国标GB478922016食品微生物菌落总数的测定

冠亚水分检测仪—2016食品微生物菌落总数的测定中华人民共和国国家标准GB4789.2—2016，食品安全国家标准、食品微生物学检验菌落总数测定，2016-12-23发布2017-06-23实施。中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会、国家食品药品监督管理总局发布前言本标准代替GB4789.2—2010《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》。1范围本标准规定了食品中菌落总数(Aerobicplatecount)的测定方法。本标准适用于食品中菌落总数的测定。2术语和定义菌落总数aerobicplatecount食品检样经过处理,在一定条件下(如培养基、培养温度和培养时间等)培养后,所得每g(mL)检样中形成的微生物菌落总数。3设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外,其他设备和材料如下:3.1恒温培养箱:36℃±1℃,30℃±1℃。3.2冰箱:2℃~5℃。3.3恒温水浴箱:46℃±1℃。3.4天平:感量为0.1g。3.5均质器。3.6振荡器。3.7无菌吸管:1mL(具0.01mL刻度)、10mL(具0.1mL刻度)或微量移液器及吸头。冠亚水分检测仪无菌锥形瓶:容量250mL、500mL。3.9无菌培养皿:直径90mm。3.10pH计或pH比色管或精密pH试纸。3.11放大镜或/和菌落计数器。4培养基和试剂4.1平板计数琼脂培养基:见A.1。4.2磷酸盐缓冲液:见A.2。4.3无菌生理盐水:见A.3。5检验程序菌落总数的检验程序见图1。冠亚水分检测仪固体和半固体样品:称取25g样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌均质杯内,8000r/min~10000r/min均质1min~2min,或放入盛有225mL稀释液的无菌均质袋中,用拍击式均质器拍打1min~2min,制成1∶10的样品匀液。6.1.2液体样品:以无菌吸管吸取25mL样品置盛有225mL磷酸盐缓冲液或生理盐水的无菌锥形瓶(瓶内预置适当数量的无菌玻璃珠)中,充分混匀,制成1∶10的样品匀液。6.1.3用1mL无菌吸管或微量移液器吸取1∶10样品匀液1mL,沿管壁缓慢注于盛有9mL稀释液的无菌试管中(注意吸管或吸头尖端不要触及稀释液面),振摇试管或换用1支无菌吸管反复吹打使其混合均匀,制成1∶100的样品匀液。6.1.4按6.1.3操作,制备10倍系列稀释样品匀液。每递增稀释一次,换用1次1mL无菌吸管或吸头。6.1.5根据对样品污染状况的估计,选择2个~3个适宜稀释度的样品匀液(液体样品可包括原液),在进行10倍递增稀释时,吸取1mL样品匀液于无菌平皿内,每个稀释度做两个平皿。同时,分别吸取1mL空白稀释液加入两个无菌平皿内作空白对照。6.1.6及时将15mL~20mL冷却至46℃的平板计数琼脂培养基(可放置于46℃±1℃恒温水浴箱中保温)倾注平皿,并转动平皿使其混合均匀。6.2培养6.2.1待琼脂凝固后,将平板翻转,36℃±1培养48h±2h。水产品30℃±1℃培养72h±3h。6.2.2如果样品中可能含有在琼脂培养基表面弥漫生长的菌落时,可在凝固后的琼脂表面覆盖一薄层琼脂培养基(约4mL),凝固后翻转平板,按6.2.1条件进行培养。6.3菌落计数6.3.1可用肉眼观察,必要时用放大镜或菌落计数器,记录稀释倍数和相应的菌落数量。菌落计数以菌落形成单位(colony-formingunits,CFU)表示。6.3.2选取菌落数在30CFU~300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数。低于30CFU的平板记录具体菌落数,大于300CFU的可记录为多不可计。每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。6.3.3其中一个平板有较大片状菌落生长时,则不宜采用,而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数;若片状菌落不到平板的一半,而其余一半中菌落分布又很均匀,即可计算半个平板后乘以2,代表一个平板菌落数。6.3.4当平板上出现菌落间无明显界线的链状生长时,则将每条单链作为一个菌落计数。7结果与报告7.1菌落总数的计算方法7.1.1若只有一个稀释度平板上的菌落数在适宜计数范围内,计算两个平板菌落数的平均值,再将平均值乘以相应稀释倍数,作为每g(mL)样品中菌落总数结果。7.1.2若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内时,按式(1)计算:冠亚水分检测仪数字修约后,表示为25000或2.5×104。7.1.3若所有稀释度的平板上菌落数均大于300CFU,则对稀释度最高的平板进行计数,其他平板可记录为多不可计,结果按平均菌落数乘以最高稀释倍数计算。7.1.4若所有稀释度的平板菌落数均小于30CFU,则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.1.5若所有稀释度(包括液体样品原液)平板均无菌落生长,则以小于1乘以最低稀释倍数计算。7.1.6若所有稀释度的平板菌落数均不在30CFU~300CFU之间,其中一部分小于30CFU或大于300CFU时,则以最接近30CFU或300CFU的平均菌落数乘以稀释倍数计算。7.2菌落总数的报告7.2.1菌落数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约,以整数报告。7.2.2菌落数大于或等于100CFU时,第3位数字采用“四舍五入”原则修约后,取前2位数字,后面用0代替位数;也可用10的指数形式来表示,按“四舍五入”原则修约后,采用两位有效数字。7.2.3若所有平板上为蔓延菌落而无法计数,则报告菌落蔓延。7.2.4若空白对照上有菌落生长,则此次检测结果无效。7.2.5称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。附录A培养基和试剂A.1平板计数琼脂(platecountagar,PCA)培养基A.1.1成分胰蛋白胨5.0g酵母浸膏2.5g葡萄糖1.0g琼脂15.0g蒸馏水1000mLA.1.2制法将上述成分加于蒸馏水中,煮沸溶解,调节pH至7.0±0.2。分装试管或锥形瓶,121℃高压灭冠亚水分检测仪。A.2磷酸盐缓冲液A.2.1成分磷酸二氢钾(KH2PO4)34.0g蒸馏水500mLA.2.2制法贮存液:称取34.0g的磷酸二氢钾溶于500mL蒸馏水中,用大约175mL的1mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2,用蒸馏水稀释至1000mL后贮存于冰箱。稀释液:取贮存液1.25mL,用蒸馏水稀释至1000mL,分装于适宜容器中,121℃高压灭菌15min。A.3无菌生理盐水A.3.1成分氯化钠8.5g蒸馏水1000mLA.3.2制法称取8.5g氯化钠溶于1000mL蒸馏水中,121℃高压灭菌15min。附录B食品水分测定仪厂商：深圳冠亚水分仪科技有限公司地址：深圳市南山区科技园科技中一路创业印章大厦电话：[phone]/300