NJKM-SOP0301.17---梅毒TRUST检测作业指导书--Version4.0

梅毒TRUST检测作业指导书1、试验原理：梅毒非特异抗体检测是采用抗原抗体凝集反应。其原理如下：采用VDRL抗原（牛心磷脂、卵磷脂及胆固醇）重悬于含有特制的甲苯胺红溶液中制成，供在白色卡片上进行实验，以检测血清或血浆中反应素用。2、样本收集和贮存：标本仅限于血清或血浆。适宜标本量为血清或血浆500ul，最少标本用量为血清或血浆200ul，三天内检测的标本应在2-8℃保存，三天内不检测的标本应贮存在-20℃，同时避免反复冻融血清。对于出现以下情况之一的标本应拒收：送检血清或血浆低于最少用量；蛋白变性标本；标本中含有颗粒物质；严重溶血、严重脂血的标本；有微生物污染的标本。3、安全防范：3．1检测试剂盒及内容物视为有传染性物质，属于生物危害物品。3．2移液过程禁止用口。3．3在处理试剂和标本的地方禁止吸烟，饮食。3．4使用试剂盒和标本时，必须戴一次性手套，穿试验服。使用后请彻底洗手清洁。3．5患者样本及其他潜在感染材料试验后应放入医用垃圾桶内。4、试剂：4．1储存与稳定性：试剂应在2-8℃保存，效期1年。4．2试剂盒组成：（上海荣盛）TRUST抗原悬液2.5mL×1瓶阳性对照血清1mL×1支阴性对照血清1mL×1支实验专用卡片120人份专用滴管及针头1套说明书1份5、仪器设备：5.1振荡器5.2微量移液器6、操作步骤：6.1分别吸取阴性和阳性对照，各滴加l滴(50UL)（或用加样枪吸取50UL)到反应卡的二个圈内铺匀。6.2吸取血清或血浆50UL(不需灭活)均匀涂满到白色卡片的另一个卡圈内。6.3轻轻摇匀抗原悬液，用加样枪吸取50UL于血清圈内。6.4按每分钟100转振荡或摇动卡片8分钟后，立即肉眼观察结果。6.5结果记录于《免疫室夜班项目操作表2》。7、结果解释7．1肉眼见到较大或较小的红色凝聚物，定为阳性反应。代表该标本中可以检测出反应素。建议双份复查。7．2肉眼见到均匀的抗原颗粒而无凝集物，定为阴性反应。代表该标本中尚未检测出反应素。7.3任何阳性结果需要与临床相联系来判定。8、正常参考范围：阴性(与年龄，性别，种族无关)9、质量控制：9．1只有全部使用本试剂盒内的试剂才能保证检测效果，因为所有试剂都是有关联的，不能混用其他制造商的产品。必须使用试剂盒配备的，不要使用其它批号产品。9．2每一种试剂都是经过校准以保证最佳的检测结果。这些试剂如果经过稀释或改动都会导致检测的敏感度的降低。9．3开始试验前，将所有试剂置于室温。9．4试验结果的可重复性依赖于充分混合试剂。使用前振荡装有对照血清及抗原悬液。9．5为避免干扰结果，高血脂的，溶血的，或污染的血清不要用于检测，样品不应加热灭活。9．6为排除专用滴管及针头所带来的加样量的不准确性，在每次加样血清标本及抗原悬液时需使用经校准过的加样枪。9．7在每次更换新批号时为了验证试剂反应的标准性，需与旧批号平行的进行比对，应使用外部阳性血清及阴性血清。10、方法学特性：10．1精密度:批内：平行做10个测试同一份标本，结果一致；日间：连续20天检测2NCU/ml质控品，结果全为阳性。10．2敏感性：100%10．3特异性：100%10.4分析灵敏度：0.5NCU/ml10.5符合性：100%（和广州金域实验室比对）11、临床意义:梅毒是由梅毒螺旋体引起的一种慢性、系统性传播疾病；人体受感染后螺旋体很快播散到全身，几乎可侵犯全身各组织与器官，临床表现多种多样；人类对梅毒无先天性免疫，尚无疫苗接种进行人工免疫，仅能在受感染后产生感染性免疫；已完全治愈的早期梅毒患者仍可以再感染。TRUST是一种梅毒血清学检测的非特异性反应，梅毒非特异性抗体为一种具有抗体性质的物质，叫反应素，是梅毒螺旋体破坏人体组织过程中释放出一种抗原性心磷脂刺激机体所产生的抗体。反应素一般在下疳出现后1-2周产生，经正规冶疗后可逐渐消失；常用于梅毒诊断的筛选和流行病学调查。由于梅毒非特异性抗体方法学上的局限性，特异性不高，存在假阳性，主要表现在：急性病毒性感染、自身免疫性疾病、结缔组织病、静脉吸毒者以及怀孕妇女、瘤型麻风、疟疾、系统性红斑狼疮、硬皮病、雅司病、回归热、钩端螺旋体病、血吸虫病、包虫病、旋毛虫病、传染性单核细胞增多症、结核病等疾病均可出现反应素。对于敏感性，由于感染梅毒后反应素的出现晚于梅毒特异性抗体（TPPA或TPHA）且晚期梅毒反应素可转阴因此不适于一、三期梅毒，对隐性梅毒和神经梅毒不敏感，有1-2%二期梅毒病人可出现前带现象而发生梅毒血清假阴性反应。