微生物知识总结

微生物学实验复习1、培养基的种类及用途：标准培养基类型配制特点主要应用物理性质固体培养基加入琼脂较多菌种分离、鉴定、计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保存液体培养基不加入琼脂工业生产、连续培养化学合成合成培养基由已知成分配制而成，培养基成分明确分类、鉴定天然培养基由天然成分配制而成，培养基成分不明确工业生产半合成培养基部分天然物质和部分化学试剂配制而成兼有天然培养基和合成培养基的优点目的用途加富培养基营养物质仅适合一种或一类微生物能使某种微生物的生长、繁殖比其他微生物更加迅速、逐渐淘汰其他微生物鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加(或缺少)某种化学成分菌种的分离2、培养基中的营养物质：营养要素含义作用主要来源碳源凡能提供所需碳元素的物质构成生物体细胞的物质和一些代谢产物，有些是异养生物的能源物质无机化合物：CO2、NaHCO3；有机化合物：糖类、脂肪酸、花生饼粉、石油等氮源凡能提供所需氮元素的物质合成蛋白质、核酸以及含氮的代谢产物无机化合物：N2、NH3、铵盐、硝酸盐；有机化合物：尿素、牛肉膏、蛋白胨等生长因子生长必不可少的微量有机物酶和核酸的组成成分维生素、氨基酸、碱基等水在生物体内含量很高，在低等生物体内含量更高不仅是优良的溶剂，而且可维持生物大分子结构的稳定无机盐为微生物提供除碳、氮元素以外的各种重要元素，包括某些大量元素细胞内的组成成分，生理调节物质，某些化能自养菌的能源，酶的激活剂3、培养基的配置原则：(1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等)，如培养基可由简单的无机物组成，生产用培养基内可加入化学成分不明确的天然物质，而分类、鉴定用培养基内必须加入已知化学成分的物质。(2)营养要协调：注意各种营养物质的浓度和比例。(3)pH要适宜：各种微生物适宜生长的pH范围不同，如细菌、放线菌和真菌的最适pH分别为：6.5～7.5、7.5～8.5和5.0～6.0。4、灭菌与消毒：项目概念常用方法应用的范围消毒使用较为温和的物理或化学方法仅杀死物体上绝大多数微生物(包括病原微生物和有害微生物的营养细胞)煮沸消毒法：在100℃煮沸5～6min一般物品巴氏消毒法：70～75℃煮30min或在80℃煮15min一些不耐高温的液体，如牛奶化学药剂消毒法如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等紫外线消毒法：30W紫外灯照射30min接种室5、细菌培养基的配制过程？答：配制培养液→调节PH→分装→包扎→灭菌→搁置斜面（搁置斜面的长度不超过试管总长的1/2）【问题与探究】（1）培养基灭菌后，为什么需要冷却到50℃左右时，才能用来搁置斜面或倒平板？你用什么办法来估计培养基的温度？【提示】琼脂的凝固点为40℃，温度太高易使培养皿破裂，低于40℃，培养基已凝固，倒不出，所以培养基灭菌后，需冷却到50℃左右时才能用来倒平板，可以用手触摸盛有培养基的试管，感觉试管的温度下降到刚刚不烫手时就可以进行倒平板了。（2）为什么需要使试管口通过火焰？【提示】通过灼烧灭菌，防止试管口的微生物污染培养基。项目概念常用方法应用的范围灭菌使用强烈的物理或化学方法使物体内外所有的微生物永远丧失其生长繁殖能力灼烧灭菌：酒精灯火焰接种工具的灭菌干热灭菌：160～170℃下灭菌1～2h玻璃器皿、金属工具的灭菌高压蒸汽灭菌：121℃条件下，灭菌15～30min培养基及容器灭菌（3）为了能彻底灭菌，在操作过程中应注意哪些事项？【提示】使用高压蒸汽灭菌锅时，加压之前一定要把原先的空气排尽，注意恒温灭菌，同时要注意高压蒸汽灭菌锅的压力(100kPa)、温度(121℃)和灭菌时间(20min)。6、无菌操作和接种技术(1)接种概念：在_无菌条件下将微生物接入培养基____的操作过程。工具：玻璃刮铲、接种针和接种环。方法：穿刺接种、斜面划线接种和平板划线接种、涂抹平板等。（2）无菌操作——微生物接种技术的关键①培养微生物用的试管、培养皿和微生物培养基等，在接种之前都需要灭菌_。②通常接种操作要在____酒精灯火焰__的附近进行。【想一想】在微生物的培养过程中为什么要进行无菌操作？提示：无菌操作的目的是防止受到空气中的杂菌污染。7、微生物的分离（1）原理：根据微生物对_营养成分、氧气、pH等要求的不同，通过只提供目的微生物生长的必需条件，或加入某些抑制剂使非目的微生物不能生长，从而达到选择分离微生物的目的。(2)方法①据菌落形态特征初步分离②常用方法——平板分离法分类_____________混合平板法______________：是常用的平板分离法，有扇形划线、连续划线、交叉划线和方格划线等目的：在培养基上得到目的微生物的单个菌落【归纳】无菌技术的具体内容(1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手进行清洁和消毒。(2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。(3)实验操作应在酒精灯火焰附近进行，以避免周围环境中微生物的污染。(4)实验操作时应避免已灭菌处理的材料用具与周围物品接触。（5）在微生物的实验室培养中，无菌技术的核心是防止杂菌污染，保证培养物的纯度。8、平板分离法①原理：大多数细菌、许多真菌和单细胞藻类能在固体培养基上形成孤立的菌落。平板分离法能将单个微生物分离和固定在固体培养基表面或里面，每个孤立的活微生物体经过生长、繁殖均可形成便于移植的菌落。②常用培养基：最常用的分离、培养微生物的固体培养基是琼脂固体培养基。③.方法：(1)涂抹平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品倒入预先准备好的琼脂平板，用无菌玻璃刮铲将样品涂布均匀，细菌菌落常仅在平板表面生长。(2)混合平板法：分离材料进行10倍系列稀释，取一定稀释度样品与溶化的琼脂混合，将与样品混合的琼脂倒入无菌平皿，细菌菌落出现在平板表面及内部。(3)平板划线法：有扇形划线、连续划线、方格划线等。涂抹平板法平板划线法4.目的：通过采用各种平板分离法在培养基上得到目的微生物的单个菌落。(1)灭菌后的接种环须冷却后再挑取菌种，否则会杀死菌种。(2)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行，避免杂菌污染。(3)划线时用力大小要适当，防止用力过大使培养基划破。9、菌落数目的统计方法(1)显微镜直接计数法①原理：此法利用特定细菌计数板或血细胞计数板，在显微镜下计算一定容积的样品中微生物的数量。②方法：用计数板计数。计数板是特制的载玻片，其上有特定的面积为1mm2，高为0.1mm的计数室，一个计数室又被分成25个(或16个)中格，每个中格再被划分成16个(或25个)小格，每个计数室都由400个小格组成。③操作：将稀释的样品滴在计数板上，盖上盖玻片，然后在显微镜下计数4～5个中格中的细菌数，并求出每个小格所含细菌的平均数，再按计算公式求出每毫升样品中所含的细菌数。④计算公式每毫升原液所含细菌数＝每小格平均细菌数×400×10000×稀释倍数。⑤缺点：不能区分死菌与活菌。（2）间接计数法(活菌计数法)①原理：当样品的稀释度足够高时，培养基表面生长的一个菌落，来源于样品稀释液中的一个活菌，通过统计平板上的菌落数，就能推测出样品中大约含有多少活菌。②操作⒈设置重复组，增强实验的说服力与准确性。将待测样品经一系列10倍稀释，然后选择三个稀释度的菌液，分别取0.1mL接种到已制备好的平板上，然后用无菌涂布器将菌液涂布在整个平板表面，放在适宜的温度下培养计数菌落数。为使结果接近真实值，可将同一稀释度菌液加到三个或三个以上的平板上，经涂布、培养，计算出菌落平均数。2.为了保证结果准确，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，若设置的重复组中结果相差太远，意味着操作有误，需重新实验。(3)滤膜法①实例：测定饮用水中大肠杆菌的数目。②过程：将已知体积的水过滤后，将滤膜放于伊红菌落呈现绿色，并带有金属光泽可根据培养基上绿色的菌落数目，计算出水样中大肠杆菌的数量。【特别提醒】统计菌落数目的注意事项：①一般选择菌落数在30～300的平板进行计数。②统计的菌落数往往比活菌的实际数目低。③统计结果一般用菌落数而不是用活菌数表示。④设置对照，目的是排除实验组中无关因素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。实验探究：微生物的分离【操作与实践】微生物的分离包括样品稀释、划线或涂布及培养三个步骤。1.稀释用1mL无菌吸管吸取1mL大肠杆菌培养液，加入到盛有9mL无菌水的大试管中，充分混匀，然后用无菌吸管从此试管中吸取1mL加入另一支盛有9mL无菌水的试管中，混合均匀，依次类推制成10－1、10－2、10－3、10－4、10－5、10－6系列稀释度的大肠杆菌稀释液。2.划线或涂布(1)平板划线分离法——在近火焰处，左手拿皿底，右手拿接种环，挑取大肠杆菌培养液在平板上划线，常用的划线方法有平行划线和连续划线两种(如图)。平行划线时，每转一个角度烧一次接种环。划线完毕后，盖上培养皿盖，做好标记。特别提醒平板划线法中的注意事项①取菌种之前及每次划线之前都需要将接种环灼烧灭菌，划线操作结束时，仍需灼烧接种环，每次灼烧目的如下表：取菌种之前每次划线之前划线结束目的杀死接种环上原有的微生物杀死上次划线后接种环上残留的菌种，使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端，使每次划线后菌种数目减少杀死接种环上残存的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者②从第二次以后的划线操作总是从上一次划线末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。(2)涂布分离法——取3个平板，底面分别用记号笔写上10－4、10－5和10－6三种稀释度，然后用无菌吸管分别吸取相应稀释度的稀释液各0.1mL，放入已标记好的平板上，用无菌玻璃刮铲在培养基表面轻轻地涂布均匀，室温下静置5～10min，使菌液吸附进培养基(如图)。特别提醒①将玻璃刮铲末端浸在盛有体积分数为70%的酒精的烧杯中。取出时，要让多余的酒精在烧杯中滴尽，然后将沾有少量酒精的玻璃刮铲在火焰上引燃。②操作中一定要注意防火，不要将过热的玻璃刮铲放在盛放酒精的烧杯中，以免引燃其中的酒精。3.培养将划线或涂布接种的平板倒置于37℃培养箱中，培养16～24h，即可长出单菌落。【问题与探究】1.在涂布平板操作中，如何避免杂菌污染？【提示】(1)酒精灯与培养皿的距离要适中。(2)接种环、玻璃刮铲不能接触任何物体。(3)接种环要用酒精灯灼烧。(4)将沾有少量酒精的玻璃刮铲在火焰上引燃。2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？【提示】如果未接种的培养基在恒温箱中保温1～2d后有菌落生长，说明培养基灭菌失败，需要重新制备。3.在接种大肠杆菌的培养基上，你是否观察到了独立菌落？【提示】如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落特点，则说明接种操作符合要求；如果培养基上出现其他菌落，有其他杂菌混杂，可再一次进行分离、纯化，直到获得纯培养。