第二十一章 免疫学检测原理

第二十一章免疫学检测原理第一部分学习习题一、填空题1．抗原抗体反应的最大特点是_________。2．颗粒性抗原与相应抗体结合后，可以发生_________反应；可溶性抗原与相应抗体结合后，在比例合适的情况下，可以发生_________反应。3．细胞因子的检测可以分为_________、_________、_________三类。二、多选题[A型题]1．抗原-抗体反应所不具有的特征是：A．分子表面的可逆结合B．具有高度特异性C．出现肉眼可见的反应需要适当的比例D．二者结合后，立即出现可见反应E.二者反应受电解质、酸碱度和浓度的影响2．检测可溶性抗原不能用：A．ELISAB．单向琼脂扩散C．直接凝集反应D．反向间接凝集反应E．协同凝集试验3.不属于抗原抗体反应的是：A.酶联免疫吸附试验（ELISA）B．锡克试验C．抗球蛋白试验D．放射免疫分析法（RIA）E．E花环试验4．乳胶妊娠诊断试验属于：A．协同凝集反应B．反向间接凝集反应C．直接凝集反应D．间接凝集反应E．间接凝集抑制反应5．下列免疫学测定方法敏感性最高的是：A．沉淀反应B．凝集反应C．ELISAD．放射免疫测定E．补体结合试验6．抗原抗体反应最适宜的PH值为：A.5—4.5B．4.5—5C．5—6D．6—8E．8—97．用免疫荧光技术间接法检测组织中的抗原，应将荧光素标记：A.抗原B相应抗C．抗免疫球蛋白抗体D．抗原-抗体复合物E．抗C3抗体8．用ELISA双抗体夹心法检测抗原A时，固相载体的包被物是：A.酶标抗A抗体B．未标记的抗A抗体C．酶标抗原AD．未标记的抗球蛋白抗体E．酶标抗球蛋白抗体9．用免疫荧光技术直接法检测病原微生物时，荧光素应标记在：A.微生物上B．抗人Ig抗体上C．抗原-抗体复合物上D.抗微生物抗体上E．抗C3抗体上10．诊断DTH的皮肤试验，在前臂内注射少量可溶性抗原后，观察时间为：A．10分钟B.30分钟C.6小时D．12小时E.72小时11．可以用于对抗原进行免疫组化定位的方法是：A．NorthernBlotB．WesternBlotC．溶血空斑试验D．免疫荧光技术E．混合淋巴细胞反应12．不能刺激T细胞增殖分化的物质是：A.结核杆菌纯蛋白衍生物（PPD）B.刀豆蛋白A（ConA）C．植物血凝素（PHA）D．细菌的脂多糖（LPS）E．美洲商陆（PWM）13．用ELISA双抗体夹心法检测血清中甲胎蛋白（AFP），应选择的固相包被物是：A．已知AFPB．酶标记AFPC．抗AFP抗体D．酶标记抗AFP抗体E．待检血清14．能够定量测定待检物的免疫学试验方法是：A．环状沉淀实验B．单向琼脂扩散C．抗球蛋白实验D．补体结合试验E．对流免疫电泳15．用于检测细胞免疫功能的皮肤试验是：A．青霉素皮试B．锡克试验C．结核菌素试验D．破伤风抗毒素皮试E．白喉抗毒素皮试[B型题]A．WesternBlotingB．细胞毒实验C．溶血空斑实验D．E花环实验E．PHA淋巴细胞转化实验1．测T细胞数量2．测定抗体生成细胞数3．测定NK细胞杀伤活性4．测定非特异性细胞免疫功能A．测定Tc细胞的效应功能B．IgG测定C．SmIg测定D．T细胞亚群测定E．淋巴细胞转化实验5．PHA可用于6．免疫比浊法可用于7．流式细胞仪可用于8．细胞毒实验可用于[X型题]1．ELISAA．酶与相应底物作用产生颜色B．抗原或抗体可以特异性吸附于固相载体上C．可以用酶标测定仪作定量分析D．蛋白酶是其标记酶E．双抗体夹心法可以检测未知抗体2．能测定抗原的实验包括A．絮状沉淀试验B．间接凝集试验C．火箭电泳D．酶联免疫吸附试验E．荧光免疫技术三、名词解释1．酶联免疫吸附试验2．放射免疫分析法3．免疫荧光技术4．凝集反应5．直接凝集反应6．间接凝集反应7．对流免疫电泳四、问答题1、从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？2、简述细胞毒试验的原理3、简述细胞因子的检测原理第二部分参考答案一、填空题1．特异性2．凝集、沉淀3．免疫学检测法、生物活性检测法、分子生物学检测法二、多选题[A型题]1.D2.C3.E4.E5.D6.D7.C8.B9.D10.E11.D12.D13.C14．B15.C[B型题]1.D2.C3.B4.E5.E6.B7.D8.A[X型题]1.ABCD2.ABCDE三、名词解释1．酶联免疫吸附试验（ELISA）：将已知抗原或抗体吸附在固相载体表面，使抗原抗体反应在固相表面上进行，用洗涤方法使固相上的抗原抗体复合物与液相中游离抗原或抗体分开。用于抗原或抗体的定量检测。2．放射免疫分析法（RIA）：用放射性核素标记抗原或抗体进行的免疫学检测。常用于微量抗原或抗体的定量检测。3．免疫荧光技术：用荧光素与抗体连接成荧光抗体、再与待检标本中的抗原反应，在荧光显微镜下观察抗原抗体反应的部位，用于抗原的定位检测。4．凝集反应：颗粒性抗原（如细菌、细胞等）与相应的抗体结合后形成肉眼可见的凝集块。5．直接凝集反应：将细菌或红细胞与相应抗体直接反应，出现细菌或红细胞凝集的现象。6．间接凝集反应：将可溶性抗原包被（结合）在无关载体颗粒表面，再与相应抗体反应后，出现载体颗粒凝集的现象。7．对流免疫电泳：在琼脂糖电泳凝胶的正负极端打孔，并分别加入抗体和抗原，在电场的作用下，抗体和抗原作定向扩散，其中抗体由于电渗作用，扩散方向为正极向负极，而抗原则由于电泳作用，扩散方向为负极向正极，在二着比例适当的位置出现沉淀线。用于抗原或抗体的定性检测。四、问答题1.从外周血分离淋巴细胞的方法有哪些？答案（1）依靠淋巴细胞物理特征的分离方法*葡聚糖-泛影葡酸（Ficoll）等密度梯度离心法，根据淋巴细胞的比重将其与其他血细胞成分分离。*尼龙绵分离法：根据B淋巴细胞粘附于尼龙棉的特性，将B细胞与T细胞分开。（2）依靠表面标记的分离方法*E花环分离法：T细胞表面的CD2是绵羊红细胞（SRBC）受体，能使T细胞与SRBC结合形成E花环，因花环形成后比重变大，采用密度梯度离心即可将T细胞从其他淋巴细胞中分离出来。*免疫磁珠分离法：将某种表面标记特异性抗体包被在磁性微珠上，与磁珠交联的抗体能够特异性结合具有这种表面标记的细胞结合，然后用强磁场可将具有这种表面标记的细胞分离出来。*流式细胞术分离法：利用各种荧光素标记的表面标记特异性抗体，使不同表面标记的细胞结合上不同的荧光素，借助荧光活化细胞分选仪（FACS）将各种细胞分离开来。2.简述细胞毒试验的原理答案：（1）对于可溶性物质（如抗体、补体、肿瘤坏死因子等）导致的靶细胞破坏，可以采用简单的染色法来进行检测，原理是当靶细胞破坏时，其胞膜完整性被破坏，当用染料（如台盼蓝、酚红、结晶紫等）染色时，损伤的细胞浆将会着色，而未受损的靶细胞因胞膜完整，会拒染。结合光密度的测定，能够进行定量检测。（2）对于效应细胞（如CTL、NK等）对靶细胞的损伤，可以采用同位素释放法、酶释放法来进行测定。其原理如下：*51Cr释放法：用Na251CrO4标记靶细胞，若效应细胞损伤靶细胞，51Cr将释放进入上清，检测上清中的放射活性，即可计算出效应细胞对靶细胞的杀伤活性。*酶释放法：靶细胞内具有多种酶，当靶细胞受损时，这些酶将从胞内释放至上清，通过上清中酶活性的检测，可以计算出效应细胞杀伤靶细胞的活性。最常用的酶是乳酸脱氢酶。（3）细胞凋亡检测法：某些因素能够诱导靶细胞发生凋亡，也是免疫应答杀伤靶细胞的一种形式。凋亡是细胞内源性DNA酶被被激活，将染色体DNA酶解，使细胞发生程序性死亡。可以采用DNAladder法、TUNEL法等方法来检测靶细胞的凋亡事件，从而评估对靶细胞杀伤的效应。3.简述细胞因子的检测原理答案：见“网络课件内容”