电化学发光原理简介

电化学发光免疫分析技术简介演讲人：赵志德演讲时间：2010-3-18标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点内容标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点内容免疫测定的发展和应用免疫测定免疫浊度测定（µg-ng）标记免疫测定（ng-pg）放射免疫测定法酶免疫测定法荧光免疫测定法化学发光免疫测定法电化学发光免疫测定法免疫透射浊度测定法免疫胶乳浊度测定法免疫速率散射浊度测定法电化学发光1960’S1970~80’S2000’S放射免疫酶免荧光免疫化学发光标记免疫技术的发展标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点内容电化学发光免疫分析(ECLIA)－Eletro-chemiluminescenceimmunoassay什么是电化学发光免疫分析(ECLIA)？™ECL是一种在电极表面由电化学引发的特异性化学发光反应，是电化学和化学发光两个过程的完美结合™电化学发光免疫测定是电化学发光（ECL）和免疫测定相结合的产物，是目前非常先进的标记免疫测定技术。ELECTROCHEMILUMINESCENCEIMMUNOASSAY磁性微粒子亲和链霉素生物素钌标记物•Paramagneticmicroparticle-SB-AgAbcomplexlabelledwith[Ru(bpy)3+]2+•反应时间:18分钟专利的电化学发光检测技术免疫复合物电化学发光技术主要技术•三联吡啶钌标记技术•链霉亲和素－生物素技术•磁性微粒子技术•电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术钌复合物标记•三联吡叮钌复合物[Ru(bp)3+]2+标记；•水溶性小分子，免疫损伤小；•结构稳定，受干扰影响小；•与三丙胺（发光电子供体）共同参与氧化还原反应；•应用广泛（激素，核酸等）三联吡啶钌N羟基琥珀酰胺(NHS)酯夹心法捕获法核酸检测竞争法磁性微粒子亲和素-生物素抗原抗体探针钌标记物电化学发光具有广泛的检测空间电化学发光技术主要技术•三联吡啶钌标记技术•链霉亲和素－生物素技术•磁性微粒子技术•电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术共价配合物•生物素－链霉亲和素耦联体系•1分子亲和素＋4分子生物素•结合力强，特异性高•提高检测灵敏度电化学发光技术主要技术•三联吡啶钌标记技术•链霉亲和素－生物素技术•磁性微粒子技术•电启动的化学发光反应专利的电化学发光检测技术磁性颗粒载体•直径仅2.8um,体积小，悬浮于液体中，构成均一，稳定的类均相试剂•凹凸不平，增强包被效率•磁性吸引，易于AgAb复合物的结合分离•反应前仪器自动混匀电化学发光技术主要技术•三联吡啶钌标记技术•链霉亲和素－生物素技术•磁性微粒子技术•电启动的化学发光反应电极表面的电化学发光反应电化学发光信号的检测－稳定的检测窗口电化学发光免疫反应全过程磁性微粒子亲和链霉素生物素钌标记物电化学发光免疫反应过程－1.反应杯的标记免疫反应ElecsysHIVCombi图解第四代抗原抗体联合检测单克隆HIV抗体检测P24抗原使用大量的重组抗原gp41/gp36和RT来检测IgGandIgM抗体光电倍增管磁铁工作电极电极电极清洗液电化学发光免疫反应过程－2.测量池中的ECL反应电极电极工作电极磁铁TPATPATPATPA光电倍增管电化学发光免疫反应过程－2.测量池中的ECL反应电化学发光免疫反应过程－3.电极表面的电化学发光反应标记免疫的发展简介电化学发光技术原理电化学发光技术特点内容•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点•试剂稳定性－货架期18个月，开封后3个月•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点检测范围宽，减少稀释高灵敏度可用于感染的早期检测ElecsysHBsAg第四代HIV同时检测HIVP24抗原和抗HIV抗体的试剂缩短窗口期,提高检测安全性•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点Elecsys®Anti-HCV献血员中的特异性:99.71%COIElecsys®HIVcombi献血员中的特异性:99.74%Elecsys®HIVcombi临床特异性优异（常规标本）特异性达到99.63%Elecsys®Anti-HCV对于各种基因型的检出Elecsys®HIVcombi检测HIV变异识别所有基因型和变异株•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点丰富的检测菜单自身免疫Anti－CCP脓毒血症IL－6BRAHMSPCT先兆子痫风险评估sFLT1PIGF传染性疾病Anti-HAVAnti-HAVIgMAnti-HBcAnti-HBcIgMAnti-HbeAnti-HBsHBeAgHBsAgHBsAgconfirmatoryAnti-HCVHIVAntigenHIVCombiHIVAgconfirmatoryRubellaIgG/IgMToxoIgG/IgMCMVIgG/IgM心肌标志物CK-MBDigoxinDigitoxinMyoglobinNT-proBNPTroponinT骨标志物ß-Crosslaps25-(OH)Vit.D3IntactPTHPTHSTATN-MIDOsteocalcinTotal-P1NP肿瘤标志物AFPCA125IICA15-3CA19-9CA72-4CEACYFRA21-1FreePSANSES-100TotalPSA其它IgE激素ACTHC-PeptideCortisolDHEA-SEstradiolFSHHCG+ßInsulinLHProgesteroneProlactinSHBGTestoterone孕早期唐氏筛查Freeß-HCGPAPP-A甲状腺功能Anti-TGAnti-TPOAnti-TSHRFT3FT4T3T4T-UptakeTGTSH贫血FerritinVitaminB12FolateRBCFolate•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点二级校准品一级校准品工作校准品商业校准品参考方法参考测量步骤厂商选择性的测量步骤厂商标准测量步骤用户常规测量步骤标本ResultdefinitionofSI-unituc(y)Uncertainty准确可靠的检测结果：可溯源性溯源性•溯源性•标准化•（standardization)•检测值可靠性试剂、分析仪和定标品形成一个密不可分的完整系统－为得到具有可靠保证的实验室结果准确可靠的检测结果：可溯源性•试剂稳定•测量范围宽，灵敏度高•特异性优异•检测菜单丰富•准确性好，精密度高•操作简便电化学发光技术特点y=P1–P41+(x/P2)P3+P4信息参数•测试数据•应用参数•定标数据•质控数据•稳定性数据–试剂–定标Reagentidentification2点定标12点的全点定标－生产厂使用者进行两点定标日常工作不需要定标检测时间：9/18分钟电化学发光系统定标方式－简便、准确、节省电化学发光技术主要技术总结•三联吡啶钌标记技术1.循环使用，不会被消耗，电极表面的氧化还原反应循环进行，测定信号无限循环放大，检测灵敏度大大提高2.其盐是很稳定的水溶性化合物，试剂的稳定性好，效期长3.N羟基琥珀酰胺（NHS）酯能与蛋白质赖氨酸的ε-氨基或核酸上的氨基形成稳定的酰胺键，应用广泛，宽广的检测菜单4.惰性元素，非放射性元素，稳定5.[Ru(bpy)32+]和TPA，无电压的情况非常稳定，确保反应结果的准确性•链霉亲和素－生物素技术1.特异性强且结合紧密，灵敏度高2.一分子SA可与四分子B相结合，增大了抗体结合量，灵敏度高电化学发光技术主要技术总结•磁性微粒子技术1.反应面积大，结合量增大。2.反应在近乎液相中进行，信号均匀精确3.分离方便迅速，无背景干扰•电启动的化学发光反应1.实现了结合相和游离相的完全自动化分离2.彻底清洗，反应易于控制谢谢！