医学标书范文3

河南省科技攻关计划项目申请书姓名：JiangDongbao项目名称：FGFR4表达对结直肠癌细胞株生物学行为的影响及作用机制的研究单位：郑州大学联系电话：填报说明请根据自己的专业及研究方向，针对某具体临床问题，结合所学习临床科研方法的一种或几种写出一份科研设计。完成后，文件以个人姓名命名，发至：[e-mail]。考核成绩依设计书优略评定。截至日期2013年11月8日。1一、项目的立项依据和意义（说明国内外相关领域技术发展水平和趋势等）结直肠癌（colorectalcancer，CRC）是起源于结直肠黏膜上皮的恶性肿瘤，是临床最常见的恶性肿瘤之一。我国每年结直肠癌新发病例超过25万，死亡病例约14万，新发与死亡病例均占全世界同期结直肠癌病例的20%[1]。局部进展期结直肠癌5年癌症相关生存率为70%，而发生远处转移的晚期结直肠癌5年生存率仅为12%，且生活质量低。目前结直肠癌新辅助化疗、辅助化疗、姑息化疗方案很多，如ECF、DCF、奥沙利铂+氟尿嘧啶、顺铂+氟尿嘧啶等，但其最核心的药物是氟尿嘧啶，在此基础上联合其他化疗药物。近年来，靶向药物在结直肠癌治疗领域的研究和应用成为一大热点，作用于EGFR的爱必妥、作用于VEGF的贝伐单抗、针对Her-2的赫赛汀等已进入胃癌治疗的临床实验中。成纤维生长因子受体（FGFRs）是一个多基因家族,属免疫球蛋白基因超家族成员,是分布在多种细胞上的膜蛋白，FGFR家族成员有FGFR1、FGFR2、FGFR3以及FGFR4。它们的特点是在胞膜外含有3个免疫球蛋白样结构域，一个疏水的跨膜结构，胞浆内含有两个呈串联结构的酪氨酸激酶功能区。FGFR1～3在体内是广泛分布的,而FGFR4主要在发育早期大量表达,而且主要分布在视网膜和肾脏。编码FGFR4蛋白的FGFR4基因位于5号染色体，5q35.1-qter，基因编号为2264。FGFR4蛋白是一类具有自身磷酸化活性的跨膜酪氨酸激酶受体中的一种,在胚胎发育、组织修复和血管形成等进程中起着十分重要的作用[2,3]。但FGFR4在恶性肿瘤中的研究相对较少，Pubmed检索该分子在胃癌中的研究仅见几篇报道，而且研究尚不深入。但有学者认为，FGFR家族是在恶性肿瘤诊治方面是一个新兴的领域，有广阔的应用前景[4]。FGFR4在常见的恶性肿瘤如乳腺癌、胰腺癌、横纹肌肉瘤及肾细胞癌中均呈高表达[5-7]。MeijerD等报道FGFR4表达是复发性乳腺癌患者的独立的预后因素[8]；Milano等研究亦认为FGFR4可以预测三苯氧胺治疗乳腺癌的疗效[9]。Gowardhan等[10]研究报道，与良性增生相比，FGFR4在前列腺癌中的表达显著上调；FGFR4的表达与Gleason评分相关；生存分析显示，FGFR4过表达与较差的预后相关，无病生存期缩短。HoHK等对57对肝细胞肝癌组织及对应的正常组织进行realtimePCR定量检测FGFR4在mRNA水平的表达，统计结果显示，FGFR4的表达与患者的主要临床病理资料无相关性，可能是由于样本量较小[11]。Streit等[12]通过免疫组化技术对137例恶性黑色素瘤组织标本进行FGFR4蛋白水平表达进行检测，结果显示，FGFR4在恶性黑色素瘤组织标本中的表达率为45%，FGFR4的表达与肿瘤临床分期、微溃疡形成、原发灶的数目、总生存期及无病生存期均有明显相关性，作者认为FGFR4蛋白的表达可作为恶性黑色素瘤进展的潜在指标。自2002年，Bange等[13]发现了FGFR4Gly388Arg这一胚系多态性后，该SNP现已成为了一个研究的热点。该SNP是位于FGFR4第9外显子388密码子上，碱基G转变为A，导致了FGFR4的氨基酸序列发生了变化，即388位氨基酸由甘氨酸转变为精氨酸，该位点位于FGFR4的高度保守序列中。2据报道，FGFR4Arg388基因型并不影响肿瘤的发生过程，因为在乳腺癌患者及正常对照中，该SNP在两组中的分布比例大致相同，FGFR4Arg388基因型均占50%左右。但在淋巴结阳性的乳腺癌患者中，FGFR4Arg388基因型与更短的无病生存期和总生存期有关[14]。有报道显示，携带有Arg388等位基因的肺癌患者肿瘤发病年龄更早，差的临床分期的比例更高，生存期更短，所以FGFR4Gly388Arg可能预测肺癌的预后[15]。这些发现强调了该SNP位点具有临床意义，这一推断已在头颈部癌、前列腺癌、肺癌等恶性肿瘤中得以证实[3,16-18]。当然也有一些文献认为该SNP无预后价值。近来，一项随机的II期实验研究中，257例T2-4/N0-2/M0原发性乳腺癌患者接受了阿霉素和环磷酰胺（AC）或阿霉素和培美曲唑（AP），序贯多西他赛（Doc）作为新辅助化疗，多因素分析显示，FGFR4Arg388是AC-Doc作为乳腺癌患者新辅助治疗方案病理性完全缓解的独立预后因素[19]。Sugiyama等发现了MT1-MMP/FGFR4这个复合物，其中FGFR4R388等位基因可通过减少溶酶体对MT1-MMP的降解而增加对胶原蛋白的侵袭；通过siRNA下调MT1-MMP或FGFR4-R388均可阻止细胞侵袭和生长[20]。近来一项meta分析显示，FGFR4Gly388Arg多态性与前列腺癌的进展相关，可作为前列腺癌的进展的一个分子标记[21]。在目前发现的20余种成纤维生长因子（FGF）中，能与FGFR4结合的生长因子有FGF1,2,4,6,8,9,16,17,18和19。其中只有FGF19仅对FGFR4特异性结合[22]。且无论有无β-Klotho存在，FGF19均可与FGFR4结合而引起后续的生物学效应[23]。FGFR4的激活是FGF19促进肝细胞增殖，诱导肝癌形成的机制[24]FGFR4在在结直肠癌中的研究甚少，故而本课题重点探讨了FGFR4的表达对结直肠癌细胞株的生物学行为的影响及作用机制。本研究为了解FGFR4对结直肠癌细胞株生物学特性的影响，进行了体外功能实验，通过慢病毒转染技术下调FGFR4的表达，然后进行了一系列功能实验，包括增殖实验、克隆实验、侵袭实验、划痕实验、流式细胞仪检测细胞的凋亡和细胞周期的变化，westernblot检测凋亡及细胞周期相关蛋白在干扰前后的变化，初步探讨FGFR4影响结直肠癌细胞株生物学行为的机制。1.InternationalAgencyforResearchOnCancer.WorldHealthOrganization.GLOBOCAN2012:EstimatedCancerIncidence,MortalityandPrevalenceWorldwidein2012[EB/OL][2014-12-5].2.EswarakumarVP,LaxI,SchlessingerJ.Cellularsignalingbyfibroblastgrowthfactorreceptors.CytokineGrowthFactorRev2005;16:139–49.3.WangJ,StocktonDW,IttmannM.Thefibroblastgrowthfactorreceptor-4Arg388alleleisassociatedwithprostatecancerinitiationandprogression.ClinCancerRes2004;10:6169–78.4.KatohM.GeneticalterationsofFGFreceptors:anemergingfieldinclinicalcancerdiagnosticsandtherapeutics.ExpertRevAnticancerTher2010;10:1375-9.5.JacquemierJ,AdelaideJ,ParcP,etal.ExpressionoftheFGFR1geneinhumanbreastcarcinomacells.IntJCancer1994;59:373-86.LeungHY,GullickWJ,LemoineNR.Expressionandfunctionalactivityoffibroblastgrowthfactorsandtheirreceptorsinhumanpancreaticcancer.IntJCancer1994;59:667-75.37.TakahashiA,SasakiH,KimSJ,etal.Identificationofreceptorgenesinrenalcellcarcinomaassociatedwithangiogenesisbydifferentialhybridizationtechnique.BiochemBiophysResCommun1999;257:855-9.8.MeijerD,SieuwertsAM,LookMP,etal.Fibroblastgrowthfactorreceptor4predictsfailureontamoxifentherapyinpatientswithrecurrentbreastcancer.EndocrRelatCancer.2008;15:101-11.9.MilanoA,DalLagoL,SotiriouC,etal.Whatcliniciansneedtoknowaboutantioestrogenresistanceinbreastcancertherapy.EuropeanJournalofCancer2006;42:2692–705.10.GowardhanB,DouglasDA,MathersME,etal.Evaluationofthefibroblastgrowthfactorsystemasapotentialtargetfortherapyinhumanprostatecancer.BrJCancer.2005;92:320-7.11.HoHK,PokS,StreitS,etal.Fibroblastgrowthfactorreceptor4regulatesproliferation,anti-apoptosisandalpha-fetoproteinsecretionduringhepatocellularcarcinomaprogressionandrepresentsapotentialtargetfortherapeuticintervention.JHepatol.2009;50:118-27.12.StreitS,MestelDS,SchmidtM,FGFR4Arg388allelecorrelateswithtumourthicknessandFGFR4proteinexpressionwithsurvivalofmelanomapatients.BrJCancer.2006;94:1879-86.13.BangeJ,PrechtlD,CheburkinY,etal.CancerprogressionandtumorcellmotilityareassociatedwiththeFGFR4Arg(388)allele.CancerRes2002;62:840-47.14.ThussbasC,NahrigJ,StreitS,etal.FGFR4Arg388alleleisassociatedwithresistancetoadjuvanttherapyinprimarybreastcancer.JClinOncol2006;24:3747-55.15.SpinolaM,LeoniV,PignatielloC,etal.FunctionalFGFR4Gly388Argpolymorphismpredictsprognosisinlungadenocarcinomapatients.JClinOncol2005;23:7307-11.16.MaZ,TsuchiyaN,YuasaT,etal.Polymorphismsoffibrobl