上海生物样本库

最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.01上海生物样本库最佳实践规范及标准操作流程文件汇编（第二版）2010年5月最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.011上海生物样本库质量管理体系文件文件名称组织样本OCT包埋及冰冻切片制作操作规程编号SOP-SC-005-01批准人批准日期实施日期组织样本OCT包埋及冰冻切片制作操作规程1.目的规范组织样本的采集后使用OCT复合物进行包埋和制作冰冻组织切片的操作。2.适用范围适用于组织样本采集后进行OCT包埋和制作冰冻组织切片的活动。3.定义和术语3.1组织样本组织样本是指由捐赠者提供的，专业人员采集的组织，包括肿瘤、病变组织和其它对照组织（包含近癌组织、癌旁组织、正常组织等）。3.2OCT（最佳切割温度）包埋使用OCT包埋剂对组织样本进行包埋。OCT包埋剂是一种聚乙二醇和聚乙烯醇的水溶性混合物，其用途是在冰冻切片时支撑组织，以增加组织的连续性，减少皱折及碎裂。4.职责4.1样本管理员对切割的组织块进行OCT包埋和制作冰冻组织切片。5.设备和器材5.1个人防护装备手套、口罩、实验防护服、护目镜及其它相关防护装备。5.2容器与器材最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.012无菌冻存管、OCT包埋模具、液氮容器、载玻片。5.3操作台专用取材台、冰冻切片机。5.4试剂OCT复合物、液氮。6.主要流程6.1样本要求6.1.1组织样本采集的过程参见《组织样本采集操作规程》中的具体流程。6.1.2进行OCT包埋的组织样本大小约0.5×0.5×0.5cm。6.1.3应尽量在组织切除后的30分钟内快速冰冻OCT包埋组织和制作冰冻组织切片。6.1.4进行OCT包埋的组织样本在处理前不能使用福尔马林处理，也不能在组织样本中加入血清。6.2组织块OCT包埋6.2.1准备好干净灭菌的包埋盒。6.2.2在包埋盒中滴入数滴OCT复合物，覆盖包埋盒的底部。6.2.3将需要处理的组织样本放入包埋盒中，根据形状调整组织的位置。6.2.4加入更多的OCT复合物覆盖组织样本。6.2.5避免在OCT复合物中产生气泡，去除任何产生在组织样本周围的气泡。6.2.6OCT包埋的组织块可进行快速冰冻保存或制作冰冻组织切片。6.3OCT包埋组织块的快速冰冻6.3.1OCT包埋组织块的快速冰冻方法参见《组织样本快速冰冻操作规程》中的液氮法。6.3.2将快速冰冻的OCT包埋组织块放入冻存管中并贴上标签，转运储存在-80℃冰箱中，储存的过程和要求参见《样本储存控制程序》和《组织样本储存操作规程》。6.4冰冻组织切片制作6.4.1选择好的冰冻切片机是保证切片质量的关键，建议使用恒冷箱冰冻切片机避免外界温度对切片的影响。冰冻切片机的操作按厂商有关说明书操作。最佳实践规范及标准操作流程文件汇编V2.0136.4.2将组织块固定在切片机的支承器上，调节冰冻温度调节器，在冷冻台上冰冻组织块，冰冻的温度不宜过低时间不宜过长，防止组织破碎。冰冻的温度可根据组织的类别进行调解。如果发现冰冻过度时，可将冰冻的组织连同支承器取出来，在室温停留片刻，再行切片，或者用大拇指按压组织块，以此来软化组织，再行切片。6.4.3调整切片机刀片到适当的位置和角度，试切出完整连续的切片以确定最适合的条件。6.4.4正式切片前应先对将组织块修平并暴露出需要的切面。6.4.5修块后调节切片厚度至需要的厚度进行快速连续切片。6.4.6将防卷板调校至适当的位置。切出的切片能在第一时间顺利地通过刀防卷板间的通道，平整地躺在持刀器的铁板上。6.4.7掀起防卷板，将冰冻组织切片附贴在载玻片上，应置放于一端2/3处的中央，留出另一端1/3位置贴标签。6.4.8将冰冻组织切片干燥后放入冰冻切片盒中，外用样品袋包扎严实，防止水汽进入，转运储存在-20℃冰箱中，储存的过程和要求参见《样本储存控制程序》和《组织样本储存操作规程》。7.相关文件《组织样本采集操作规程》SOP-SC-002-01《样本储存控制程序》SOP-SC-014-01《组织样本储存操作规程》SOP-SC-015-018.参考标准与文献BiorepositoryProtocols,AustralianBiospecimenNetwork,2007CommonMinimalTechnicalStandardsandProtocols,WHO2008BestPracticesforRepositories·Collection,Storage,RetrievalandDistributionofBiologicalMaterialsforResearch,ISBER,2008BestPracticesforBiospecimenResources,NationalCancerInstitute,2007临床技术操作规范·病理学分册，中华医学会，2008