营养学实验

营养学实验指导何计国戴蕴青中国农业大学食品科学与营养工程学院2006年5月修订自编教材实验一体格测量原理：身体的生长发育和正常体形的维持不但受遗传因素的影响，更重要的是受营养因素的影响，所以常常把身长、体重、以及体形方面的测量参数用作评价营养状况的综合观察指标。一．测量指标1．体重2．身长3．胸围4．上臂围、上臂肌围5．皮褶厚度等。上述指标中以身高和体重最重要，它综合反映了蛋白质，热能等心摄入利用和贮备情况反映了机体、肌肉、内脏的发育和潜在能力。二．测量方法1、体重：被测者在测量之前1小时内禁食，排空尿液粪便。测量时脱去衣服、帽子和鞋袜，只着背心（或短袖衫）和短裤，安定地站（坐或卧）于秤盘中央。读数以kg为单位，记录至小数点后两位。2、身高：测量身高应当固定时间。一般在上年10时左右，此时身长为全日的中间值。3、胸围：成人取立位，两手自然平放或下垂。取平静呼吸时的中间数读至0.1厘米。4、上臂围：左臂自然下垂，用软尺先测出上臂中点的位置，然后测上臂中点的周长。5、皮脂厚度：测量一定部位的皮褶厚度可以表示或计算体内脂肪量。脂肪的变动与热能供给十分密切。（1）三头肌部：左上臂背侧中点上约2厘米处。测量者立于被测者的后方，使被测者上肢自然下垂，测定者以左手姆指及食指将皮肤连同皮下组织捏起、然后从姆指下测量1厘米左右之皮脂厚度。（2）肩胛下部：左肩胛骨下角下方约2厘米处。上肢自然下垂，与水平成45°角测量。（3）腹部：用左手姆指及食指将距脐左方1厘米处的皮肤连同皮下组织与正中线平行捏起呈皱褶，不要用力加压，在约距姆指1厘米处的皮肤皱褶根部，用皮褶计测量。一般要求在一个部位测定3次、取平均值。三、评价可以根据体测量评价参考数值所列的正常参考值进行评价。除此之外，还可以用测量的数据进行必要的计算，然后进行评价。（一）标准体重标准体重=身长（厘米）–105。（二）体质指数（BMI）体重（公斤）BMI（体质指数）=———————身长（米）2体质指数也是较常用的人体测量指标，以体质量（kg）/身高（m）2表示。判断标准是：消瘦正常超重肥胖男＜2020~2525~28＞28女＜1919~2424~27＞27（三）皮褶厚度皮褶厚度用来表示皮下脂肪的厚度，为防止误差应选择3个或3个以上测量的部位，多选择肩胛下、肱三头肌、脐旁3个测量点。以平均值作判断标准：消瘦正常肥胖男＜10mm10~40mm＞40mm女＜20mm20~50mm＞50mm实验二血红蛋白的测定（氰化法）【原理】血红蛋白在铁氰化钾和氰化钾的作用下，生成极为稳定的氰化高铁血红蛋白（红色），其颜色深浅与血红蛋白的含量成正比。氰化高铁血红蛋白在540nm波长下，毫克分子消光系数为44，据此，用分光光度法测其光密度，运用消光系数作血红蛋白的定量测定。其化学反应式如下：血红蛋白铁氰化钾高铁血红蛋白氰化钾氰化高铁血红蛋白【仪器】1．10μl血色素吸管（或定量毛细管）。2．5ml或10ml带盖试管。3．721或72型分光光度计。【试剂】称取碳酸氢钠140mg、铁氰化钾200mg、氰化钾50mg，用蒸馏水溶解并稀释到1000ml。贮存于棕色试剂瓶内，在4℃冰箱保存，至少可稳定数月到一年。【操作步骤】1．吸取2.5ml试剂于5ml带盖试管中，加10μl入血液，混匀后放置15分钟。2．选用0.5cm光径比色杯，于540nm波长下，以试剂调节仪器零点，测定各样品管之光密度，将所测得之光密度乘以73.6即为血红蛋白之含量（g/100ml）。计算公式如下：Ct=待测之血红蛋白含量（g%）D540HiCN=在540nm波长下测得之氰化高铁血红蛋白之光密度251=测定时血液的稀释倍数（血10μl加入试剂2.5ml中）44=氰化高铁血红蛋白的毫克分子消光系数。0.5=比色杯光径64458=血红蛋白的分子量10000=将mg/L换算成g/100ml的数字【评价】Ct==D540HiCN×73.644×0.510000×64458D540HiCN×251年龄缺乏（g/100ml）正常（g/100ml）6月~6岁＜11.0＞11.06~14岁＜12.0＞12.0成年男子＜13.0＞13.0成年女子＜12.0＞12.0【附】1．本法为国际血液学标准化委员会（ICSH）所推荐，具有操作简便、不需要标准、结果准确可靠等优点。2．应用本法进行血红蛋白的测定，所用分光光度计的波长必需事先经过校正。3．实验条件改变，如更换了光电池或灯炮、电压不稳、试剂换了批号等等均会引起光密度的改变。为了获得正确结果，可用标准液校正或采用色泽近似的无机盐人工永久标准液来核对，这也是一种行之有效的方法。4．如以上二点难以实现，宜采用标准曲线法或直接比较法进行。5．血样放入试剂后所形成的氰化高铁血红蛋白极为稳定，经试验，在4℃冰箱存放70天之久前后结果仍能保持一致。为此，可将各地采集的样品在加入到试剂后，在2~10℃环境中，集中到中心实验室进行比色测定。6．有材料证实，取血部位对测定结果有明显影响。耳垂血的血红蛋白含水量量高于指尖血。7．血色素吸管必须保持洁净与干燥，每做一份后应用水洗净后，用无水乙醇洗，最后用乙醚洗。否则取量不准，影响结果。实验三尿中还原型抗坏血酸测定【原理】抗坏血酸（维生素C）具有—C=C—基，有还原性。还原型抗坏血酸能还OHOH原染料2，6-二氯酚靛酚，该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样二氯酚靛酚被抗坏血酸还原的反应如下：2，6-二氯酚靛酚抗坏血酸2，6-二氯二对酚胺（酸液中呈粉红色）（还原）（无色）【仪器】1．微量滴定管（1ml或2ml）。2．50ml三角瓶。【试剂】1．1%草酸溶液：称取草酸10g，以去离子水溶解并稀释到1000ml。2．0．02%2，6-二氯酚靛酚溶液：溶解2，6-二氯酚靛酚50mg于含有52mg碳酸氢钠的200ml热水中，冷却后稀释到250ml，过滤后装在棕色瓶内，储存冰箱中，每星期至少标定一次。标定方法如下：取5ml标准抗坏血酸溶液，加1%草酸5ml，用上液滴定之。至粉红色能存在15秒钟为终点。所用上液的体积相当于0.1mg抗坏血酸。由此求出每毫升溶液相当于抗坏血酸多少毫克。3．标准抗坏血酸溶液（20μg/ml）：溶解20mg抗坏血酸结晶于1%草酸中，稀释到100ml，再取其中5ml稀释到50ml，取出5ml迅速用染料标定。【操作方法】1．用吸管吸取尿液2～5ml，放入50ml三角瓶内，加1%草酸5ml。2．立即用标定过的2，6-二氯酚靛酚染料溶液滴定之，直至淡粉红色能存在15秒钟为止。记录染料的用量。【计算】尿中还原型抗坏血酸排出量（mg）＝染料用量×每ml染料相当于抗坏血酸mg数滴定时尿液用量×总尿量【评价】不足正常充裕成人负荷尿4小时＜3mg3~10mg＞10mg（口服500mg抗坏血酸）实验三尿中还原型抗坏血酸测定【原理】抗坏血酸（维生素C）具有—C=C—基，有还原性。还原型抗坏血酸能还OHOH原染料2，6-二氯酚靛酚，该染料在酸性溶液中呈红色，被还原后红色失去。还原型抗坏血酸还原染料后，本身被氧化成脱氢型抗坏血酸。一定量的尿样二氯酚靛酚被抗坏血酸还原的反应如下：2，6-二氯酚靛酚抗坏血酸2，6-二氯二对酚胺（酸液中呈粉红色）（还原）（无色）【仪器】1．微量滴定管。2．50ml三角瓶、量筒、移液管等。【试剂】1．2%草酸溶液：称取草酸20g，以去离子水溶解并稀释到1000ml。2．0．02%2，6-二氯酚靛酚溶液：溶解2，6-二氯酚靛酚50mg于含有52mg碳酸氢钠的200ml热水中，冷却后稀释到250ml，过滤后装在棕色瓶内，储存冰箱中，每星期至少标定一次。标定方法如下：取5ml标准抗坏血酸溶液，加1%草酸5ml，用上液滴定之。至粉红色能存在15秒钟为终点。所用上液的体积相当于0.1mg抗坏血酸。由此求出每毫升溶液相当于抗坏血酸多少毫克。3．标准抗坏血酸溶液（20μg/ml）：溶解20mg抗坏血酸结晶于1%草酸中，稀释到100ml，再取其中5ml稀释到50ml，取出5ml迅速用染料标定。【操作方法】1．服维生素C片5片（相当于500mg），收集服药后4小时排出的总尿液。2．用量筒量出总尿量，准确吸取尿液2～5ml，放入50ml三角瓶内，加2%草酸5ml。3．立即用标定过的2，6-二氯酚靛酚染料溶液滴定，直至淡粉红色保存15秒钟不褪。记录染料的用量。【计算】染料用量×每ml染料相当于抗坏血酸的mg数尿中抗坏血酸排出量（mg）＝——————————————————————×总尿量（ml）滴定时尿液用量（ml）【评价】缺乏不足正常充裕成人负荷尿4小时（口服500mg抗坏血酸）＜1mg＜3mg3~10mg＞10mg【思考题】1．如何根据尿负荷的评价标准判断体内抗坏血酸的营养水平？2．其他维生素能否用此方法来评价营养状况？实验四膳食调查一、实验目的膳食调查的目的是要了解不同地区、不同生活条件下某人群或某个人的饮食习惯、日构成的优缺点，了解存在的主要问题，研究其对于人民健康以及常所吃的食物种类和数量，再根据食物成分表计算出每人每日各种营养素的平均摄入量，根据目前营养学知识和体格测量、临床体征检查和营养状况的实验室检验等结果，评定其膳食儿童的生长发育有什么影响，从而改善饮食的调配，并为国家食物的计划生产和改进人民营养状况提供科学依据。二、膳食调查的内容膳食调查主要包括：①调查期间每人每日所吃的食物品种、数量，这是膳食调查最基本的资料；②了解烹调加工方法对维生素保存的影响等；③注意饮食制度、餐次分配是否合理；④过去膳食情况、饮食习惯等，以及调查对象生理状况，是否有慢性病影响等。三、膳食调查的方法根据具体情况可采用记帐法，称重法、询问法、膳食史法及24小时回忆法等方法。营养工作者必须选择一个能正确反映个体或人群当时食物摄入量的方法，必要时可并用两种方法。(1)记帐法适用于有详细帐目集体单位的膳食调查。根据该单位每日购买食物的发票和帐目，出勤人数的记录，得到在一定期限内的各种食物消耗总量和就餐者的人日数（一个人一天吃早午晚三餐时算一个人日），从而计算出平均每人每日的食物消耗量。此方法在帐目精确和每餐用膳人数统计确实的情况下相当准确，并可调查较长时期的膳食状况，适用于全年四个季度的调查，调查的手续较简便，所费的人力少，且易于为膳食管理人员掌握，使调查单位能定期的自行调查计算，作为改进膳食质量的参考。(2)称重法（或称量法）此法可以应用于集体食堂、家庭以及个人的膳食调查。调查期间调查对象在食堂或家庭以外吃的零食或添加的菜等，均需根据不同的调查对象采用不同方法以取得这部分资料。该方法较为细仔精确，可调查出每日膳食的变动情况和三餐食物的分配情况。虽然结果准确，但所费人力大，不适合于大规模的个体调查工作（如肿瘤流行病学调查）。(3)询问法（Dietaryinquirymethods）在客观条件限制不能进行记帐法或称重法时，应用询问法对个体的食物消耗量也能得到初步的了解。如对一般门诊病人或孕妇可询问最近三日或一周内每天所吃食物的种类及重量加以估计。同时了解患者的膳食史，饮食习惯及有无忌食，偏食等情况，此种简单的方法是为了解在特定时期内所吃的餐数，仅提供食物摄入量的频数，显然对于流行病学前瞻性和回顾性调查是必需的，其目的是将大量被调查个体按各种食物组分的消费量分成高和低两档，关键在于此种分类是否可行、可靠性如何。(4)膳食史法本法为Bruke所创立的，鉴于人体生长发育受到长期饮食习惯的影响，人们认为采用膳食史法可获得调查对象的通常的膳食构成（模式Dietarypattern）。最原始的方法有三个组成部分：A.记录某人通常一餐吃的食品；B.饮食习惯的了解，是采用一张预先记录好的详细食物清单；C.要求调查对象保存3天的食物记录，从而估计出常吃食物之量。在膳食与生癌关系的研究中，膳食史法经过修正后，已得到广泛的应用。主要是利用直观教材定量食物的摄入量或者记录家庭用的衡量器皿之数量，再藉食物成分表换算成营养素摄入量。此方法可应用于大规模的流行病学个