CN2011104168934低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌及分离培养方法公开号102

(10)申请公布号CN102424805A(43)申请公布日2012.04.25CN102424805A*CN102424805A*(21)申请号201110416893.4(22)申请日2011.12.14CGMCCNo.52772011.09.22C12N1/20(2006.01)C12N1/02(2006.01)C02F3/34(2006.01)C02F3/02(2006.01)C12R1/01(2006.01)C02F101/16(2006.01)(71)申请人建设部水处理新技术产业化基地(天津港保税区水处理新技术产业化基地)地址300191天津市南开区水上公园西路44号402室(72)发明人田青姜秀光郝赟陈爱因(74)专利代理机构天津市北洋有限责任专利代理事务所12201代理人陆艺(54)发明名称低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌及分离培养方法(57)摘要本发明公开了一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌及分离培养方法，低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp)硝深-1CGMCCNo.5277，其具有在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的能力。实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp)硝深-1CGMCCNo.5277，在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对污水中亚硝酸盐氮去除有明显的强化作用，接种本发明的红球菌与未接种菌的污水进行比较，亚硝酸盐氮去除率提高了约为10％。(83)生物保藏信息(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页说明书4页附图1页CN102424812A1/1页21.一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)硝深-1CGMCCNo.5277，其具有在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的能力。2.权利要求1的一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)硝深-1CGMCCNo.5277在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的用途。3.根据权利要求2所述的用途，其特征是所述低温为8～12℃。4.低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，其特征是包括如下步骤：(1)将10～20mL污水处理厂曝气池污泥接种至装有250mL硝酸细菌培养液的锥形瓶中，所述硝酸细菌培养液中的亚硝酸钠中氮浓度为50mg/L，在8～12℃，摇床转速为120～140rpm摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到80～90％时，静置，去除上清液，将锥形瓶底部的污泥接种至装有250mL第二种硝酸细菌培养液中，所述第二种硝酸细菌培养液中的亚硝酸盐氮浓度为150mg/L，在8～12℃，在转速为120～140rpm的摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到80～90％时，即得到含有耐低温细菌的硝酸细菌培养液；(2)取10mL步骤(1)获得的培养液，加入己装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置20～40min，取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10-8为止；(3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于硝酸细菌固体培养基，每个稀释度做3个平行样，编号；10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周；(4)从步骤(3)中的硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为硝深-1，经鉴定为低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)。5.根据权利要求4所述的一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，其特征是所述硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.25g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。6.根据权利要求4所述的一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，其特征是所述第二种硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.74g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。7.根据权利要求4所述的一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，其特征是所述硝酸细菌固体培养基由下述组分组成：NaNO20.5g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、琼脂20g、加蒸馏水至1000mL。权利要求书CN102424805ACN102424812A1/4页3低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌及分离培养方法技术领域[0001]本发明涉及一株红球菌及用途及分离培养方法。背景技术[0002]低温对生物处理能力产生重大影响的原因是由于温度的降低影响了微生物的生长及代谢并使污水处理系统中微生物群系发生了改变。在温度下降过程中，中温菌的代谢活性逐渐下降，到一定温度时便失去活性，而适于低温环境的低温微生物的数量由于自身的生理特性及各种生态因子的抑制作用，在数量上无法达到优势菌群的地位，从而导致污水处理厂冬季出水水质下降。因此亟需一种能在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的菌株。发明内容[0003]本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌。[0004]本发明的第二个目的是提供一种去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的用途。[0005]本发明的第三个目的是提供一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法。[0006]本发明的技术方案概述如下：[0007]一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)硝深-1CGMCCNo.5277，其具有在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的能力。[0008]一种低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)硝深-1CGMCCNo.5277在低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的用途。所述低温优选8～12℃。[0009]低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，包括如下步骤：[0010](1)将10～20mL污水处理厂曝气池污泥接种至装有250mL硝酸细菌培养液的锥形瓶中，所述硝酸细菌培养液中的亚硝酸钠中氮浓度为50mg/L，在8～12℃，摇床转速为120～140rpm摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到80～90％时，静置，去除上清液，将锥形瓶底部的污泥接种至装有250mL第二种硝酸细菌培养液中，所述第二种硝酸细菌培养液中的亚硝酸盐氮浓度为150mg/L，在8～12℃，在转速为120～140rpm的摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到80～90％时，即得到含有耐低温细菌的硝酸细菌培养液；[0011](2)取10mL步骤(1)获得的培养液，加入己装有90mL灭菌蒸馏水和20～30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡10～30min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置20～40min，取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10-8为止；[0012](3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于硝酸细菌固体培养基，每说明书CN102424805ACN102424812A2/4页4个稀释度做3个平行样，编号；10℃在有氧的条件下保湿培养2～3周；[0013](4)从步骤(3)中的硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3-4次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为硝深-1，经鉴定为低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)。[0014]所述硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.25g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。[0015]所述第二种硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.74g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。[0016]所述硝酸细菌固体培养基由下述组分组成：NaNO20.5g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、琼脂20g、加蒸馏水至1000mL。[0017]实验结果表明：尽管受到低温环境的明显抑制，投加本发明的一种去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)硝深-1CGMCCNo.5277，在低温下，特别是在8-12℃的条件下，对污水中亚硝酸盐氮去除有明显的强化作用，接种本发明的红球菌与未接种菌的污水进行比较，亚硝酸盐氮去除率提高了约为10％。附图说明[0018]图1为低温好氧条件下去除污水中亚硝酸盐氮的一种去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的驯化分离培养流程图。[0019]图2为硝深-1对亚硝酸盐氮去除试验。具体实施方式[0020]下面通过具体实施例对本发明作进一步的说明。[0021]实施例1[0022]低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌的分离培养方法，包括如下步骤：[0023](1)将15mL天津纪庄子污水处理厂曝气池的污泥接种至装有250mL硝酸细菌培养液的锥形瓶中，所述硝酸细菌培养液中的亚硝酸钠中氮浓度为50mg/L，在10℃，摇床转速为130rpm摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到90％时，静置，去除上清液，将锥形瓶底部的污泥接种至装有250mL第二种硝酸细菌培养液中，所述第二种硝酸细菌培养液中的亚硝酸盐氮浓度为150mg/L，在10℃，在转速为130rpm的摇床中驯化，待亚硝酸盐氮降解率达到90％时，即得到含有耐低温细菌的硝酸细菌培养液；[0024](2)取10mL步骤(1)获得的培养液，加入己装有90mL灭菌蒸馏水和30粒灭菌玻璃珠的250mL锥形瓶中，振荡20min，使细菌细胞充分释放到上清液中；静置30min，取1mL上清液加入装有9mL无菌蒸馏水的试管中，得到10-2的菌悬液，按上述方法依次做系列稀释，一直做到10-8为止；[0025](3)选取梯度为10-5～10-8的菌悬液，分别取1mL接种于硝酸细菌固体培养基，每个稀释度做3个平行样，编号；10℃在有氧的条件下保湿培养3周；说明书CN102424805ACN102424812A3/4页5[0026](4)从步骤(3)中的硝酸细菌固体培养基平板中挑选菌落大，形态不同的单菌落，在硝酸细菌固体培养基平板中再次划线分离，重复平板划线分离3次，使平板上的菌落在显微镜中的形态相同，单一，大小相似即为单菌落，命名为硝深-1，经鉴定为低温条件下去除污水中亚硝酸盐氮的红球菌(Rhodococcussp.)。[0027]各实施例中所采用的硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.25g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。[0028]第二种硝酸细菌培养液由下述组分组成：NaNO20.74g、乙酸钠2g、MgSO47H2O0.05g、K2HPO40.2g、NaCl0.12g、MnSO44H2O0.01g、FeSO40.01g、加蒸馏水至1000mL。[0029]