EBV血清学诊断及临床应用(欧盟)

EBV感染血清学诊断及其临床应用疱疹病毒家族Epstein-BarrVirus(EBV)Cytomegalievirus(CMV)Varicella-ZosterVirus(VZV)HumanHerpesVirus(HHV-6,-7,-8)Herpessimplexvirus(HSV-1,HSV-2)HerpesVirusFamilyEBV（Epstein-BarrVirus）•一种常见的人疱疹病毒•结构特点：内核：缠绕DNA的核心蛋白中环：衣壳蛋白（二十面体）外环：包膜（上面有刺突）EBV相关疾病传染性单核细胞增多症(InfectiousMononucleosis,IM)•EBV原发感染急性发作的疾病•在少儿或青春期初次感染EBV，部分个体会出现IM病症•发病人群发达国家：15~25岁中国：学龄或学龄前少儿EBV相关疾病鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma)•发生于鼻咽粘膜的上皮性恶性肿瘤•具有明显的区域性和人种倾向性•东南亚国家常见癌症之一，发病率10~53/100,000人•中国南部发病率15~30/100,000传染性单核细胞增多症(InfectiousMononucleosis,IM)——EBV原发感染导致的疾病血涂片检测活化淋巴细胞敏感性及特异性较差嗜异性抗体检测多克隆B细胞活化特异性较差，易与其他感染发生交叉反应小于5岁儿童无法检测，不适于中国血清学检测抗EBV相关抗原抗体主流方法，保证敏感性和特异性聚合酶链反应（PCR）受病毒载量变化影响检出检测方法EBV抗原•主要关注的抗原类型VCA(CA):衣壳抗原EA：早期抗原EBNA：核抗原•主要关注的抗体类型IgGIgMantibodytiterAnti-EBVantibodies:Anti-EBV-CA(IgM)courseofdisease[weeks][months]infectionsymptomsantibodytiterAnti-EBVantibodies:Anti-EBV-CA(IgG)courseofdisease[weeks][months]symptomsantibodytiterAnti-EBVantibodies:Anti-EBV-EA(IgG)courseofdisease[weeks][months]symptomsantibodytiterAnti-EBVantibodies:Anti-EBNA(IgG)courseofdisease[weeks][months]symptomsantibodytiterAnti-EBVantibodies:EarlyandLatePhasecourseofdisease[weeks][months]earlyphaselatephasesymptomsAnti-EBVantibodies:AvidityantibodytiterAnti-EBVantibodies:EarlyphaseearlyphaseCA(IgM)CA(IgM+IgG)EA(IgG)CA(IgM)+CA(IgG,lowavidity)AntibodytiterAnti-EBVantibodies:LatephaselatephaseCA(IgG,highavidity)+EBNA(IgG)血清学检测的复杂性5%的EBV新近感染不产生anti-CA(IgM)Anti-CA(IgM)在少数病例中可以持续存在20-30%的新近感染不产生Anti-EA(IgG)Anti-EBNA(IgG)阴性，由于：-慢性活动性EBV感染-细胞免疫抑制亲合力检测的必要性•对临床明确确诊的58例传单患者进行EBV多种抗体检测，结果：Everythingispossible!结论：单纯依靠抗EBV-CA-IgM阳性来诊断传单，敏感性较低，结合EBV抗体谱和亲合力检测可提高诊断的敏感性临床检验杂志2005年第23卷第5期，谢正德等，抗体亲合力检测对诊断儿童EBV相关性传染性单核细胞增多症的意义推荐检测策略多个指标同时检测，综合判断CA-IgMCA-IgGEA-IgGNA-IgGCA-IgA国内诊断标准（需同时满足两个方面）临床症状发热，咽峡炎，颈淋巴结大，肝大，脾大中任3项原发性EBV感染的血清学证据（满足两项中任一项）1.抗EBV-CA-IgM和抗EBV-CA-IgG阳性，且抗EBV-NA-IgG阴性2.抗EBV-CA-IgM阴性，而抗EBV-CA-IgG阳性，且为低亲和力抗体诊断标准国内学者提出针对中国患者的诊断标准实用儿科临床杂志第二十二卷第二十二期，儿童EB病毒传染性单核细胞增多症临床特征及诊断标准，谢正德，首都医科大学二附属北京儿童医院欧蒙EBV产品系列完整的解决方案EUROIMMUN欧蒙EBV荧光产品FI2799-1FI2799-1xVirusserologyIIFTEBV荧光模式(1)EBV-CAIgGpositivereactionnegativereactionVirusserologyIIFTEBV荧光模式(2)EBV-CAIgMpositivereactionnegativereactionVirusserologyIIFTEBV荧光模式(3)EBV-EAIgGpositivereactionnegativereactionVirusserologyIIFTEBV荧光模式(4)EBNApositivereactionnegativereactionVirusserologyIIFTEBV亲合力检测样本温育(两次)清洗TestA样本缓冲液温育TestB尿素溶液温育清洗酶结合物温育清洗滴度改变TestATestB滴度相似TestATestB低亲合力抗体:Anti-EBV-CA+Buffer+Urea高亲合力抗体:Anti-EBV-CA+Buffer+UreaPatient1Patient2EBV抗体谱检测:示例EBV-CA(IgG)w/oureaEBV-CA(IgG)withureaEBV-CA(IgM)EBV-EA(IgG)EBNA(IgG)新近感染既往感染亲合力检测早期晚期或既往EBV抗体谱检测:示例EBV-CA(IgG)w/oureaEBV-CA(IgG)withureaEBV-CA(IgM)EBV-EA(IgG)EBNA(IgG)亲和力检测早期晚期或既往EBNA(IgG)阴性早期?EBV-CA(IgM)阴性晚期或既往?1.2.EBNA阴性是由于EBNA缺失?CA-IgM阴性是由于5%的新近感染不产生IgM?••亲合力检测低亲合力anti-EBV-CA(IgG)早期感染EBV抗体谱检测:示例EBV-CA(IgG)w/oureaEBV-CA(IgG)withureaEBV-CA(IgM)EBV-EA(IgG)EBNA(IgG)亲和力检测早期晚期或既往EBNA(IgG)阳性晚期或既往EBV-CA(IgM)阳性早期•••IgM-持续存在?亲合力检测高亲和力anti-EBV-CA(IgG)晚期或既往感染靶抗原抗体类型抗原及来源亲合力检测CAIgA/IgG/IgM感染EBV的人B细胞裂解物(IgM-天然gp125)提供EAIgA/IgG大肠杆菌表达的重组EA-D不提供NAIgG昆虫细胞表达的重组蛋白不提供欧蒙EBVELISA产品EI2791EI2795EI2793欧蒙EBV膜条产品：EUROLINEEBVProfile2早期早期或晚期晚期晚期•所有相关抗原包被在同一膜条•可提供IgG和IgM抗体检测•可实现全自动操作•可通过EUROLineScan软件进行数字化结果分析DN2790鼻咽癌(nasopharyngealcarcinoma)——与EBV有明确关联的肿瘤NPC病因遗传因素（家族与种族聚集现象）环境与饮食（甲醛接触、咸鱼与腌制食品）与EBV感染联系紧密（相关度100%）（所有NPC患者体液及血清中均存在EBV的DNA与高于正常滴度值的抗体。NPC诊断早期基本无症状，出现症状就医时基本已到晚期早期治疗，5年生存率可达90%以上。晚期治疗，不超过20%（癌转移）高发区人群中的例行筛查意义重大找到合适的早期诊断指标至关重要筛查手段•NPC临床诊断标准：组织活检•EBV血清学诊断的作用凸显优势：便于体检操作，技术成熟问题：如何选择标志性抗体VCA-IgA优势：•研究较早VCA-IgA优势：•验证充分2004年第三届中国肿瘤学术大会EBCA-IgA是目前唯一进行过大样本量普查研究的筛查指标VCA-IgA优势：•权威支持NEnglJMed.2001Dec27;345(26):1877-82.VCA-IgA优势：•高灵敏度JClinVirol.2007Dec;40(4):284-8.Epub2007Oct31EA-IgA优势：•研究较早，且验证充分IntJCancer.1976Jan15;17(1):1-7.•极高的特异性（接近100%）JClinVirol.2007Dec;40(4):284-8.Epub2007Oct31EA-IgA特点：•特异性高，敏感性一般JClinVirol.2007Dec;40(4):284-8.Epub2007Oct31NPC检测策略CAIgA•研究得较早•在中国唯一经过大样本量普查•临床症状前3年（平均）即可显阳性•灵敏度高•方案1：CA-IgA、EA-IgA同时检测，最大限度保证检出率与可靠性。•方案2：CA-IgA用于初筛，必要时采用EA-IgA用于验证。EAIgA•研究得较早•特异性极高•灵敏度一般靶抗原抗体类型抗原及来源CAIgA/IgG/IgM感染EBV的人B细胞裂解物(IgM-天然gp125)EAIgA/IgG/IgM大肠杆菌表达的重组EA-D靶抗原抗体类型抗原及来源CAIgA/IgG/IgM表达细胞EAIgA/IgG表达细胞CA+EAIgA/IgG表达细胞CA/EAFI2791-2•ELISA•IFT欧蒙解决方案EI2791EI2795欧蒙EBV产品线可实现一次检测多个指标-EBVSequenceIIFT-ELISAVCA,EBNA,EA-EUROLINEEBVProfile2Thanks&anyquestions