中药化学-第三章-苷类化合物

第三章苷类化合物第一节：苷的结构和分类苷的含义——糖和糖的衍生物如氨基糖、糖醛酸等与另一非糖物质通过糖的端基碳原子连结而成的一类化合物。以葡萄糖为例。苷键原子苷元苷键端基碳原子β―D―葡萄糖苷OOHOHOHORO1H23456苷元+糖=苷糖的构型绝对构型端基碳原子的相对构型依C5-R取向依C1-OH与C5-R相对位置D-型（向上）L-型（向下）β-型（同侧）ａ-型（异侧）多形成β―D―葡萄糖ａ--L―鼠李糖糖的类型五碳醛糖:D-木糖（xyl）;D-核糖（rib）;L-阿拉伯糖（ara）甲基五碳糖:L-鼠李糖（rha）六碳醛糖:D-葡萄糖（glc）;D-半乳糖（gal）六碳酮糖:D-果糖（fru）糖醛酸:D―葡萄糖醛酸(glucuronicacid)；D―半乳糖醛酸(galacturonicacid)糖醇：D―甘露醇(mannitol).去氧糖（强心苷多见）:D―洋地黄毒糖digitoxose）氨基糖(动物和菌类）:2―氨基―2―去氧―D―葡萄糖（2-amino-2-deoxy-glucose）重要的双糖：龙胆二糖(gentiobiose)麦芽糖(maltose)芸香糖(rutinose)槐糖(sophorose)新橙皮糖(neohesperidose)低聚糖由2—9个单糖基组成植物体内常见糖的哈沃斯（Haworth）投影式结构：D―木糖（xyl）D―核糖（rib）L―阿拉伯糖（ara）L―鼠李糖（rha）D―葡萄糖（glc）D―半乳糖（gal）D―葡萄糖醛酸D―半乳糖醛酸H,OHOOHOHCOOHHOOOHOHOHCOOHH,OHOOHOHOHOHH,OHH,OHOOHOHOHHOOOHOHOHH,OHOOHOHOHH,OHOOHOHOHH,OHOOHOHOHCH3H,OHH,OHOOHCH3HOONH2OHOOHH,OHHOOOHOHH(OH)CH2OHD―果糖（fru）D―洋地黄糖2―氨基―2―去氧―D―葡萄糖（digitoxose）（2-amino-2-deoxy-glucose）OOHOHOHCH3OOHOHOHOH,OHOOHOHOHOHOOHOHOHOH,OH芸香糖(rutinose)龙胆二糖(gentiobiose)OH,OHOOOHOHHOOOHOHCH3HH,OHOOHOHOHOHOOOOHOHH新橙皮糖(neohesperidose)槐糖(sophorose)苷的结构分类1、氧苷：依苷元羟基的类型分为醇苷：红景天苷酚苷：天麻苷、白藜芦醇苷酯苷：山慈姑苷A、B氰苷：苦杏仁苷按苷键原子分类：氧苷、硫苷、氮苷、碳苷OOHOHOHOOHOOHOHOHOCHCNOOHOHOHOHOHO红景天苷（醇苷）苦杏仁苷（氰苷）CH2OHOglcCHOHOHOCHglc白藜芦醇苷（酚苷）天麻苷（酚苷）2、硫苷：黑芥子苷、白芥子苷3、氮苷：腺苷、鸟苷等，生化中多见。4、碳苷：芦荟苷.CH2CHCH2CNSOSO3Kglc黑芥子苷（硫苷）NNNNNH2OOHOHHOCH2OOHOHOHOHOOOHOHCH2OHHOOHOHOHOOHCH2OHOCH2R腺苷（氮苷）芦荟苷（碳苷）山慈姑苷AR=H山慈姑苷BR=OH(酯苷)其他分类方法按苷元类型：黄酮苷、蒽醌苷、香豆素苷按植物体内存在状态：原生苷、次生苷按苷特殊性：皂苷按生理作用：强心苷按糖的种类和名称：木糖苷、葡萄糖苷按单糖基的数目：单糖苷、双糖苷按糖链的数目：单糖链苷、双糖链苷、三糖链苷第二节：苷的性质一、性状：形态—均为固体，含糖基少―可成结晶含糖基多―无定型粉末，有引湿性颜色—取决于苷元（共轭系统的大小及助色团的有无）气味—一般无味；个别对黏膜有刺激性（皂苷）二、旋光性：苷都有旋光性（糖和/或苷元），且呈左旋，糖为右旋。溶解性水甲（乙）醇乙醚（苯）石油醚苷元（亲脂性）-+++（-）苷（亲水性）++--苷键的裂解（酸水解、酶解、碱水解、乙酰解、氧化开裂法等）（一）酸水解：反应机理（以葡萄糖为例）OOHOHOHOHORHOOHOHOHOHHOROOHOHOHOHHOOHOHOHOHOHHOOHOHOHOHH2++2++++H+-ROHOH-HH,OH苷键原子质子化苷键断裂阳碳离子溶剂化脱去氢离子酸水解难易的关键苷键原子周围的电子云密度（电子云密度大，易于接受质子，水解容易）空间环境（有利于接受质子，水解就容易）酸水解的规律1．与苷键原子有关:N―苷O―苷S―苷C―苷(易于接受质子)（无孤对电子）2．呋喃糖苷（酮糖）吡喃糖苷（醛糖）（分子平面性，张力大）3．五碳糖苷甲基五碳糖苷六碳糖苷七碳糖苷糖醛酸苷（空间位阻小）（大）4．2—氨基糖苷2—羟基糖苷2—去氧糖苷2，3—去氧糖苷（竞争性吸引质子）（无）（无）5．芳香族苷脂肪族苷（苷元供电性）影响苷键原子质子化的因素难水解的碳苷苷元结构不太稳定的氧苷（皂苷）氧化开裂法—Smith降解法;两相酸水解法（样品+酸水+苯/氯仿）获得真正苷元OOHOHOHOHOROOHOHCCH2OHOOHIO4-OROHCORCH2OHBH4-H+CH2OHCHOHCH2OH++CHOCH2OHROHβ-D-葡萄糖苷过碘酸二元醛四氢硼钠二元醇稀酸室温苷元（O-苷）（氧化邻二醇）（还原）（稳定性差）（温和）OOHOHOHOHRIO4IO4-BH4-H+++123CH2OHCHOHCH2OHCHOHCH2OHR-R-CHOHCOOHβ-D-葡萄糖苷（C-苷）带醛基的苷元（二）酶水解：酶水解的特点及意义条件温和高度专属性：（水、30～40℃）ａ–苷酶——ａ–苷（麦芽糖酶水解ａ-葡萄糖苷键）β–苷酶——β–苷（苦杏仁酶水解β-葡萄糖苷键和其他六碳糖的β–苷键）获得真正苷元苷键构型（ａ、β）的判断（三）碱水解苷键的缩醛结构（苷键原子的负电性）对稀碱（OH-）稳定,故苷很少用碱水解，而酯苷、酚苷、烯醇苷、β–吸电子基团的苷类（苷键原子的正电性）易为碱水解。（四）乙酰解多糖苷醋酐+酸（浓硫酸、高氯酸、氯化锌）乙酰化单糖、乙酰化低聚糖选择性水解1,6-苷键1,4-苷键和1,3-苷键1,2-苷键依鉴定结果+裂解规律推断多糖苷中糖与糖之间的连接位置鉴定薄层色谱气相色谱第三节苷的提取分离提取：苷的存在状态苷与酶共存提取目的（原生苷、次生苷、苷元）原生苷（科研、生产）溶解性差异酶解次生苷、苷元（生产）提取原生苷提取次生苷、苷元设法抑制酶的活性（加热、拌碳酸钙、醇）避免与酸、碱接触极性溶剂（甲醇、乙醇、沸水）提取利用酶的活性（加水、30～40℃、24～48ｈ）加酸水解或碱水解、预发酵等有机溶剂（醇、苯、氯仿、石油醚）提取提取液浓缩浓缩液（含大量极性杂质）溶剂法（溶剂沉淀-水液加丙酮或乙醚；溶剂萃取法-乙酸乙酯、正丁醇）大孔树脂法（先水洗-无机盐、糖、肽类，不同浓度的乙醇洗苷类）分离：色谱方法（为主）反相硅胶色谱：Rp-18、Rp-8（极性成分适用）；水-甲醇或水-乙腈为流动相葡聚糖凝胶色谱：SephedexLH-20(有机相适用)不同浓度的乙醇为洗脱剂各种单体成分第四节苷的检识一．化学检识苷水解糖+苷元（鉴别特点和意义）菲林试剂阴性（-）阳性（+）（-）还原糖特有多伦试剂阴性（-）阳性（+）（-）还原糖特有Molish反应阳性（+）阳性（+）（-）苷与苷元的鉴别（ａ-萘酚、浓硫酸）二．色谱检识1．薄层色谱（分配原理）硅胶正相色谱硅胶反相色谱固定相硅胶表面吸附的水Rp-18、Rp-8展开剂正丁醇-乙酸-水（4：1：5，上层）氯仿-甲醇氯仿-甲醇-水（65：35：10，下层）甲醇-水（三元系统）（二元系统）适用范围大多数苷（极性偏大）极性较小的苷固定相水展开剂正丁醇-乙酸-水（4：5：1，上层）正丁醇-乙醇-水（4：2：1）水饱和的苯酚显色剂苯胺-邻苯二甲酸试剂，间苯二酚-盐酸试剂（薄层、纸层均可）茴香醛-硫酸、间苯二酚-硫酸、ａ-萘酚-硫酸（仅薄层适宜）（主要针对苷中糖及糖的显色，针对苷元的显色见各章节）2．纸色谱（分配原理）第五节苷类的结构研究苷类结构研究的一般程序：1.物理常数的测定。Mp.[ａ]等。2.分子式的测定——质谱分析法（广泛采用）电子轰击质谱（EI-MS）：不易获得分子离子峰（极性大）化学电离质谱（CI-MS）场解吸质谱（FD-MS）：常用快原子轰击质谱（FAB-MS）：常用高分辨快原子轰击质谱（HR-FAB-MS）：能直接测出分子式3.组成苷的苷元、糖的鉴定（1）苷元的结构鉴定（见各章节）（2）糖的种类鉴定纸色谱（PC）：分配原理，BAW系统，与对照品共色谱鉴定薄层色谱（TLC）：硅胶（硼酸溶液或无机盐溶液制-增加上样量）气相色谱（GLC）：水解、制备TMS衍生物（具挥发性），用对照品tR鉴定超导FT-NMR光谱:苷中各糖的不同质子的δ、J与标准糖数据进行比较鉴定苷中各糖的不同碳原子的δ与标准糖数据进行比较鉴定（3）糖的数目的测定●光密度扫描法测定各糖斑点含量，计算各糖分子比，推算组成苷的糖的数目●质谱法测定苷及苷元的分子离子峰（分子量），计算其差值，求出糖的数目●1H-NMR谱:端基质子的信号（δ大-处于低场）数目●全乙酰化或全甲基化物乙酰氧基、甲氧基信号（δ、J）的数目●13C-NMR谱:端基碳原子信号（δ90～112ppm）的数目●苷分子总碳信号数目减去苷元的碳信号数目,推算糖的数目4.苷元与糖、糖与糖之间连接位置的测定（1）苷元与糖之间连接位置的测定13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与苷元的碳谱相比较即可鉴别醇羟基苷化，苷元ａ-碳向低场位移（δ+4～10ppm），β-碳向高场位移（-0.9～-4.6ppm）酚羟基苷化,苷元ａ-碳向高场位移，β-碳向低场位移化学方法:将苷的全甲基化物进行甲醇解，鉴定（与对照品共色谱）未全甲醚化的单糖，游离羟基所在位置即糖与糖之间的连接位置。13C-NMR谱法：利用苷化位移规律，将苷与相应单糖的碳谱数据相比较即可鉴别。糖与糖相连，内侧糖连接糖的碳原子移向低场（δ4～7ppm）相邻碳原子移向高场（δ-1～-4ppm）（2）糖与糖之间连接位置的测定5.糖与糖之间连接顺序的确定苷缓和酸水解、酶解乙酰解全甲基化甲醇解部分苷键断裂的裂解产物推断分析波谱分析法质谱（MS）法:主要利用质谱中归属于有关糖基的碎片离子峰或各种分子离子脱糖基的碎片离子峰，可对糖的连接顺序作出判断。EI-MS(需作成全甲基化、乙酰化或三甲基硅醚化物)常见各单糖及双糖的全乙酰化物、TMS衍生物碎片离子峰见书.FD-MS或FAB-MS：常出现各种脱去不同程度糖基的碎片离子峰。核磁共振（NMR）法：13C-NMR谱碳原子的自旋-弛豫时间（T1）的大小推断。NT1随糖链距离的增加而增大6.苷键构型的确定（1）利用酶水解法——(酶的专属性)（2）利用开勒（Klyne）经验公式进行计算Δ[M]D=[M]D苷-[M]D苷元与各糖的一对甲苷（ａ-、β-）的分子比旋度相比较，与ａ-甲苷接近，则该苷键构型为ａ-构型与β-甲苷接近，则该苷键构型为β-构型利用核磁共振（NMR）确定苷键构型13C-NMR谱：利用端基碳原子的化学位移判断苷键构型：除D-甘露糖、L-鼠李糖外，绝大多数单糖甲苷，其ａ-型与β-型的化学位移相差4ppm.利用端基碳原子与端基质子的偶合常数判断苷键构型：ａ-甲苷JC1-H1≈170Hzβ-甲苷JC1-H1≈160HzΔδ10ppm1H-NMR谱：利用端基质子偶合常数的大小判断苷键构型依据相邻碳原子上质子偶合常数的大小与二者之间的立体夹角有关H-2ˊ为ａ键的糖（葡萄糖、木糖、半乳糖）H-2ˊ为e键的糖（鼠李糖、甘露糖）ａ-苷键β-苷键ａ-苷键β-苷键J1ˊ2=2～3.5HzJ1ˊ2ˊ=6～9HzJ1ˊ2ˊ=2HzJ1ˊ2ˊ2Hz(Jae、Ф60O)（Jaa、180）（Jee、60）（Jae、60O）J1ˊ2不相等J1ˊ2相等意义可以用于构型的判断不能用于构型的判断OHHHHHOHOHOHORCH2OH2'1'OHHHHOROHOHOHHCH2OH1'2'2'1'