培养基配方

429附录A-淡水和海水介质的配方1.0.淡水养殖媒体，4312.0.海洋文化传媒，4871.1.淡水合成培养基，4312.1.人造海水媒体，4871.2.富含天然淡水媒体，4762.2.丰富的天然海水媒体，5011.3.土壤-水富集淡水介质，4782.3.丰富的天然海水+有机物，5211.4.富含有机物的淡水媒体，4822.4.土壤-水富含天然海水介质，5241.5.用于淡水菌的细菌-真菌测试培养基，4852.5.海水的细菌-真菌测试介质，527以下培养基配方和培养方案是文献中不完整的汇编和本卷的贡献者。虽然我们尝试将此信息编辑为方便且一致的格式，但我们并未尝试测试或验证单个配方。即便如此，随后的汇编应证明是对各种广泛使用的藻类培养基的有用指南。培养基配方提供组分及其浓度;有关更多准备细节，请参阅第2章至第4章。培养基配方适用于培育已建立的藻类菌株;为了分离或纯化单一生物，营养物质可能需要减少10到10,000倍，这取决于藻类的敏感性（见第6-9章）。对于已建立菌株的传代培养，参见第10章和第11章。其他配方可在网站上找到（见表A.1）包括天然海水在内的水质非常重要。缩写dH2O通常指蒸馏水，去离子水，蒸馏水/去离子水，Milli-Q水（MilliporeCorp.）等。随着培养应用变得更加关键，水的质量也变得更加关键。天然海水（和天然淡水）应从非污染源获得。对于贫营养（开阔海洋）浮游植物，应从开阔的海洋地点获取天然水。溶解化学品时，等待第一个组分溶解后再添加第二个组分。通常需要搅拌（有时是加热）以有效地溶解化学品。在许多情况下，储备溶液的制备不仅方便，而且还必须避免称量非常小的量的错误。应注意最终培养基的pH值。在大多数情况下，如果是需要调节pH，要在灭菌前发生。表I.主要服务培养集合及其互联网网站上的培养基配方。有关其他培养集合，请参阅：http：//wdcm.nig.ac.jp/hpcc.html。430请注意，高压灭菌会将二氧化碳从缺乏碳酸盐稳定缓冲液的介质中排出，这使得介质在从高压灭菌器中取出后立即呈现极性碱性。在这些情况下，在将细胞接种到培养基中之前，等待大约24小时进行气体平衡。高压灭菌后，天然海水可能会产生沉淀物（见第3章）。一般来说，无机原料应进行高压灭菌并无菌处理。硅酸盐原料最好储存在深色的特氟隆衬里瓶中。如果藻类生长不需要硅酸盐，则可以通过将其留在培养基中来避免潜在的沉淀问题。大多数痕量金属溶液都与EDTA螯合（见第4章）。在制备EDTA缓冲的痕量金属溶液时，在溶解金属之前溶解EDTA。普通维生素（硫胺素·HCl，B1，B12）的储备溶液应在无菌，冷冻安全的容器中分配成小体积，然后冷冻（例如，1-mLEppendorf管或10-mL聚碳酸酯螺旋盖管）。如果过滤除菌并在高压灭菌后无菌添加，维生素保留更多效力（参见第2,3和5章）。如果首先酸化，可以对储备溶液进行高压灭菌。可以将来自维生素储备溶液的等分试样添加到最终培养基中并进行高压灭菌，通常对藻类生长具有很小的破坏作用。然而，维生素应该是制备培养基时添加的最后一种成分，其他成分应该充分混合。通常，将配方标准化为1,000（例如，g，mg，mg;1mL，1L）的因子，并且以1升的量描述储备溶液。但是，通过将组分的量减少10，可以容易地制备100mL的储备溶液。我们计算了最终培养基中每种成分的摩尔浓度，以便在各种培养基之间进行简单比较。此外，大多数储备溶液使用的1mL数量允许使用传统的无菌玻璃（和一次性塑料）移液器以及带有无菌吸头的1,000mL自动移液器。介质按照以下概要进行组织，并且在每个标题内，个体培养介质按字母顺序排列。已经列出了已知在培养基中生长的藻类;偶尔会在配方后列出简单的修改。4311.1淡水合成培养基（FreshwaterSyntheticCultureMedia）AF6Medium,Modified(Kato1982,Watanabeetal.2000)AF-6培养基由Kato（1982）开发用于培养Colacium（Euglenophyceae），但广泛应用于需要微酸性培养基的藻类。通过除去碳酸钙（1.00¥10-4M），加入MES缓冲液，并使用不同的痕量金属混合物，对其进行了修改（Watanabe等人，2000）。它已被用于培养volvocalean藻类（例如，Carteria，Gonium，Chlorogonium，Pandorina，Paulschalzia，Platydorina，Pleodorina，Pteromonas，Pseudocarteria和某些种类的Volvox），黄叶植物BotrydiopsisarrhizaBorzi和Botrydiumgranulatum（L.）Greville，许多隐孢子虫，甲藻（Perofniumbipes）Steinf。globosumLindermann，synurophyteSynurasphagnicola（Korsh。）Korsh。，euglenoidsPhacusagilisSkuja，EuglenaclaraSkuja和E.mutabilisSchmitz，以及绿色纤毛虫Parameciumbursaria。半强度AF-6培养基用于维持淡水鞭毛虫HemidiniumnasutumStein和PeridiniumplonicumWoloszynska（Watanabe等人，2000）。准备库存解决方案。在950mL的dH2O中，首先溶解MES，Fe柠檬酸盐和柠檬酸盐;然后添加原液，使最终体积达到1升。将pH调节至6.6，高压灭菌。432微量金属解决溶液（TraceMetalsSolution）准备主要储备溶液。加入950mL的dH2O，溶解EDTA，然后分别溶解金属，最后加入1mL的两种原料。AF6维生素溶液（AF6VitaminSolution）准备主要储备液。向950mL的dH2O中加入并溶解硫胺素·HCl，然后从两种原料中加入1mL。过滤消毒。冷藏或冷冻。433Allen’sCyanidiumMedium,Modified(M.B.Allen1959,Watanabeetal.2000)MaryBelleAllen（1959）开发了这种用于培养Cyanidiumcaldarium（Tilden）Geitler（Rhodophyceae）的培养基，它可以用于培育相关的Cyanidioshyzon和Galdieria（Watanabe等人，2000）。我们的配方使用原始的常量营养素浓度;然而，痕量金属溶液来自Watanabe等人。（2000）因为它包括螯合剂。艾伦加入10-3MH2SO4以酸化介质。由于存在EDTA，我们建议在添加所有组分后调节pH。为了在黑暗中生长，向培养基中加入1％葡萄糖。将900mL的dH20分别溶解于下列组分中，加入100mL的痕量金属溶液。使用1N硫酸调节至pH2.5。高压灭菌。434微量金属储备液（TraceMetalsSolution）(Watanabeetal.2000)准备主要储备溶液。加入900mLdH2O，溶解Fe-EDTA，然后单独加入金属化合物。最终体积为1升。435BG-11Medium,Modified(Allen1968,AllenandStanier1968,Watanabeetal.2000)BG-11培养基（Allen和Stanier1968）来源于11号培养基（Hughes等，1958），用于培养淡水，土壤，热和海洋蓝细菌（见Stanier和Cohen-Bazire1977，MMAllen1968）。11号培养基的主要变化是NaNO3增加了3倍（该培养基中硝酸盐和磷酸盐水平异常高），并用改良的A5微量元素溶液代替Gaffron的微量元素。然而，可以显着降低硝酸盐值，并且在完全省略硝酸盐的改良BG-110培养基中常规培养固氮固氮菌。请注意，此配方将EDTA与痕量金属溶液分开。将EDTA添加到痕量金属溶液中更为明智，相反，将硼添加到其他常量营养素中更为明智。MgNa2EDTA·H2O可以用摩尔当量的Na2EDTA·2H2O（1.04g）代替。可以将柠檬酸铁和柠檬酸制备成组合储备溶液。可加入Na2SiO3·9H2O（终浓度2.04¥10-4M）（Allen1968）。Allen（1968）发现，当培养基和琼脂一起高压灭菌时，藻类不会生长。她准备了2¥浓度的培养基和2¥浓度的琼脂（1％2.5％终浓度），分别高压灭菌，然后当琼脂约为58℃时将它们混合。她还分别制备柠檬酸铁和锰原料，无菌加入灭菌培养基中。准备柠檬酸铁铵储备溶液（将柠檬酸盐和柠檬酸铁溶于1升dH2O中）和其他储备溶液。加入900mLdH2O，加入1mL柠檬酸铁溶液，然后加入剩余的组分。高压灭菌。冷却和CO2平衡后，最终pH应为7.4。436微量金属溶液（TraceMetalsSolution）这也称为A5+Co痕量金属溶液。向950mL的dH2O中加入EDTA和其他组分;最终体积为1升。437Bold’sBasalMedium(BBM)(Bold1949,BischoffandBold1963)这来自布里斯托尔解决方案的修改版本（参见Bold1949）。培养基缺乏维生素，一些微量金属浓度很高。对于许多藻类来说，这是一种有用的介质，特别是氯球菌藻类，volvocalean藻类（例如，衣藻属），丝状绿藻Klebsormidiumflaccidum（Kützing）S.MattoxetBlackwell（Floyd等人，1972），黄藻藻类HeterococcosendolithicusDarlingetFriedmann（Darling等，1987），euglenoidColaciumvesiculosumEhr。（Rosowski和Kugrens，1973），以及蓝藻MicrocystisaeruginosaKützing（Cole和Wynne，1974）。然而，该配方不适合具有维生素需要的藻类。已经开发了几个修改过的=媒体（参见表格下面的描述）。加入936mLdH2O，加入10mL前六种储备液。每次加入1mL碱性EDTA，酸化铁，硼和痕量金属溶液。高压灭菌。最终pH值应为6.6。KBBM培养基（BBM+0.25％蔗糖+1.0％蛋白胨）是针对类小球藻样菌株开发的，该菌株与草履虫（ParameciumbursariaFocke）存在外生菌（Schuster等，1990）。BBM+GA培养基（BBM+1％葡萄糖+0.01M氨基酸水解产物[例如，酪蛋白的酸水解产物]或0.01M氨基酸[例如，脯氨酸，谷氨酰胺或精氨酸]）被开发用于生长地衣藻类Trebouxia（Fox1967年）。438开发了3NBBM培养基（富含三倍硝酸盐的BBM）以生长鱼腥藻（Anabaenaflos-aquaeBrébissonexBornetetFlahault）和AnacystisnidulansGardner（Thomas和Montes1978）。开发了3NBBM+维生素培养基（含有三倍硝酸盐的BBM加上三种维生素）以培养Batrachospermum（Aghajanian1979）。维生素：加入0.1525mg·L-1硫胺素·HCl（4.52¥10-10M，终浓度）;0.125mg·L-1生物素（5.12¥10-10M，终浓度）;0.125mg·L-1氰钴胺素（9.22¥10-11M，终浓度）。双倍强度BBM+灭菌小麦种子。该培养基用于培养隐孢子虫ChilomonasparamaeciumEhr。和Cyathomonastruncata（Fres。）鱼。（Kugrens等，1987）。439CMedium,Modified(Ichimura1971,Watanabeetal.2000)C（Closterium）培养基是Volvox培养基的衍生物（Provasoli和Pintner1960），由Ichimura（1971）开发用于从富营养化水域培养质粒，特别是Closterium物