纤维素的测定方法

实验原理植物的主要化学成分是纤维素、半纤维素和木质素这三部分。它们是构成植物细胞壁的主要组分。其中，纤维素组成微细纤维，构成纤维细胞壁的网状骨架，而半纤维素和木质素是填充在纤维和微细纤维之间的“粘合剂”和“填充剂”。1.纤维素生物制粉末在加热的情况下用醋酸和硝酸的混合液处理，在这种情况下，细胞间的物质被溶解，纤维素也分解成单个的纤维，木质素、半纤维素和其它的物质也被除去。淀粉、多缩戊糖和其它物质受到了水解。用水洗涤除去杂质以后，纤维素在硫酸存在下被重铬酸钾氧化成二氧化碳和水。C6H10O5+4K2Cr2O7+16H2SO4=6CO2+4Cr2(SO4)3+4K2SO4+21H2O过剩的重铬酸钾用硫酸亚铁铵溶液滴定，再用硫酸亚铁铵滴定同量的但是未与纤维素反应的重铬酸钾，根据差值可以求得纤维素的含量。2.半纤维素用沸腾的80％硝酸钙溶液使淀粉溶解，同时将干扰测定半纤维素的溶于水的其它碳水化合物除掉。将沉淀用蒸馏水冲洗以后，用较高浓度的盐酸，大大缩短半纤维素的水解时间，水解得到的糖溶液，稀释到一定体积，用氢氧化钠溶液中和，其中的总糖量用铜碘法测定。铜碘法原理：半纤维素水解后生成的糖在碱性环境和加热的情况下将二价铜还原成一价铜，一价铜以Cu2O的形式沉淀出来。用碘量法测定Cu2O的量，从而计算出半纤维素的含量。测定还原性糖的铜碱试剂中含有KIO3和KI，它们在酸性条件下会发生反应，也不会干扰糖和铜离子的反应。加入酸以后，会发生反应释放出碘：KIO3+5KI+3H2SO4=3I2+3K2SO4+3H2O加入草酸以后，碘与氧化亚铜发生反应：Cu2O+I2+H2C2O4=CuC2O4+CuI2+H2O过剩的碘用Na2S2O3溶液滴定：2Na2S2O3+I2=Na2S4O6+2NaI3.木质素用1％的醋酸处理以分离出糖、有机酸和其它可溶性化合物。然后用丙酮处理，分离出叶绿素、拟脂、脂肪和其它脂溶性化合物。将沉淀用蒸馏水洗涤以后，在硫酸存在下，用重铬酸钾氧化水解产物中的木质素：C11H12O4+8K2Cr2O7+32H2SO4=11CO2+8K2SO4+8Cr2(SO4)3+32H2O过量的重铬酸钾用硫酸亚铁铵溶液滴定。方法和测定纤维素相同。实验所需试剂和仪器1.实验试剂硫酸亚铁铵分析纯，重铬酸钾分析纯，硫代硫酸钠分析纯，硝酸钙分析纯，硫酸铜分析纯，可溶性淀粉分析纯，碘酸钾分析纯，草酸分析纯，酒石酸分析纯，氯化钡分析纯，邻菲啰啉分析纯，浓硫酸分析纯，盐酸分析纯，冰醋酸分析纯，硝酸分析纯。2.实验仪器50mL酸式滴定管，50mL碱式滴定管，10mL离心试管若干，不同型号烧杯若干，真空塞，250mL锥形瓶若干，电炉，离心沉淀器。五实验步骤（一）纤维素含量的测定1.所需溶液硝酸和醋酸的混合液，0.5N重铬酸钾溶液，试亚铁灵指示剂(将邻苯二胺与甘油、硝基苯及浓硫酸一起加热，或改用8-氨基喹啉为原料，都可制备该品。试亚铁灵指示剂（1,10-菲绕啉）的配制方法：1.10-菲绕啉(1.10-phenanathrolinemonohydrate)指示剂溶液：溶解0.7g七水合硫酸亚铁(FeSO4.7H2O)于50mL的水中，加入1.5g1.10-菲绕啉，搅动至溶解，加水稀释至100mL。)0.1N硫酸亚铁铵溶液，浓硫酸，0.1N重铬酸钾溶液。2.实验步骤（1）配制所需的各种溶液，硫酸亚铁铵溶液在使用的一周内准备，并在使用当天测定其滴定度K。用该硫酸亚铁铵溶液滴定25mL0.1N的重铬酸钾溶液，用去mmL。K=25×0.1/m（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.06g，数值为n（3）装入离心管内，加入硝酸和醋酸的混合液5mL（4）塞住离心管，在沸水中煮沸25min，并定期搅拌（5）离心，倒去清液，加入蒸馏水离心洗涤沉淀，共洗三次（6）加入10mL0.5N的重铬酸钾溶液和8mL浓硫酸，搅匀，放入开水中10min，并定期搅拌（7）冷却，倒入锥形瓶中，用少许蒸馏水冲洗沉淀，滴入3滴试亚铁灵试剂，用0.1N的硫酸亚铁铵溶液滴定，用去bmL，由黄色经黄绿色至红褐色为终点（8）用0.1N的硫酸亚铁铵溶液单独滴定加入8mL浓硫酸和10mL0.5N重铬酸钾溶液，用去amL（9）生物质中纤维素的含量计算公式x%=0.675×K（a－b）/n0.05mol/L硫代硫酸钠溶液配制：用台秤称取Na2S2O3?5H2O12.5g和Na2CO30.5g，溶于1000mL经煮沸后冷却了的蒸馏水中，转移到试剂瓶中，摇匀，静置一周后，过滤备用。标定：利用上述（2）中配制的K2Cr2O7标准溶液来进行标定，用移液管移取25.00mL该K2Cr2O7标液三份，分别置于250mL锥形瓶中，加入5mL3mol/LHCl，1gKI，摇匀，置于暗处5分钟。待反应完全后，用蒸馏水稀释至50mL。用Na2S2O3溶液滴定至黄绿色，加入2mL淀粉溶液，继续滴定至溶液蓝色消失呈现浅绿色即为终点，记下所消耗的Na2S2O3溶液体积，计算Na2S2O3溶液的浓度。(mol/L)0.2942为K2Cr2O7的毫摩尔质量(g/mmol)为准确称取K2Cr2O7的质量(g)（二）半纤维素含量的测定1.所需溶液80%硝酸钙溶液，2N盐酸，酚酞指示剂，2N氢氧化钠溶液，碱性铜试剂草酸-硫酸混合液，0.5%淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液。2.实验步骤（1）称取自然风干的生物质粉末0.1-0.2g，数值为n（2）装入小烧杯中，加入15mL80%的硝酸钙溶液，盖好加热至沸腾，在慢慢沸腾的情况下加热5min（3）分步离心，分别用10mL热水洗涤沉淀三次（4）在沉淀中加入10mL2N的盐酸，搅匀，沸水浴中搅拌情况下微沸45min（5）离心，残渣分别用10mL蒸馏水冲洗三次，冲洗后的水溶液合并在离心液中（6）加入1滴酚酞，用2N氢氧化钠溶液中和到显橙红色（7）转入100mL的容量瓶，稀释到刻度（8）用干燥滤纸过滤到干燥烧杯中（9）移液管吸取10mL滤液，加入10mL碱性铜试剂，盖好在沸水中煮15min（10）冷却，加入5mL草酸-硫酸混合液，加入0.5mL0.5%淀粉，用0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去bmL（11）取10mL碱性铜试剂，加5mL草酸-硫酸混合液，再加10mL滤液，加入0.5mL0.5%的淀粉，0.01N硫代硫酸钠溶液滴定至蓝色消失，用去amL（12）生物质中半纤维素的含量计算公式x%=0.9×100[248－（a－b）]（a－b）/10000×10×n（三）木质素含量的测定1.所需溶液1%醋酸，丙酮，73%硫酸，10%氯化钡溶液，0.5N重铬酸钾溶液浓硫酸，0.1N硫酸亚铁铵溶液，试亚铁灵指示剂（称取1.485g邻菲罗啉(C12H8N2·H2O)放人烧杯中，加水30ml，温热至完全溶解，称取0.695g硫酸亚铁(FeSO4·7H2O)放入烧杯中加水溶解，移入邻菲罗啉溶液中混匀，用水稀释至100ml。2.实验步骤（1）标定新配的0.1N硫酸亚铁铵溶液,滴定度为K（2）称取自然风干的生物质粉末0.05-0.1g，数值为n（3）装入离心管，加入10mL1％醋酸，摇动5min混匀（4）离心，用5mL1％醋酸洗沉淀（5）加丙酮3-4mL，在摇荡的情况下浸泡3min，洗三次（6）用玻璃棒将沉淀沿管壁分散开，将离心管放热水中使沉淀充分干燥（7）在干燥沉淀中加入73％硫酸3mL，用玻璃棒搅匀，挤压成均匀的浆液（8）室温下放置一夜（9）加入10mL蒸馏水，搅匀，置沸水中5min（10）冷却，加入0.5mL10%氯化钡溶液，搅匀，离心，倒出清液，分别用10mL蒸馏水冲洗沉淀两次，每次要混匀（11）沉淀中加入10mL0.5N的重铬酸钾溶液和8mL浓硫酸，放入沸水不时搅拌15min（12）冷却，倒入锥形瓶中，用少许蒸馏水冲洗沉淀，滴入3滴试亚铁灵试剂，用0.1N的硫酸亚铁铵溶液滴定，用去bmL，由黄色经黄绿色至红褐色为终点（13）用0.1N的硫酸亚铁铵溶液单独滴定加入8mL浓硫酸的10mL0.5N重铬酸钾溶液，用去amL（14）生物质中木质素的含量计算公式x%=0.433×K（a－b）/n