分子生物学题库3

实用标准文档大全七、问答题1．阐述原核生物的转录终止。(1)转录终止的两种主要的机制是什么?(2)描述翻译怎样能调节转录终止。(3)为什么在细菌转录终止中很少涉及到Pho因子?(4)怎样能阻止转录的终止?2．复制DNA的聚合酶(DNA依赖的DNA聚合酶)也有校正功能，解释为什么RNA聚合酶没有这种功能。3．讨论原核生物基因表达的聚合作用反应定向的重要性。假如核糖体从3’端到5’端读它的模板mRNA的话，那么将会发生什么情况?4．概括细菌细胞内的转录过程。5.概括典型原核生物启动子的结构和功能，并解释什么是保守序列。6．转录如何在基因或基因组末端终止?7．(1)如何区分由启动子起始转录的RNA片段与5’端被加工过的RNA片段;(2)证明多肽是从氨基端到羧基端方向合成的。8．比较E．colirRNA和tRNA的转录和加工。9．区别可诱导和可阻遏的基因调控。10．衰减作用如何调控E.coli中色氨酸操纵子的表达?11．比较并指出细菌和真核生物RNA翻译机理的异同。12．什么是摇摆假说?13．指出E.coli和真核生物翻译起始的不同。14．S．NCohen于1973年构建了三个重组体，pSC102，pSC105，pSC109请说明这三个重组体是如何获得的?各说明了什么?15．基因克隆是如何使含有单个基因的DNA片段得到纯化的?16．什么是细菌的限制—修饰系统(restriction-modificatonsystem,R-Msystem)17．细菌的限制—修饰系统有什么意义?18．说明限制性内切核酸酶的命名原则要点。19．Ⅰ类限制酶具有哪些特点?在基因工程中有什么作用?20．Ⅲ类限制酶有哪些特点?21．何谓限制性内切核酸酶的切割频率?22．什么是限制性内切核酸酶的星号活性?受哪些因素影响?23．双酶消化法(doubledigests)绘制限制性内切核酸酶酶谱的原理。24．什么是DNA多态性(DNApolymorphism)?25．限制性片段长度多态性(restrictionfragmentlengthpolymorphism，RFLP)。26．计算下列三种酶各自在某染色体DNA序列上识别位点间的平均距离：AluⅠ：5’AGCT3”EcoRⅠ:5’GAATTC3’3TCGA5’3’CTTAGG5’AcyⅠ:5’GPuCGPyC3’3’CPyGCPu5’(注：Py=任何一种嘧啶；Pu=任何一种嘌呤)实用标准文档大全27．在细菌质粒pBP1的四环素抗性基因tetR的中间有一个HindⅡ的切点。用HindⅢ切割果蝇基因组DNA，以pBP1为载体构建基因组文库。分子杂交证明克隆15带有果蝇的目的基因。用HindⅢ和EcoRV对克隆15进行了酶切分析，电泳结果如图15.1(用酶切的pBP1质粒DNA作对照)，旁边标出了片段的大小。(1)绘制含有插入片段和不含插入片段时的pBPl的限制性图谱，并标明四环素抗性基因的位置—;(2)如果用克隆在另一个与pBP1完全不同源载体上的四环素抗性基因作为探针，进行Southern印迹杂交，预测上述电泳图会出现什么样的杂交带?(3)如果用克隆15的果蝇DNA片段作为探针进行Southem印迹杂交，放射自显影的结果又是如何?28．为什么大多数内切酶被称为“限制”酶。29．据Science杂志报道:一种重要的遗传疾病可由导致DNA中碱基替换的诱变剂在体外进行人工诱导。设计一种快速用以鉴定疾病基因型的检测方法。30．为了绘制长为3.0kbBamHⅠ限制性片段的限制性图谱，分别用EcoRⅠ、HpaⅡEcoRⅠ十HpaⅡ消化这一片段的三个样品，然后通过凝胶电泳分离DNA片段，溴化乙锭染色后观察DNA带型(图15.2)。请根据这些结果，绘制一个限制性图谱，要标明E.coRⅠ和HpaⅡ识别位点间的相对位置，以及它们之间的距离(kb)。31．1967年，有5个实验室几乎同时独立发现了DNA连接酶，每个实验室的实验有什么特点?32．简述DNA和RNA连接酶的催化反应机制。33.影响DNA连接酶催化连接反应的因素有哪些?34．什么是Klenow酶?有哪些活性?在基因工程中有什么作用?35.如何利用T4DNA聚合酶制备3’隐含末端或双链平末端?图15.1酶切电泳图谱1～2：HindⅢ切割；3～4：ＥcoRV切割；5～6：HindⅢ+ＥcoRV；1、3、5是质粒DNA：2、4、6是15号克隆。图15.2用EcoRⅠ、HpaⅡ单独切割及用这两种酶混合切割30kbBamHⅠ片段产生的DNA带实用标准文档大全36.如何利用T4DNA聚合酶进行双链DNA的3’末端标记?37．如何利用T4DNA聚合酶制备平末端?38．反转录酶有两种类型，一是来源于禽类骨髓母细胞瘤病毒(AMY,aviammyeloblastosisvirus)，另一种来源于鼠类莫洛尼氏白血病毒(M—MLV，Moloneymurineleukemiavirus)，它们之间有什么不同?39．与E.coliRNA聚合酶相比，细菌噬菌体的SP6RNA聚合酶、T7RNA聚合酶和T3RNA聚合酶具有哪些优越性?40．什么是多核苷酸激酶的向前反应和交换反应?41．细菌碱性磷酸酯酶和小牛肠碱性磷酸酯酶有什么不同?在基因工程中有什么用途?42．λ外切核酸酶(lambdaexonuclease)基本活性是什么?在基因工程中有什么应用?43．Mn2+、Mg2+对DNaseⅠ(deoxyribonucleaseⅠ)的活性有什么影响?DNaseⅠ在基因工程中有什么作用?44．比较S1-Mapping和Footprinting在原理上、方法上、应用上有何不同?45．什么是复制子(replicon)?46．什么是质粒的相容性?什么是不相容群?机制是什么?47．什么是质粒的带动转移?48．说明变性定位法和限制性内切核酸酶定位法研究质粒复制起点的原理。49．Co1El衍生质粒拷贝数调节机理的机理是什么?50．R1质粒拷贝数受到怎样的调节控制?51．质粒如何维持在细胞中的稳定?52.引起质粒不相容性的主要原因是什么?53．由于基因工程是人为改变遗传信息的操作，因此必须注意被操作基因的安全，进行严格的监控，质粒载体的安全性是十分重要的。请问质粒载体的安全条件包括哪几个方面?54．请指出质粒pSC101的一些生物学特性(包括结构和遗传)及在基因工程中的作用。55.自然界中具备理想条件的质粒载体为数不多，即使是Co1E1和pSC101这两个自然质粒也不尽人意，通常需要进行改造，请问质粒改造包括哪些基本内容?56.质粒改造的发展过程如何?57.在质粒中如何增减酶切点?58．有人用限制性内切核酸酶EcoRI分别切割松弛型质粒Co1E1和严紧型质粒pSC101(各有一个切点)，然后重组连接形成一个杂种质粒pSC134，请推测这种质粒有什么特性和用途。59．现分离了4种新的大肠杆菌Hfr菌株，通过中断接合实验，针对每一菌株确定了高频转移的标记基因和它们进入F—受体的时间分别为：标记基因和第一次进入的时间Hfr1Hfr2Hfr3Hfr4man13minmal29lys16pur6trp6met14arg9trp3his23thr4mal2thr31pur3uvr20his32lac23gal14(gal、lac、mal、man不能发酵半乳糖、乳糖、麦芽糖和甘露糖；arg、his、met、trp生长需要精实用标准文档大全氨酸、组氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、嘌呤和色氨酸；uvr：紫外线敏感)。任何没有给出的标记都是不能高频转移的。上述数据能够说明大肠杆菌的染色体是环状的吗?以分钟表示图距构建一个大肠杆菌染色体的连锁图。假定整个染色体用了100分钟转移，而且苏氨酸被认为位于0分钟或10O分钟处。60．YAC克隆载体常出现哪些问题?61．为什么野生型的λ噬菌体DNA不宜作为基因工程载体?62．什么是蓝白斑筛选法?63．蓝白斑筛选法为什么也会有假阳性?64．什么是cⅠ筛选法?65．λ噬菌体载体具有哪些优点与不足?66．什么是M13的IG序列区?有何特点和功能?67．将野生型的M13改造成基因工程载体，首先是进行酶切位点的改造，请问M13中的EcoRⅠ最初是如何引入的?68．以置换型λ噬菌体作为载体进行克隆时，为什么说能够形成噬菌斑的就一定是重组体?69．M13系列载体具有哪些优缺点?70．粘粒载体具有哪些特点与不足?71．辅助噬菌体DNA和相应的噬菌粒是如何协同工作的?72.克隆的DNA在质量上有什么要求?73．为什么从细胞中分离DNA时往往会断裂?74．为什么苯酚要重蒸饱和后才能用于DNA的分离?75．为什么氧化变色的酚不能直接用于DNA的分离?应如何处置?76.在DNA分离过程中，酚通常与氯仿联合使用，即使不联合使用也要在苯酚抽提后用氯仿再抽提一次，为什么?77.说明溴化乙锭—氯化钩密度梯度离心(ethidiumbromide-caesiumchloridegradientcentrifugation)纯化DNA的原理。78.采用什么措施保证DNA化学合成的定时性和专一性?79．何谓简并引物(degenerateprimer)?80．简并引物设计的一般原则是什么?81．双脱氧法(dideoxynucleotidemethod)测序的基本原理是什么?82．在古生物学中，尚不知道恐龙是否是温血爬行动物，而不像今天的变温爬行动物。假如你得到一些恐龙的DNA，你如何通过PCR和基因克隆来检测恐龙是否是温血爬行动物?83．如果知道某一基因的功能及其相应的蛋白质的氨基酸序列组成，可以通过何种方法克隆该基因?84．何谓定位克隆(positionalcloning)?85．何谓染色体步移(chromosomewalking)?86．在染色体步移中，用哪些方法获得克隆的末端?87．何谓表型克隆(phenotypecloning)?88．什么是基因文库?89．什么是基因组文库(genomiclibrarY)?构建基因组文库，涉及哪些基本过程?它同遗传学上的基因库有什么不同?90．什么是cDNA文库(complementDNAlibraly)?同基因组文库有何差别?实用标准文档大全91．粘性末端连接法是最常用的连接方法，具有许多优点，但是也有一些不足，请指出这些不足之处，92．什么是同聚物加尾连接法(homopolymertailsjoining)?用何种方法加尾?具有哪些优缺点?93．何谓接头连接法(Iinkerligation)?94．什么是同裂酶?为什么说用同裂酶进行体外重组效率最高?95．如何使用甲基化酶对克隆DNA进行保护?有什么意义?96．何谓稀有酶?(举例说明)97．为了大量获得许多用于生化鉴定的产物，你想将拟南芥中的一个序列已知、编码单体酶蛋白的基因在单细胞微生物中表达，你如何确保最终能得到产物?98．若在进行DNA重叠群分析时，你发现在一个编码有价值但不稳定蛋白质的可读框之后，紧接着另一个可读框，它可在蛋白质的C末端加上一个稳定结构。举出至少两种获得被修饰蛋白产物的方法。99．某一质粒载体具有Tetr和Kanr的表型，在Kan抗性基因内有一BglⅠ的切点。现用BglⅠ切割该载体进行基因克隆，问：(1)转化后涂皿时应加什么样的抗生素?(2)培养后长出的菌落具有什么样的抗性基因型?(3)如何利用抗性变化筛选到含有插人片段的重组体?100．限制性内切核酸酶BamHⅠ和PstⅠ切割某一DNA序列，结果示于图20.1。图20.1BomHⅠ和PstⅠ识别序列处的切割，只显示识别位点的核苷酸序列(1)指出被切割DNA分子的5’端和3’端；(2)如果你将切割后的DNA同DNA聚合酶、4种dNTP在一起温育，这些DNA末端会有什么样的变化?(3)经过B中的反应后，你还能够用T4DNA连接酶将BamHⅠ末端连接起来吗?PstⅠ末端呢？（T4DNA连接酶能够连接平末端和黏性末端）(4)(3)中的连接后，能够重新形成BamHI位点吗？PstI位点呢？101．什么是遗传学检测法?102．以pBR322DNA作为载体，从四环素抗性基因区克隆外源DNA时，