镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察

镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察（综合设计实验）镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察一、实验研究依据实验目的与意义肝脏是镉急性中毒损伤的主要靶器官之一。鼠急性中毒后，镉主要蓄积于肝脏。有文献报道，镉有很强的亲硫性。在肝脏中，镉易与巯基结合从而诱导金属硫蛋白生成镉一硫蛋白【1】，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用【2】，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。【3】有研究发现，染镉后，从外观上看，小鼠肝脏体积肿大，肝叶肿胀明显，肝叶间有粘连、边缘变钝，颜色紫黑，质地变硬。【3】镜下肝实质细胞的肿胀、嗜酸性变、淋巴细胞浸润及核固缩等肝细胞损伤改变。本研究通过动物实验，了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并从氧化应激方面探讨其作用机制。二、实验内容与方法(1)、实验动物：健康成年清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半。(2)、主要试剂与仪器：仪器：7230分光光度计；显徽镜；分析天平；SIGMA2K15型冷冻高速离心机；试剂：氯化镉(CdCI2，A．R．)、HNO3-HClO4、蒸馏水、生理盐水(3)、动物分组与染毒：体重18—25g的健康成年清洁级昆明种小鼠随机区组分为4组，每组10只，雌雄各办临用前以生理盐水配制CdCI2溶液，CdCI2染毒剂量分别为0.5、1.0、2.0mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液(10ml／kg体重)，对照组注射生理盐水(10ml／kg体重)，连续染毒三天。各组小鼠最后一次染毒24小时后摘眼球采血或断头取全血，4°下用3000r/min离心10分钟制备血清。小鼠处死后迅速摘出肝脏，生理盐水洗净、吸干、称重。血清用于AST、ALT生化指标测定，取部分肝脏用于SOD、MDA测定。三、观察指标1．AST、ALT活性的测定：AST、ALT检测试剂盒，比色法。2．MDA测定采用：硫代巴比妥酸(TBA)法．以1,1,3,3—四乙氧基丙烷(TEP)为标准，单位以每克蛋白中与TBA反应物(TBARS)的μmol数表示。蛋白质测定采用Lowry法，以小牛血清白蛋白为标准；MDA检测试剂盒，比色法。3．SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法。4．肝重、体重、脏器系数：称重法。5．肝匀浆蛋白质测定：考马氏亮蓝比色法四、数据统计处理方法各组检测指标计算均数、标准差，数据各组间比较采用F检验。五、预期实验结果1、随着CdCI2浓度的增长，AST、ALT的活性升高，提示镉对肝脏组织的损伤作用。2、MDA测定的反应物TBARS与CdCI2的染毒浓度呈正相关，且有效应剂量关系。文献资料：【1】刘杰.用转基因动物研究金属硫蛋白对镉毒性的左右[J].中华劳动卫生职业病杂志，1998,16(1):43.【2】金慧英.急性镉中毒的肝脏损伤机制及金属硫蛋白的保护作用[J].中华劳动卫生职业病杂志,1998,16(1):43.【3】陈敏，等.镉对小鼠肝脏的毒作用机理探讨[J].江苏大学学报(医学版)，August2002,12(4).【4】XieJM,FunakoshiT,ShimadaH,etal.Comparativeeffectsofchelatingagentsinpulmonarytoxicityofsystemicnickelinmice[J].JApplToxicol,1996,16:317.【5】谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.新型螯合剂对镍致小鼠肝脏毒性的影响[J].中华劳动卫生职业病杂志.1997.15(6):325.【6】谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.几种二六代氨基甲酸盐解镍致小鼠肝肾毒性作用比较[J].江苏医药.1998.24(增刊):521.【7】李宏,张文昌,汪家梨,黄凌群.镉的雌激素样作用及相关机制体内的实验.[J]毒理学杂志.2005.19(3):231.