卵磷脂的制备及鉴定

卵磷脂的制备及鉴定一、实验目的要求1、熟悉鸡蛋黄制备卵磷脂的原理。2、掌握卵磷脂的制备与减压蒸馏的基本操作方法。二、实验重点和难点从蛋黄中制备卵磷脂的操作方法。三、实验原理将卵黄中加乙醇，卵磷脂溶于乙醇溶液中，分离提取，蛋白质等某些杂质从沉淀物中除去。但由于乙醇抽提时，其他脂质也一起被抽提，如甘油三酯、甾醇等。利用卵磷脂不溶于丙酮的性质，用丙酮从粗卵磷脂溶液中沉淀磷脂，能使卵磷脂与其他脂质和胆固醇分离开来。无机盐和卵磷脂可生成络合物沉淀，因此，可利用金属盐沉淀剂将卵磷脂从溶液中分离出来，由此除去蛋白质、脂肪等杂质，再用适当溶剂萃取出无机盐和其他磷脂杂质。四、实验仪器、试剂与材料1、仪器：离心机、旋转薄膜蒸发仪、布氏漏斗、抽滤瓶、真空干燥箱、层析缸、紫外分光光度计。2、试液：l0%的ZnCl2溶液：取氯化锌10g，加水溶解并稀释至100ml，摇匀，即得。3、试剂与材料：氯化锌、95%乙醇、丙酮、氯仿、碘、甲醇、无水乙醇。五、操作步骤1、粗提：取鸡蛋卵黄适量，用2倍于卵黄体积的95%乙醇混合搅拌、提取，离心分离（300Or/min，5min），将沉淀物重复提取3次，回收上清液。然后减压蒸馏（45℃）至近干，用少量石油醚洗下粘壁的黄色油状物。加入丙酮溶解，抽滤，分离出沉淀，真空干燥（40℃，3Omin），得到淡黄色的粗卵磷脂，称重。2、精制：取一定量的卵磷脂粗品，加无水乙醇溶解，得到约10%的乙醇粗提液。加入相当于卵磷脂质量的l0%的ZnCl2溶液，室温搅拌0.5h。分离沉淀物，加适量冰丙酮（4℃）洗涤，搅拌lh，再用丙酮反复研洗，直到丙酮洗液为近无色止，得到白色蜡状的精制卵磷脂；干燥；称重。3、鉴定：（1）薄层色谱分析：取卵磷脂样品与对照品分别制成2%氯仿溶液，用GF254硅胶板以氯仿：甲醇：水（65：25：4）为展开剂，展开，取出，干燥，碘蒸气显色。（2）紫外吸收光谱测定：将一定量卵磷脂制成0.l%无水乙醇溶液，照紫外分光光法在190～40Onm处测定，卵磷脂的紫外最大吸波长在215nm。六、结果与讨论1、计算卵磷脂收率，分析影响卵磷脂收率的主要因素。2、根据薄层色谱图谱、紫外吸收图谱分析所制备的卵磷脂的纯度。