公猪精液采精及稀释

专业资料分享完美DOC格式整理公猪采精与稀释操作规程1、采精与精液处理流程（讲究卫生，控制温度）（1）采精过程流程1、进入实验室后清洁双手2、准备稀释液，并将稀释液放入35℃水浴锅中升温3、打开显微镜上的加热板控制开关，设定温度到38℃4、安装集精杯（预热到37℃），准备其它采精用品，放入壁厨5、将公猪赶入采精室，关上栅栏，清洁其体表6、排出包皮液用0.1％KMnO4溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。7、戴上双层手套，诱导公猪爬跨假母猪8、锁定并拉出阴茎9、待排出部分清亮液体后，开始收集精液10、将集精杯放入壁厨11、将公猪赶回圈内（2）精液处理操作流程1．将一预温后的烧杯或塑料杯放在电子秤上，打开电子秤，当显示为零时，将装精液的食品袋从集精杯中取出放入杯中，显示读数为精液的重量。2．将放精液的烧杯轻轻摇匀精液后，放入35℃的水浴锅中与稀释液等温。3．立即用取样器取精液10～25微升左右，滴在载物台上预热的载玻片上，盖上盖玻片，估测活力。精子活力大于0.6，则可用于下一步的处理。4．另取1毫升精液放入加有10毫升生理盐水的精子密度杯中，读出读数后，在查对表上查到精子密度值。5．计算精液可分装的份数和最终的精液体积或重量。6．将大烧杯放在电子秤上，除皮，然后再将精液袋放入其中，并将精液袋上口翻在杯沿外，将装稀释液的三角瓶从水浴锅中取出，擦去底部水分，将稀释液加入大烧杯中，直到达到计算的最终重量，轻轻摇动或用玻璃棒搅拌精液使其混合。7、精液稀释后，检查精液活力，若无明显下降，开始分装。8．将精液按规定重量分装于各个精液瓶（袋）中，排出空气后封口，进行精液标记，置22℃-25℃的室温1小时后(或用几层毛巾包被好后)，降温到20℃左右时直接放置17℃冰箱中。9．清洗各种容器并放于消毒柜中干燥消毒。专业资料分享完美DOC格式整理2、稀释液的配制过程2.1配制过程以1000毫升BTS稀释液为例，可用任一方法：①经过清洗干燥消毒的三角瓶，将一袋BTS稀释粉（50克）全部加入瓶中，用量筒量取双蒸馏水1000毫升，加入三角瓶中。盖上盖子或用稀释粉袋套在三角瓶口上，封紧摇动，使稀释粉完全溶解。或放在磁力搅拌器上，搅拌加速溶解。取下盖子，放入35℃的水浴锅中预温。稀释液用过后，三角瓶应用蒸馏水冲洗，空干水分，然后将三角瓶、量筒用牛皮纸封口，放入80～120℃的消毒柜或干燥箱中烘干。②将两个食品袋相套放入大烧杯中或塑料杯中，放在电子秤上，打开电子秤开关，当电子秤上读数为零时，将连接蒸馏水容器的硅胶管放出少量水后，将管口对准杯口注水，并注意读数变化，当接近1000克时，应放慢流速，改为滴注，直到1000克。之后，应将蒸馏水管的龙头套好，防止污染。在大烧杯中加入一袋稀释粉（50克）。从盛磁珠的小烧杯中取镊子并夹取磁珠，在废液缸上用洗瓶冲洗磁珠2-3次，待磁珠上水分滴净后，放入烧杯中，然后将烧杯放在磁力搅拌器上，打开电源开关和加热开关，调整磁珠转速旋扭，使磁珠以适当速度旋转（水体形成涡流），使稀释粉全部溶解后，降低磁珠转速，关闭加热和电源开关。将杯子放入35℃的水浴中预温。注：不能控温的加热磁力搅拌器使用时间不可超过10分钟，或及早关闭加热电源；平时磁珠放在一个清洗干燥过的小烧杯中，注入新鲜蒸馏水半杯，镊子为不锈钢材料，也经清洗干燥放入杯中，盖上干净的培养皿，每3周应换掉陈水，冲净换上新的蒸馏水。稀释液加入精液中后，应用小烧杯中的镊子将磁珠从大烧杯中夹出，并在废液缸上冲洗磁珠和镊子前端3-4遍，待磁珠上水分滴净后，连同镊子放入小烧杯中，盖上培养皿。专业资料分享完美DOC格式整理这种方法由于稀释液是在一次性食品袋中配制的，因此，不需要对配制稀释液的容器进行清洗和消毒，实现了稀释液配制的免消毒。冬季稀释粉溶解较慢，可将稀释粉与水混合后，放入水浴锅中预温10分钟，再摇匀，可加速稀释粉溶解。使用加热磁力搅拌器者不必在水浴锅中预温。注：除大规模人工授精站外，一般不主张自己配制稀释粉，推荐使用商业化稀释粉，这些产品质量稳定可靠。另外，稀释粉与蒸馏水按什么比例混合是十分严格的，应按照说明书上的配比进行稀释粉的溶解，不可改变配比。2.2PH值与渗透压用1N稀盐酸或1N氢氧化钠调整BTS稀释液的PH值为7.2(6.8-7.4)左右,渗透压为330mOsm2.3稀释液的保存液态状稀释液冰箱4℃保存，不超过24小时，超过有效贮存期的变质稀释液应废弃。3、采精前的准备1.集精杯的准备应在实验室中进行。用保温杯作集精杯时，不能直接将精液采入杯中。将两层食品袋装入保温杯内，并用洁净的玻璃棒使其贴靠在保温杯壁上，袋口翻向保温杯外，上盖一层专用过滤网，用橡皮筋固定，并使过滤网中部下陷3厘米，以避免公猪射精过快或精液过滤慢时，精液外溢。安装好后，将其放恒温箱在37℃温度下备用。如果是纸杯作集精杯，在杯口上固定上一次性过滤网，并使网面下陷2～3厘米，如果没有恒温箱，可在安装集精杯之前，用电吹风机将集精杯内壁加热到温热状态（不可加热到烫手）。采精前应将集精杯、消毒纸巾、一次性手套放入壁厨中，以方便采精时取用。2．精液品质检查用品准备最好先将显微镜调好备用，把显微镜加热板放在显微镜载物台上，用标本夹固定好，打开电热板控制器电源开关，把设定温度专业资料分享完美DOC格式整理调到38℃再打到测温状态，准备好两张洁净的载玻片和两张洁将的盖玻片放在加热板上预温。将电子秤、密度测定等用品准备好。3．公猪的准备采精员将待采精的公猪赶至采精栏，关上采精区的栅栏门，并用毛刷刷拭假母猪的台面和后躯下；然后再清扫公猪两侧肋腹部及下腹部，必要时，可将公猪的阴毛剪短（留3厘米）。4．采精员的准备采精员应穿上工作服，将公猪赶入采精室后，清扫猪体后，应尽快右手戴上双层无毒的一次性手套，带上纸巾、集精杯、小凳准备采精。4、采精技术一、采精的目标与要求1．用最简单的方法采集到全部含较多精子的精液公猪性反射和射精特点与牛羊不同，其龟头对压力、约束力较为敏感，而对温度相对不敏感，因此公猪采用假阴道法采精效果往往不佳，而且猪射精时是分段射精的，一般不能收集最初射出的精液和清亮无精子的精液，因此，公猪适合用拳握法进行采精。这种方法既简单，又便于分段收集精液。2．采集到的精液最大限度地不受到任何污染由于采精过程中，射精、收集精都是在开放的环境中，精液极易受到污染。采精用的手套、集精杯、过滤网等与精液接触的物品必须无菌和对精子无毒害，一定要避免公猪体表及阴毛上的污物、包皮液、尿生殖道中的尿液、空气中的灰尘进入精液中。3．尽可能使精液不受到外界温度的影响公猪的精液对温度十分敏感，尤其是低温。因此，采精室的温度能够控制，不应低于10℃，最好在15-25℃之间，这不仅有利于公猪的性行为正常，而且能避免外界温度对精液温度的影响。二、采精过程1、诱导公猪爬跨假母猪采精员可摩仿发情母猪的叫声，并敲击假母猪诱导公猪爬跨。2、在采精之前先剪去公猪包皮上的被毛，防止干扰采精及细菌污染专业资料分享完美DOC格式整理2、排出包皮液用0.1％KMnO4溶液清洗其腹部及包皮，再用清水洗净，抹干。公猪爬跨上假母猪后，采精员可坐公猪左后侧的小凳上，用右手按摩公猪包皮腔，尽可能将包皮腔中的包皮液（尿液）排净，并用纸巾拭干。3、锁定公猪阴茎并将其拉出公猪阴茎勃起后，开始有试图插入母猪阴道的动作，但有些公猪伸出阴茎较慢，需要按摩包皮以帮助阴茎伸出。公猪阴茎伸出后，采精员应脱去外层手套，右手呈锥形的空拳，即拇指一侧较松，小指一侧较紧，拳心向上，使龟头（螺旋部分）进入空拳中，只让公猪的龟头伸出空拳1厘米左右，或不让其伸出拳外，用中指、无名指和小指锁定龟头，注意不要抓握阴茎体部（非螺放部分），以防造成公猪不适而从假母猪上退下，然后顺其向前冲力，将阴茎的“S”状弯曲尽可能地拉直，握紧阴茎龟头防止其旋转，公猪即可安静下来并开始射精；如果假母猪的结构合理，可将其阴茎向左前上拉，并使龟头向下弯（见图），这样有利于防止包皮腔中的残存包皮液顺着阴茎流至集精杯。“挤出包皮积尿，按摩公猪的包皮部，待公猪爬上假台猪后，用温暖清洁的手(有无手套皆可)握紧伸出的龟头，顺公猪前冲时将阴茎的S状弯曲拉直，握紧阴茎螺旋部的第一和第二摺，在公猪前冲时允许阴茎自然伸展，不必强拉。充分伸展后，阴茎将停止推进，达到强直、“锁定”状态，开始射精。射精过程中不要松手，否则压力减轻将导致射精中断。”4、左手打开集精杯盖，取下上面的纸巾。5、精液收集公猪开始射精后，不要立即收集，待公猪射出部分精亮的液体后，再开始收集含精多的部分，如果手中的胶状物较多，可隔着纸巾将胶状物擦除。6、在精液收集过程中，应尽可能根据公猪的射精特点，只收集含精丰富的部分，不要收集清亮的液体和胶状物。注意在采精过程中不要碰阴茎体，否则阴茎将迅速缩回。7、采精过程中，如果仍有包皮中的尿液顺阴茎流出，可先将龟头抬高，然后在射精间隙或只射出清亮液体时，放下集精杯，左手拿纸巾将其吸附，避免流入集精杯中。8、当公猪开始环顾四周时，说明公猪射精即将结束。可略松开龟头，以观察公猪反应，如果阴茎又开始转动，说明射精没有结束，应立即锁定龟头；如果阴茎软缩，说明射精结束，可结束采精。8．采精后，小心地将集精杯上的过滤网去掉，防止其掉入集精杯中，将集精杯中食品袋束口，将袋口上部放在集精杯沿上，盖上集精杯盖，然后应看着公猪爬下假母猪。将精液放入采精室与实验室之间的壁厨内，然后将公猪赶回圈内。5、精液的稀释1．精液稀释的目的专业资料分享完美DOC格式整理新采集的动物精液精子浓度高，而且温度较高，精子的代谢强度大，很快就产生大量的代谢产物，并使其自身的生命耗尽。即使很短的时间内，都可能因精子的代谢产物对精子产生毒害，而使精子保存时间缩短。而用合理的稀释液稀释精液，则可给精子提供营养，中和代谢产物，并且允许精液降温，从而大大延长精子的存活时间，并能保持精子的受精能力。所以，对人工授精来说，猪精液尽快进行稀释十分重要，这也是为什么要将实验室建在采精室的隔壁的原因。另外，原精液的精子浓度大，而一次输精的总精子数仅几十个亿，只相当于几毫升到十几毫升的原精，而母猪受精时需要的总精液量又不能低于100毫升，这也是必须稀释的另一个原因。因此，精液稀释的目的是：（1）增加精液容量，以确保每头母猪输精的总精液量。（2）有利于精子的体外存活和受精能力的保持。猪精液的稀释液配方有很多种，如在常温下可保存3～5天的配方有BTS，Kiev、Modena等，保存5～7天的长效保存稀释液有ZorPVA。也有冷冻精液稀释液。最常用的稀释液为BTS稀释液。2．每份精液的总精子数目前还没有一个每头份精液的最低精子数标准和体积标准，但一般认为一次输入15亿以上个精子，对受胎率和产仔数是可靠的。但也没有必要超过60亿个精子。在实际生产中，建议刚刚开展人工授精的猪场，每份精液应有50～60亿个精子；如果人工授精人员技术已经熟练，可将每份精液总精子数降到40亿。而个体人工授精站每份精液的总精子数应在25～30亿。从精液的容量上讲，初配母猪一次输入精液量应为100毫升，经产母猪一次输精的精液量为120毫升。原精液的活力（大于0.6）必须合格。（1ml精液约为1克）3．精液稀释相关数据的计算原精液总精子数=原精液体积（或重量）×原精液精子浓度*活率（活率通常为0.9—1，考虑有畸形精子）原精液可分装的份数=原精液总精子数÷每份精液的总精子数（通常40亿）（取整数部分，不按四舍五入，而是舍去小数点后面的数）专业资料分享完美DOC格式整理原精液稀释后的最终体积（或重量）=可分装的份数×每份精液的体积（100或120ml）最大稀释的倍数最好不超过原精液体积的10倍。举例说明：某头公猪一次采精精液的重量为230ml（或克），经测定精子浓度为1.8亿/毫升（或克），规定每份精液的总精子数为40亿，体积为100毫升（或重量100克），计算原精液稀释后最终的体积或重量。（以重量计算）总精子数=原精液体积（或重量）×原精液精子浓度=230×1.8=230*1.8=414亿（是不是还有个活力问题？414*活力）原精液