HE染色步骤

常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ）5-10min(2)二甲苯（Ⅱ）5-10min(3)95%乙醇（Ⅰ）1-3min（4）95%乙醇（Ⅱ）1-3min（5）80%乙醇1min（6）蒸馏水1min（7）苏木精液染色5-15min(8)流水稍洗去苏木精液1-3s(9)1%盐酸乙醇1-3s(10)稍水洗10-30s(11)促蓝液返蓝10-30s(12)流水冲洗10-15min（13）蒸馏水过洗1-2s(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸馏水稍洗1-2s(16)80%乙醇稍洗1-2s(17)95%乙醇（Ⅰ）3-5min(18)95%乙醇（Ⅱ）3-5min(19)无水乙醇5-10min(20)无水乙醇5-10min(21)二甲苯（Ⅰ）3-5min(22)二甲苯（Ⅱ）2-5min(23)二甲苯（Ⅲ）3-5min(24)中性树胶封固结果：细胞浆红色，细胞核蓝紫色。转：常规HE染色步骤（1）二甲苯（Ⅰ）5-10min(2)二甲苯（Ⅱ）5-10min(3)95%乙醇（Ⅰ）1-3min（4）95%乙醇（Ⅱ）1-3min（5）80%乙醇1min（6）蒸馏水1min（7）苏木精液染色5-15min(8)流水稍洗去苏木精液1-3s(9)1%盐酸乙醇1-3s(12)流水冲洗20-30min（13）蒸馏水过洗1-2s(14)0.5%曙红液染色1-3min(15)蒸馏水稍洗1-2s(16)80%乙醇稍洗1-2s(17)95%乙醇（Ⅰ）2-3s(18)95%乙醇（Ⅱ）3-5s(19)无水乙醇5-10min(20)石炭酸二甲苯无水乙醇5-10min(21)二甲苯（Ⅰ）2min(22)二甲苯（Ⅱ）2min(23)二甲苯（Ⅲ）2min(24)中性树胶封固注：①第（10）、（11）步可省去，（12）步冲水时间需延长至20-30min。②第（20）步如果不用石炭酸二甲苯，可改用无水乙醇。1．取材组织块，经固定后，常规石蜡包埋，4μm切片。2．切片常规用二甲苯脱蜡，经各级乙醇至水洗：二甲苯（I）5min→二甲苯（Ⅱ）5min→100％乙醇2min→95％的乙醇1min→80％乙醇1min→75％乙醇1min→蒸馏水洗2min。（各两次，然后把水吸干）3．苏木素染色5min，自来水冲洗。（吸干水）4．盐酸乙醇分化30s（提插数下）。5．自来水浸泡15min或温水（约50℃）5min。（吸干水）6．置伊红液2min。7．常规脱水，透明，封片：95％乙醇（I）min→95％乙醇（Ⅱ）1min→100％乙醇（I）1min→100％乙醇（Ⅱ）1min→二甲苯石碳酸（3：1）1min（省略）→二甲苯（I）1min→二甲苯（Ⅱ）1min→中性树脂封固。HE染色步骤一、HE染液的配制：1、Harris苏木素：称取苏木素精1g一氧化汞0.5g硫酸铝钾20g量取无水乙醇10ml蒸馏水200ml苏木素溶于无水乙醇，钾明矾溶于蒸馏水，二者混合后煮沸，离火，加入氧化汞，用玻棒搅拌，试剂变为深紫色，立即移入冷水快速冷却，静置一夜，过滤，棕色小磨口试剂瓶密封保存。使用前加入5%冰乙酸4ml（或冰乙酸3滴）。2、0.5%伊红(水溶性)：称取伊红0.5g量取95%乙醇25ml蒸馏水75ml先取少量蒸馏水加入伊红，用玻棒将伊红碾碎并搅溶，再加入全部蒸馏水，完全溶解后，再加入乙醇，最后加入冰乙酸1滴。白色小磨口试剂瓶密封保存。3、1%盐酸水溶液：盐酸3ml蒸馏水297ml混匀，白色试剂瓶保存。4、中性树胶封片剂：往125ml棕色滴瓶中倒入中性树胶若干，加入二甲苯适量用吸管调匀，有一定粘稠度即可。试剂二甲苯1瓶Harris苏木素染液无水乙醇2瓶1%盐酸水溶液95%乙醇2瓶0.5%伊红(水溶性)染液中性树胶封片剂二、染色步骤1、电吹风吹片或烤片，至溶蜡；2、入二甲苯（I）中脱蜡5分钟，用吸水纸吸干液体；3、入二甲苯（II）中脱蜡10分钟（切片透明），用吸水纸吸干液体；4、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；5、入100%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；6、入95%乙醇3分钟；7、入流水2分钟，用吸水纸吸干水分；8、Harris苏木素染色4~8分钟；9、自来水稍洗；10、1%盐酸水溶液分化5~10秒（切片由蓝变红）；11、自来水洗返蓝15~30分钟；12、0.5%伊红(水溶性)染色30秒~1分13、95%乙醇（I）脱水5分钟，用吸水纸吸干液体；14、95%乙醇（II）5分钟，用吸水纸吸干液体；15、入100%乙醇（I）5分钟，用吸水纸吸干液体；16、入100%乙醇（II）2分钟，用吸水纸吸干液体；17、入二甲苯（I）中透明2--3分钟，用吸水纸吸干液体；18、入二甲苯（II）中透明5分钟；19、中性树胶封片。20、镜下观察结果：细胞核深蓝色，胞浆及纤维组织呈深浅不等的红色。三、注意事项1、苏木素染色时间应根据染液的新鲜或陈旧、及着色力决定。2、盐酸分化要恰当，分化不足，会核、浆共染，分化过度会造成核染色过浅。3、水洗蓝化时间应充分，以防褪色。4、封片后，玻片应及时贴上标签并写上编号。