慢病毒载体构建包装流程

慢病毒载体构建及包装流程1汉恒生物公司地址：上海市徐汇区斜土路1175号15楼Tel：021-51296258E-mail:[e-mail]实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号张江药谷503慢病毒载体构建及包装流程（一）实验流程（1和2为并列步骤）1.慢病毒过表达质粒载体的构建设计上下游特异性扩增引物，同时引入酶切位点，PCR(采用高保真KOD酶，3K内突变率为0%)从模板中（CDNA质粒或者文库）调取目的基因CDS区（codingsequence）连入T载体。将CDS区从T载体上切下，装入慢病毒过表达质粒载体。2.慢病毒干扰质粒载体的构建合成siRNA对应的DNA颈环结构，退火后连入慢病毒干扰质粒载体3.慢病毒载体的包装与浓缩纯化制备慢病毒穿梭质粒及其辅助包装原件载体质粒，三种质粒载体分别进行高纯度无内毒素抽提，共转染293T细胞，转染后6h更换为完全培养基，培养48和72h后，分别收集富含慢病毒颗粒的细胞上清液，病毒上清液通过超离心浓缩病毒。4.想要了解更多详细信息，可进入，获取更多技术文档。慢病毒载体构建及包装流程2汉恒生物公司地址：上海市徐汇区斜土路1175号15楼Tel：021-51296258E-mail:[e-mail]实验室地址：上海市张江高科技园区蔡伦路781号张江药谷503(二)流程图