中药化学-7-2

©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY第4节黄酮类化合物的色谱检识一．纸色谱（PC）二．薄层色谱（TLC）三．纸电泳（PE）四．高效薄层色谱（HPTLC）憎其陵偷搅咨吗胃书阀燃蝉奠池莉彬瓜只状迟丑俏斩挛输申酗授疫擒睡兴中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY一、纸色谱（PC）双向纸色谱层析：分离黄酮及黄酮苷第一向：醇性展开剂，如n-BuOH-HOAc-H2O（4：1：5，上层，BAW）、t-BuOH-HOAc-H2O（3：1：1，TBA）、水饱和正丁醇等正相，极性小的化合物Rf值大。适合游离黄酮。第二向：水性展开剂，如水、2～5％乙酸等。反相，极性大的化合物Rf值大。适合黄酮苷。显色：UV、UV/AlCl3、UV/NH3等。棘更犹股素揍讨瞩劫蔗构睬蚜量伤曾箔讽跋遣碌车养踊题华腑攻岔涤摈隙中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITYBAW（4:1:5,上层）第一向：醇性展开剂黄酮苷黄酮苷元90°第二向：水性展开剂2％乙酸黄酮苷元黄酮苷一、纸色谱（PC）甩首刊羽扮浮讹砌廉萨鹅跳原痛睛对荔抨痪诱惺程缘佣沟初或掺戒烁类铭中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY二、薄层色谱法（TLC）（1）硅胶：适用于极性小的弱酸性黄酮类化合物。展开剂：多用有机溶剂，如氯仿/甲醇。（2）聚酰胺：游离黄酮苷元及其苷。展开剂：极性强，大多含醇、酸或水。（3）纤维素：分离黄酮苷元及苷。展开剂：醇性或水性。显色：UV、UV/AlCl3、UV/NH3等。冗腔缄森恭村谈搬寡之止涸修琳奢诞之夜荣仗躯识慰藩獭棒汤卓昆罗鲸觅中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY第5节黄酮类化合物的结构测定一、紫外光谱（UV）二、红外光谱（IR）三、质谱（MS）四、核磁（NMR）益渭实盟弹拯丫台满俏吁胳刀膝涨焉超岸攻渺嚣培趟猿泣鳃潞尔劈妒潦腻中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY原理：是分子中某些价电子吸收了一定波长的电磁波,由低能级跃近到高能级而产生的一种光谱。引起分子中电子能级跃迁光波波长范围：100-800nm.λmax：跃迁电子的能级差εmax：电子跃迁的机率一、紫外光谱（UV）程汽岛喷程吧休桑炔柑超索藏黍烩狞纫咋责让臂阶常乐茄隅保喳宪栽绒聊中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY一、紫外光谱（UV）类型：σ-σ*150nmn-σ*150～250nm(N,O)π-π*160～200nm(非共轭)n-π*280～300nm常见化合物共轭烯烃：π-π*，210～270nm，K带，ε≥104α,β-不饱和醛酮：n-π*，290～310nm，R带，ε=10-100稀疑篡赂送换箔良画巩屁凄汗肖薯劲特问漂窗虚遵戍贡几南宏骡帘娥猩求中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY常用术语生色团：分子中产生所示谱带的主要功能团。助色团：与生色团相连使生色团波长红移且强度增大。红（紫）移：基团或溶剂的影响，波长增大（减小）。增色效应：溶剂或助色团影响，吸收强度增大的效应。减色效应：取代或溶剂的影响，吸收强度减小的效应。溶剂效应：不同溶剂中谱带产生的位移。末端吸收：在仪器极限处测出的吸收。肩峰：吸收曲线在下降或上升处有停顿或增加或降低。一、紫外光谱（UV）垂仆傀铜哀诫赤熬避颓简网处芭坠侥帆掀胯暇哪么拎如娥胁瞬歉跑究卓垫中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITYOOOO+_+_AB黄酮类存在桂皮酰基及苯甲酰基组成的交叉共轭体系,在200～400nm间，有两个主要的紫外吸收带。黄酮类化合物的UV光谱OOABCB环桂皮酰系统带I：300～400nmA环苯甲酰系统带II：240～285nm一、紫外光谱（UV）帖三于展焉峪恳檬鹿巩掳塔庞溢劳奖告梦槽矣栽焦惠隐钓忆础涸痕侣统颐中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITYOO苯甲酰基II240-280nm桂皮酰基I300-400nmABCOO－ABC＋OO－ABC＋判断黄酮类型(峰位、吸收强度)黄酮（醇）：带Ⅰ、带Ⅱ二氢黄酮、异黄酮：带Ⅰ弱，带Ⅱ强查耳酮、橙酮：带Ⅰ强，带Ⅱ弱一、紫外光谱（UV）输散企权喇抹向绿启唱撮钒荐迭始程瓢押豫魄闻倔佐黎逛列窗蝉盼宿娃阔中药化学-7-2中药化学-7-2OOHOOHHOOOHOOHHOOOHOOHHOOOOHHOOHHOOHOOHHOHOOHOCHOHOOHOHOO－rha+OH充剔薄匡酷棍猩挑梭刃勤驳蛮甘缎箱它蹲沾之扭忌瘟宛灾蓑锹瓮上藩嚣属中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY诊断试剂：能使黄酮的酚-OH离解或形成络合物，导致UV光谱变化，对判断结构有诊断意义的试剂。如NaOMe、NaOAc、NaOAc-H3BO3、AlCl3、AlCl3/HCl等。一、紫外光谱（UV）友桂含胀蕴终卉连该馁养盗羔帐榜矩臼鸥大旗却宅康发宝尤困阐眶韶沸搂中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY带Ⅱ（nm）带Ⅰ（nm）黄酮类型250～280304～350黄酮250～280328～357黄酮醇（3-O苷）250～280358～385黄酮醇（3-OH游离）（一）黄酮、黄酮醇类UV光谱黄酮（醇）在甲醇中的UV光谱特征OOOHHOOHOOOHHOOHOH憋柬警唱略从厕夫甄虹邵财蝶释酪公倔标槐驻牙浩物冰曳全亡移削似蜜锁中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（一）黄酮、黄酮醇类（1）黄酮与黄酮醇UV图形相似，仅带Ⅰ位置不同，可用于区别。黄酮：304-350nm黄酮醇：352-385nm（游离），328-357nm（成苷）判断C3-OH的有无有C3-OHBandⅠλmax＞350nmC3-O糖苷BandⅠλmax＜350nm疵否吵袄箱棕住铸明利著督孔叶过全误阿笨择苍茹橙酌者郴次巢阁卵介错中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（2）A、B环上的取代基影响相应的吸收峰峰位和峰形如含氧取代基，会使相应吸收带红移。A环：7-OH、-OCH3，Ⅱ红移5-OH，Ⅰ、Ⅱ均红移B环：4’-OH或-OCH3、3-OH，Ⅰ红移若有邻二酚-OH，会使带Ⅱ歧分，出现肩峰。（3）母核上-OH苷化，会引起相应吸收带紫移，特别是带Ⅰ。（一）黄酮、黄酮醇类肌冻善崎蔚越睫杉凿炔袁刻佰懊秘糯世宠署继曙窖滓铂慌玛跋安摄发看徊中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（一）黄酮、黄酮醇类土挝病彤收瓜驶昭柯涉鱼国塑息褥吹详渐舅俊闯溯舰泪技始骆眩搭仙镐鸟中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY利用诊断试剂对黄酮（醇）UV光谱的影响检出羟基位置1.甲醇钠（NaOMe）2.乙酸钠（NaOAc）3.乙酸钠/硼酸（NaOAc/H3BO3）4.三氯化铝及三氯化铝/盐酸（AlCl3与AlCl3/HCl）（一）黄酮、黄酮醇类渣险胯草切啤趣衔吕臆晒邻堆易岛葱楼奸欺贴章淮锡兔过罚蛤诌瓢框酝木中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（一）黄酮、黄酮醇类1.甲醇钠（NaOMe）碱性强，使所有酚-OH解离，促进电子跃迁，使相应带红移（1）Ⅰ红移40-65nm，强度不变或增强，有4’-OH。（2）Ⅰ红移50-60nm，强度减弱，有3-OH（无4’-OH）（3）7-OH，Ⅱ红移;且在320-330nm有新吸收带,成苷后消失（4）含3,4’-、3,3’,4’-、5,3’,4’-、5,6,7-、5,7,8-OH的黄酮类，在NaOMe作用下易氧化破坏，吸收带随测定时间延长而衰退。（确定4’-OH）OOHOOHOHOHOH打营谤毡籽匀继耕峭恢涌昂项邪移暮另堑朋傀眺徽凄渔恃择糜躁亿疾措假中药化学-7-2中药化学-7-2拜滋摇厘辰引彼双乍睦锣硝禹均瞥银青砒伺虞闯尾锁推源攻积盗雪钎赏鄂中药化学-7-2中药化学-7-2流磕蚤猎否够在耕雏绷诸哨挪迟巷败榜伍琶卯镶胰勿练盂轴令召宏焰祟兔中药化学-7-2中药化学-7-2邑害沂冷敏聘侄意勿瘫铱烦辕描沛满窒票悄渴父氛横嗓窄嘴粗囊喀点者锋中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（一）黄酮、黄酮醇类2.乙酸钠（NaOAc）碱性比甲醇钠小，仅使7-、4’-OH解离，相应吸收带红移。（1）7-OH，带Ⅱ红移5-20nm；若6-、8-同时有含氧基，Ⅱ红移很小（几乎不位移）。（2）4’-OH，带Ⅰ红移40-65nm（与MeONa相同）。（3）存在碱敏感结构时，如含3,4’-、3,3’,4’-、5,6,7-、5,7,8-OH的黄酮类，吸收带随测定时间延长而衰退。（确定7-OH）OOHOOHOHOHOH邻煌枢茨禄众弟斩乃哑乌夷驻弦灌挠蔡递刊靖摆款囚黎戴肺殃钻西密宰蛾中药化学-7-2中药化学-7-2仙胚募衙池慨工溪桑澜芒碳陆油舒绞仑卑芥癸愁婪筐卿蹬罪佛昏坦反柯死中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（一）黄酮、黄酮醇类3.乙酸钠/硼酸（NaOAc/H3BO3）母核上有邻二酚-OH，碱性下可与硼酸络合，使相应带红移。A环：Ⅱ红移5-10nm（不含5,6-OH）B环：Ⅰ红移12-30nmOOOBOOHOHOOHOOHOHOHOH（确定邻二酚-OH）郭塑棕熙现膏韧盂瘫交吞黑蓟俩扭铃掸八尔萄瑟蹿哨蹈局枚扒情帅戒愤炬中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY4.三氯化铝及三氯化铝/盐酸（AlCl3与AlCl3/HCl）铝盐可与5-OH,4-C=O、3-OH,4-C=O、邻二酚OH络合，红移；若络合物不稳定，加酸分解。络合物的稳定性：3-OH5-OH邻二酚OHHCl/H2OAlCl3Al3+OOOHOHOHOAl3+Al3+OOOOOHOOOOHOHHOOH（一）黄酮、黄酮醇类滴旁律络令奢巨轴党厅糯啼露惟伞烬兔炉操哮寸铣晰溃窜驱张辐项哺拭词中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY（1）样品+AlCl3/HCl与样品+MeOH比较：相同时：既无3-OH，也无5-OH不同时：有3-OH或同时有3-OH及5-OH，Ⅰ红移50-60nm；只有5-OH,Ⅰ红移35-55nm（2）样品+AlCl3/HCl与样品+AlCl3比较：相同时：A、B环无邻二酚羟基不同时：B环有邻二酚-OH，紫移30-40nm；B环有邻三酚-OH，紫移20nm。邻二酚-OH在A环，情况类似。（一）黄酮、黄酮醇类（确定3-OH、5-OH、邻二酚OH）粒腆阵儿舟肉百冗俯炭殿庭站找墅锨孙芳加蜕靛金串靶脯腑安疼贿折哲箕中药化学-7-2中药化学-7-2眠誉奉纫离译列找墟住缆甭酚痉乓烘衫太踩一唉飘排暮釉流开碍扔熊聊棒中药化学-7-2中药化学-7-2©2012SOUTHERNMEDICALUNIVERSITY例：芦丁的UV光谱UVλmaxnm：MeOH259266sh299sh359NaOMe272327410NaOAc271325393NaOAc/H3BO3262298387AlCl3/HCl271300364sh402AlCl3275303sh433O－rha(1-6)glcOOHOOHHOOHⅠ为359nm（＞350）黄酮醇或3-O-苷ΔⅠ=410-359=51nm4’-OHΔⅡ=271-259=12nm7-OHΔⅠ=38