水质致突变性的鉴别蚕豆根尖微核试验法HJ10162019

中华人民共和国国家环境保护标准HJ1016-2019水质致突变性的鉴别蚕豆根尖微核试验法Waterquality—Identificationofmutagenicity—Viciafabaroot-tipmicronucleustest（发布稿）本电子版为发布稿。请以中国环境出版集团出版的正式标准文本为准。2019-04-13发布2019-09-01实施生态环境部发布i目次前言...............................................................................................................................................ii1适用范围.......................................................................................................................................12规范性引用文件...........................................................................................................................13术语和定义...................................................................................................................................14方法原理.......................................................................................................................................15试剂和材料...................................................................................................................................26仪器和设备...................................................................................................................................37受试生物.......................................................................................................................................38受试生物准备...............................................................................................................................39样品...............................................................................................................................................410分析步骤.....................................................................................................................................411结果计算与表示.........................................................................................................................612精密度.........................................................................................................................................713质量保证和质量控制.................................................................................................................714废物处理.....................................................................................................................................8附录A（资料性附录）有丝分裂各期细胞、根尖细胞微核计数区及微核判定参考图片....9附录B（资料性附录）松滋青皮豆特性及保种.....................................................................11附录C（资料性附录）根尖处理皿参考图片.........................................................................12附录D（规范性附录）试样急性毒性预试验.........................................................................13附录E（资料性附录）Kruskal-Wallis检验方法....................................................................14附录F（资料性附录）原始记录表和试验报告表..................................................................16ii前言为贯彻《中华人民共和国环境保护法》和《中华人民共和国水污染防治法》，保护生态环境，保障人体健康，规范水样致突变性的鉴别方法，制定本标准。本标准规定了鉴别地表水、地下水、生活污水和工业废水中致突变性的蚕豆根尖微核试验法。本标准的附录D为规范性附录，附录A～附录C、附录E、附录F为资料性附录。本标准为首次发布。本标准由生态环境部生态环境监测司、法规与标准司组织制订。本标准起草单位：江苏省常州环境监测中心（江苏省环境保护水环境生物监测重点实验室）、中国环境科学研究院环境基准与风险评估国家重点实验室。本标准验证单位：上海市环境监测中心、浙江省环境监测中心、江苏省环境监测中心、江苏省南京环境监测中心、江苏省苏州环境监测中心和江苏省泰州环境监测中心。本标准生态环境部2019年4月13日批准。本标准自2019年9月1日起实施。本标准由生态环境部解释。1水质致突变性的鉴别蚕豆根尖微核试验法1适用范围本标准规定了鉴别水样致突变性的蚕豆根尖微核试验法。本标准适用于地表水、地下水、生活污水和工业废水的致突变性鉴别。2规范性引用文件本标准引用了下列文件或其中的条款。凡是不注日期的引用文件，其有效版本适用于本标准。GB/T6920水质pH值的测定玻璃电极法HJ/T91地表水和污水监测技术规范HJ/T164地下水环境监测技术规范3术语和定义下列术语和定义适用于本标准。3.1微核micronuclei真核细胞中，游离于主核之外的小核即为微核，其物质构成和特性与主核一致，大小一般为主核1/3以下，是染色体畸变的一种表现形式。3.2微核率micronucleusrate某一试样检测若干根尖，每个根尖观察1000个有丝分裂间期细胞，所计微核数占观察细胞数的比率，以‰计。3.3有丝分裂指数mitoticindex同一根尖观察1000个细胞，处于有丝分裂期（包含前期、中期、后期、末期，见附录A图A.1）的细胞数占总细胞数的比率，以‰计。3.4参比物质referencesubstance验证测试方法敏感性和有效性的已知阳性对照物质，用于确定受试生物特性和试验条件未发生明显改变，保证试验可靠有效。4方法原理将经过浸种催根后长出的蚕豆初生根在试样中暴露一定时间，经恢复培养、固定、染色2后，制片镜检，统计蚕豆根尖初生分生组织区（参见附录A图A.2）细胞微核率。致突变物可作用于细胞核物质，导致有丝分裂期染色体断裂形成断片、整条染色体脱离纺锤丝、纺锤丝牵引染色体移动的功能受损。这些移动受到影响的染色体断片或整条染色体不能随正常染色体移向细胞两极形成子细胞核，而滞留细胞质中形成子细胞微核并引起其数量增加。比较试样与空白试样蚕豆根尖细胞微核率是否显著增加，可判定样品是否存在致突变性。5试剂和材料除非另有说明，分析时均使用符合国家标准的分析纯试剂，实验用水为新制备的去离子水或蒸馏水，电导率（25℃）≤0.50mS/m、pH（25℃）在5.5～7.5之间。5.1调温水：用于浸种（8.2）、催根（8.3）、根尖处理（10.1）的实验用水，需提前放置于恒温培养箱（6.3）中，25℃±1℃平衡至恒温备用。5.2盐酸：ρ（HCl）=1.18g/ml。5.3氢氧化钠（NaOH）。5.4乙酸：ρ（C2H4O2）=1.05g/ml。5.5无水乙醇：ρ（C2H6O）=0.79g/ml。5.6碱性品红（C20H20ClN3）。5.7偏重亚硫酸钠（Na2S2O5）或偏重亚硫酸钾（K2S2O5）。5.8活性炭粉。5.9环磷酰胺（C7H15Cl2N2O2P·H2O），生物试剂（BR），纯度≥99.0%，本标准参比物质。5.10盐酸溶液：c（HCl）=1.0mol/L。量取8.3ml盐酸（5.2），缓慢加入少量水中，搅拌混匀后用水定容至100ml。5.11氢氧化钠溶液：c（NaOH）=1.0mol/L。称取4.0g氢氧化钠（5.3），加入少量水中，搅拌溶解后用水定容至100ml。5.12卡诺氏液（乙酸-无水乙醇混合液）：1+3。将乙酸（5.4）和无水乙醇（5.5）按1:3的体积比混合，临用现配。5.13乙醇溶液：φ（C2H6O）=70%。量取无水乙醇（5.5）70ml，用水定容至100ml。5.14席夫（Schiff）试剂：可使用市售的成品试剂。也可按照以下方式配置：在100ml烧瓶中加入5.0ml无水乙醇（5.5）和0.5g碱性品红（5.6），振荡溶解10min。将2.5g偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾（5.7）溶解于93ml水后，加入上述烧瓶中，混匀，继续加入1.5ml盐酸（5.2），避光振荡至完全溶解，此时溶液呈浅黄色。再加入0.2g活性炭粉（5.8），振荡3min，过滤溶液使之无色，保存备用。此溶液在4℃以下冷藏避光可保存6个月，如溶液呈粉红色或出现沉淀，则不可再用。5.15SO2漂洗液：w（Na2S2O5或K2S2O5）=0.5%。称取10.0g偏重亚硫酸钠或偏重亚硫酸钾（5.7）溶于90ml水中，得到w（Na2S2O5或K2S2O5）=10%的溶液。分别吸取该溶液和盐酸溶液（5.10）各5.0ml于100ml容量瓶中，用水定容至刻度，临用现配。35.16乙酸分散液：φ（C2H4O2）=45%。量取45ml乙酸（5.4），用水定容至100ml，临用现配。5.17环磷酰胺参比溶液：ρ（C7H15Cl2N2O2P）=20.0mg/L。称取0.1