清胆固醇含量的测定的实验报告实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H2O2与4-氨基安替比林和DHBS反应生成微红色的醌亚胺。醌亚胺在520nm有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。胆固醇酯+H2O胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸胆固醇+O2胆固醇氧化酶△4胆甾烯酮+H2O2H2O2+4-氨基安替比林+DHBS过氧化物酶醌亚胺+H2O实验步骤：1、取2支试管分别加入0.2mL的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H”和“SH”试管。往每支试管加入0.2mL的沉淀剂，在室温下静置15min，用2000rad/min的离心机分离10min。2、准备5支试管分别标注为“T”（总胆固醇）、“H”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST”（标准总胆固醇）、“SH”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B”（空白实验）。按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL）试管TSTHSHB上层清液——0.20.2—血清0.02————标准胆固醇—0.1———蒸馏水0.180．1——0.2酶试剂0.20.20.20.20.23、准备好以上试管后，充分混合并在37。的温度下放置20min，用波长520nm的分光光度计测量各支试管的吸光度值。实验结果：试管TSTHSH吸光度值0.1670.2520.6050.430计算公式：总胆固醇=STT吸光度值吸光度值×02.01.0×50高密度脂蛋白胆固醇=SHH吸光度值吸光度值×50代入数据得：总胆固醇=252.0167.0×02.01.0×50=165.7（mg/dL）高密度脂蛋白胆固醇=430.0605.0×50=70.3（mg/dL）