戴安U3000-HPLC操作流程

戴安Ultimate3000系列HPLC标准操作规程一、准备工作：1、面板操作指南：1.1、如何进入菜单：使用仪器中配置的感觉笔在仪器前面板显示屏下的白色点位点约0.5cm处悬约1秒或轻触，四个定位点的上方显示相应的菜单功能，按需要进行相应的选择即可，常规参数的选择（或进入）使用“SELECT”，返回上一层按“BACK”，“＾、＞、＜、ˇ”分别为下移动选择键。一般直接可显示出常用的功能菜单，对于未显示的，则需要先选择“MENU”进入主菜单后再进一步进行选择。1.2、各设备的主要功能：1.2.1、泵：A、泵开关：使用感应笔轻触出现常用功能菜单后，直接选择“FLOWON”功能，即开启泵马达；在启动后，再次调出菜单后显示的“FLOWOFF”为关闭泵选项。B、溶剂选择：使用感应笔调出常用功能菜单后，选择“MENU”，进入后再选择“CONTROL”功能，进入子菜单后，移动选项到相应的溶剂“A%、B%、C%、D%”进入后再调节相应的值即可。在当前设置流动相比例不足100%，系统会自动与前一项进行分配，总和为100%。C、流速的调节：使用感应笔调出常用功能菜单后，直接选择“SETFLOW”然后通过移动选项进行流速的设置。注，数值不能自动进位，故设置时应确认显示的值为昀终的值。D、PURGE：使用感应笔调出常用功能菜单后，直接选择“PURGE”即执行，再次选择时即为关闭，当未做选择时系统会在执行5分钟后自动停止。1.2.2、紫外检测器：A、灯开关：在使用感应笔调出常用功能菜单后，选择“MENU”进入子菜单后，再选择“GENERALSETTING”，进入后，再进入下一级子菜单，通过感应笔移动选择“UVLAMP”，进入后再选择“TOGGLE”则打开氘灯；再选择“VisLAMP”时，相应的操作打开钨灯。B、波长选择：在调出常用功能菜单后，选择“WAVELENGHT”选择，再选择“WAVELENGHT1”进入，通过感应笔及光标移动修改检测波长。C、自动调零：在调出常用功能菜单后，选择“AUTOZERO”即执行自动调零。D、启动/停止采集：在调出常用功能菜单后，选择“RUN/STOP”启动或停止数据信号的采集（仅用于国产工作站）。1.2.3、柱温箱：A、温度控制：在调出常用功能菜单后，选择“TEMP.”即进入温度设置子菜单，其中可通过“ON/OFF”控制柱温箱的启动和停止，同时通过移动选择进行温度的值设置。B、阀切换控制：在调出常用功能菜单后，选择“VAVLE”进入阀控制子菜单，设置流路连接及阀位置的切换。1.2.4、自动进样器：A、进样针清洗：在调出常用功能菜单后，选择“WASH”即执行针的清洗。B、进样针排气泡：在调出常用功能菜单后，选择“PRIME”即自动执行针的排气泡。2、各部件的准备操作：2.1、泵：A、流动相：①、流动相是否充足：(主要是有机相或者是单一通道的缓冲盐体系)，一般应在所预计的消耗量之上加150ml，以保证仪器运行过程中不会出现流动相短缺；②、流动相是否新鲜：(主要是高纯水及缓冲盐流动相)，一般情况下一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续的24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。特殊情况至少应重新过滤并脱气。B、柱塞清洗液：清洗液是否新鲜及匹配：对于常规的流动相(一般指不含盐或离子对等添加剂的流动相)，配制50%甲醇作为清洗液，在连续不超过4天工作的情况下可以两周一换；若超过4天，则一周一换。对于含盐或其它添加剂的流动相，配制5%甲醇(或高纯水)作为清洗液，在连续使用时，应每日更换；中间如有较长时间不用，则应改为50%甲醇作为保存液，并在下次使用时，根据所使用的流动相配制适宜的清洗液。*：若泵超过半个月以上不用，应将柱塞清洗溶剂管(蠕动泵下压部分)抽出，再下次使用时放回原位置，以保证清洗管道的正常使用。C、溶剂管道：①、管道中的气泡：在泵长期不用时，由于脱气机停止工作，流动相会重新溶剂环境中的气体，而产生的气泡会对柱、泵及检测器产生不同程度的影响，因此要求在停泵后重新使用时应先观察A、B、C、D四溶剂管道进比例阀部分是否存在气泡，如无，在泵启动后等待5分钟后(脱气机自动脱气)，再启动泵流速；若有，则选择相应的通道(按泵面板上的相应字母并保持约3秒钟)，打开PURGE阀后，用感应笔按面板上白点，选择“PURGE”进行流动相自动脱气(可选择再次按键关闭，或等待5分钟后仪器自动停止)，完成后先关闭PURGE阀，再启动泵流速。②、流动相快速替换：由于流动相通道有限，当在同一个通道中更换流动相时，应首先打开PURGE阀，使用感应笔轻触面板下的白点，在出现的菜单中选择“PURGE”进行快速溶剂替换(流动为6ml/min，持续5分钟)，完成后再关闭PURGE阀，按要求进行系统的过渡或平衡。2.2、自动进样器：A、进样针排气：当自动进样器非连续使用时(间隔一天或以上)应在仪器启动前(尤其是泵)先进行进样针排气。打开Chromeleon主程序后，点出Files，选择Browser，打开后，点击DionexTemp.，选择Panle中的Dionex_LC，在右边的窗口中双击WPS3000.pan文件打开后，点菜单Control拉至昀低下点击，在Connect变绿后，选手Wash,settings更改WashVolue为250、Dispense为50后，在R、B盘中放置甲醇，G盘中放置异丙醇，按Prime进行针排气，完成后即可。(对于面板中有设置的用户直接在自动进样器设置窗口中按针排气(SyringePrime)即可。B、进样针清洗：当连续使用中需要更换样品类型或流动相粘度较大时，应在每次进样完成后进行针清洗。在Program编辑查看时，在结束时间命令前加WASH命令；如选择单瓶进样，则在进样完成后，按自动进样器选项中的Wash键进行清洗。2.3、柱温箱：柱温箱应在打开电源且柱连接好后，及时设置为方法要求的温度。2.4、检测器：为减少灯能量浪费，检测器应在样品准备完成后或基本完成时，且仪器系统按要求流动相及流速平衡至少30分钟以上后打开，在完成自检20分钟以后方可开始样品的分析。二、仪器平衡：1、泵：应以完成准备工作后，以0.2ml/min的步进速度(每个平衡点保持0.5分钟以上时间)进行流速的增加，在达到0.6ml/min以上的流速时进行等度流动相比例或梯度流动相初始平衡比例调整，待压力稳定后平衡30分钟以上时间方可进样样品的分析。当比例调整幅度大于40%的变化时，应进行过渡(选择两步或两步以上调整后达到需要的比例)。2、检测器：常规情况，设定方法要求的波长并调整检测器显示范围为-5～100mV，查看基线20分钟以上，基线基本平直即可开始样品分析。3、柱温箱：在方法要求使用柱温箱时，应在仪器电源打开后，及时将柱温箱温度设置到预定值并启动。4、进样器：手动进样在系统平衡过程中应扳至Inject位置，以保证系统充分平衡。三、样品方法的编辑与运行：1、新方法编辑及运行：2、己有方法的运行：四、数据分析方法：1、数据的选择：在资源管理中(点击Browser图标进入，如下图；或在仪器控制面板中选择Files----Browser进入)找到数据保存（所要查看数据的Sequence）的位置，双击打开第一个对照品数据，即进入数据查看窗口，点击参比峰（一般为比主成分峰小但大于其它杂质峰做为参比峰，或主成分峰）查看并记录“Area”值，做为昀小峰面积的设定参考。2、数据分析(流程图)：五、数据报告的编辑与数据备份：1、选择报告模板：在数据查看窗口中，打开“View”菜单，选择“PrinterLayout”即进入报告界面，根据结果需要选择合适的报告模板，如下：“Intergration”单一样品的标准报告“Calibration(Curr.P)”单标准校正曲线报告“PeakAnalysis”峰分析报告“Calibration(Batch)”混标的校正曲线报告“Summary”数据统计分析报告2、报告模板的编辑：在报告界面下，打开“Edit”菜单，选择“Layout”打开报告布局编辑功能；A、标题及方法信息：双击报告标题或方法信息部分对内容进行更改或替换（双击后会出现可更换内容的对话框，根据对话框中信息选择需要替换或更改的信息）。B、报告结果内容：双击结果部分标题对相关信息进行更改或替换；如果需要增加则在表下部的空白区右键，根据需要选择“Insert”插入表格或信息。C、谱图：双击谱图，在弹出的窗口中对相关信息及内容项进行修改和编辑；“Overlay为谱图的叠加，当选择后点Add进行谱图的增加，选择过程注意检测通道的选择”；“Comprasion为谱图的对比效果，Offset部分为谱图间距。”3、数据的备份与输出：A、数据的备份：在资源管理器中选择需要备份的文件源（根目录、文件夹、Sequence、或相应的样品数据），打开“File”菜单，选择“Export/Backup中的Backup”，在弹出窗口中选择数据保存的目标位置，点“Start”开始数据备份，昀后点“Finish”完成。B、数据的输出：变色龙软件提供数据文件以“PDF、ASCII、EXECL、TXT、CMB”等文件形式输出，以满足不同的需要。选择相就的数据文件（Sequence），打开“File”菜单，选择“BatchReport”项，在弹出窗口中选择报告方法，去除“Printout”标识，点击“Export”，在弹出窗口中选择文件所需的文件类型及所需输出的报告类型后下一步，确定输出文件保存位置后“OK”，完成。C、数据的恢复：在备份文件的文件夹中双击备份文件在弹出窗口中选择恢复文件的目录后按“Start”进行恢复。或在主程序中打开“File”菜单，选择“Restore/Import中的Restore”，在弹出窗口中同法操作即可。六、关机及注意事项：1、关机：样品分析完成后，应首先关闭检测器的灯，以减少灯能量的损失；其次，根据流动相的组成选择纯甲醇或在5%甲醇水溶液除盐后以纯甲醇进行清洗（连续使用情况下每日至少清洗30分钟以上时间，非连续使用应增长清洗时间，具体以相关的样品为参考；含盐流动相至少以5%甲醇水溶液清洗45分钟以上后，逐步改换到纯甲醇清洗）；再者，选择自动进样器清洗或以先纯水后甲醇的方式用专用接头对手动进样阀在Load位进行清洗，完成后扳至Inject位用清洗液充填管道；上述工作完成后再将柱温箱关闭或降至室温。2、注意事项：A、新柱子活化时昀好断开检测器管道直接排除清洗液；B、一次开灯相当于30小时灯寿命，因此建议尽可能将样品集中分析；遇有样品分散的情况，且间隔时间不超过8小时，建议不要关灯；C、仪器运行过程中尽是避免再仪器上使用USB设备；D、对于电子追踪记录中的错误信息一定要及时分析原因并排除；E、软件运行过程中不可将加密狗拔下；F、注意计算机的防毒；G、单独Sequence中的样品尽量不超过200，过多会相起系统内存紧张；H、对样品的仪器方法（Program）更新后，应及时对“Program”文件夹中储存的方法进行同步更新；I、不要对同一样品打开多个窗口，否则会引起数据读写错误；J、样品数据应定期进行备份，以减少系统问题造成的数据安全影响。