实验5细菌培养基的制作

实验五培养基的制作（一）实验目的要求1、掌握培养基的制作程序；2、熟悉常用培养基的种类及用途；3、掌握培养基的消毒灭菌技术。（二）培养基的成分、种类和用途1、培养基的概念：是指人工配制的适合细菌生长繁殖的综合营养基质。2、培养基的营养物质：蛋白胨、肉浸液、牛肉膏、糖醇类、血液、鸡蛋和动物血清、生长因子、无机盐类、水3、培养基的其它成分：凝固剂、抑制剂、指示剂4、培养基的种类和用途基础培养基：培养营养要求不高的细菌，如普通平板营养培养基：能满足营养需求较高细菌的生长，如血平板鉴别培养基：含有某些特定的底物，用于鉴别细菌，如克氏双糖培养基（KIA）选择培养基：具有选择性抑制作用，用于选择性的培养目的菌，如SS平板；增菌培养基：促进目的菌的生长，适用于含菌量较少的标本，如葡萄糖肉汤；厌氧培养基：用于培养厌氧菌（1）按用途分类：（2）按物理性状分类：液体培养基：不含凝固剂，用于增菌和接种纯种细菌。半固体培养基：含0.3％～0.5％琼脂，用于观察细菌的动力。固体培养基：含2％～2.5％琼脂，多用于细菌的分离培养。（三）实验器材常用玻璃器材：培养皿、试管、烧杯、三角烧瓶、玻棒等。培养基的成分：普通琼脂培养基、蛋白胨、牛肉浸膏、NaCl、琼脂粉等。称量工具：普通天平、电子天平。灭菌器材：高压蒸汽灭菌锅等。培养基的制作：无菌室、超净工作台。高压蒸汽灭菌锅（121.3℃15-20min）干烤箱用途：1、适用于玻璃器皿、粉剂等的灭菌；温度160~170℃，时间2h。2、用作烘干。高压蒸汽灭菌后的某些物品如平板的烘干温度60℃超净工作台（四）实验方法玻璃器材的清洗★新购置的玻璃器材：1％～2％盐酸浸泡→清水清洗★用过的无污染器皿：洗涤剂洗刷→清水清洗细菌污染的器材：消毒灭菌后再洗刷★盛培养基试管和平皿：高压灭菌→趁热倒出→洗涤剂洗刷→清水冲洗；★吸管：3％来苏浸泡→清水冲洗；★玻片和盖玻片：3％来苏和清洁液浸泡→清水冲洗；染色后的玻片，应肥皂水煮沸10min再洗涤；★含油脂的器皿：单独灭菌。1、常用玻璃器材的准备玻璃器皿灭菌前的准备玻璃器皿在清洗、干燥后必须经正确的包裹和加塞后才能进行灭菌处理。灭菌方法：干烤灭菌法2、培养基制备的一般程序称量溶化分装灭菌倒平板培养基灭菌方法★基础培养基：121.3℃高压蒸汽灭菌15分钟★含糖培养基：113℃灭菌15分钟★鸡蛋、血清培养基：间歇灭菌3天3次★不耐高温的液体成分：滤过除菌保存成分:牛肉浸膏（0.2g）蛋白胨（0.5g）氯化钠（0.25g）50mldH2O等。程序：称量;熔化;分装(试管);灭菌;保存（1）液体培养基的制作2.半固体培养基：在肉汤中加入0.2%～0.5%的琼脂即成。25ml肉汤中0.1g琼脂粉。程序：称量；熔化；分装(试管)；灭菌；保存3.固体培养基：在肉汤中加入2%～3%的琼脂即成；或直接用营养琼脂粉配置。平板制作程序：称量3.5g营养琼脂粉配100ml固体培养基。称量；熔化；分装(三角烧瓶)；灭菌；倒平板；保存试管斜面制作程序：称量；熔化；分装(试管)；灭菌；斜置；保存要求配置的培养基量（每组）6人一小组,每组需配培养基:液体培养基：30ml/2人,溶解,试管6根半固体培养基：30ml/2人,溶解,试管6根固体培养基：120ml/2人,溶解,试管6根制备斜面,余下灭菌后倒平板(6个)（中午1点10分，来几位同学倒平板）完成实验报告一份